茶色素對(duì)心肌缺血離體蟾蜍心臟活動(dòng)的預(yù)防作用

傅 雷 王子丹 劉克敏 孫藝平 遲鑫明 張冬梅 趙心宇

(大連醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧 大連 116044)

·基礎(chǔ)研究·

茶色素對(duì)心肌缺血離體蟾蜍心臟活動(dòng)的預(yù)防作用

傅 雷 王子丹 劉克敏 孫藝平 遲鑫明 張冬梅 趙心宇1

(大連醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，遼寧 大連 116044)

目的 觀察茶色素(TPs)預(yù)處理對(duì)心肌缺血離體蟾蜍心肌收縮力、心率和心電圖的影響。方法 選取50只蟾蜍隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組分為任氏液組和模型組。實(shí)驗(yàn)組分TPs預(yù)處理低、中和高劑量(200 mg/L、400 mg/L和800 mg/L)+垂體后葉素組。應(yīng)用BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)同時(shí)記錄離體蟾蜍心肌收縮力和心電圖曲線，并進(jìn)行心肌收縮力、心率和心電圖的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 垂體后葉素組與任氏液組比較，心肌收縮力、心率和心電圖QRS波峰值均明顯減小(均P<0.05)，心電圖T波峰值明顯增大(P<0.001)。灌流垂體后葉素與灌流不同濃度TPs比較：心肌收縮力，TPs為200 mg/L略有減小，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，TPs為400 mg/L和800 mg/L時(shí)明顯增加(P<0.05)；心率略有變化，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；心電圖，QRS波幅和T波峰值略有變化，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 一定濃度的TPs能預(yù)防由垂體后葉素引起的離體蟾蜍心臟活動(dòng)低下。

茶色素；垂體后葉素；心肌收縮力；心肌缺血

茶色素(TPs)是首先從綠茶中提取的一類水溶性酚性色素，分為茶黃素(TFs)、茶紅素(TRs)和茶褐素，并提出了TPs的分子式與結(jié)構(gòu)式。近些年對(duì)TPs的研究已有一定進(jìn)展，尤其是對(duì)冠心病、心絞痛、心肌梗死、心力衰竭、心律失常等多種心腦血管性疾病顯示出良好的療效〔1〕。董帥等〔2〕研究發(fā)現(xiàn)，TPs在低鈣和高鈣條件下對(duì)離體蟾蜍心肌收縮力有雙向調(diào)節(jié)保護(hù)作用。汪洋等〔3〕研究發(fā)現(xiàn)，這種保護(hù)作用可能與心肌細(xì)胞膜上的鈣離子通道、M受體及β受體有關(guān)，而在心肌缺血狀態(tài)下TPs對(duì)離體蟾蜍心臟活動(dòng)未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本文旨在觀察TPs預(yù)處理對(duì)離體蟾蜍心肌缺血心臟功能的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 中華蟾蜍50只，體重(85±25)g，由大連醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。所有蟾蜍分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組分為任氏液組和模型組；實(shí)驗(yàn)組分為低、中和高3個(gè)劑量TPs預(yù)處理+垂體后葉素組，分別是TPs 200、400、800 mg/L+垂體后葉素。每組10只蟾蜍。

1.2 試劑與儀器 TPs由江西綠色制藥有限公司生產(chǎn)并鑒定，鑒定TPs純度以游離兒茶素計(jì)36.27%，批號(hào)20150920。垂體后葉素，上海第一生化藥業(yè)有限公司，批號(hào)20140617。任氏液按標(biāo)準(zhǔn)配方配制，所用的NaCl、KCl、CaCl2等試劑均為化學(xué)純級(jí)試劑。BL-420S生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)和張力換能器由成都泰盟公司生產(chǎn)。

1.3 方法

1.3.1 模型制備 蛙心插管模型參照文獻(xiàn)〔4，5〕制備。按照文獻(xiàn)〔6〕方法，應(yīng)用含有垂體后葉素0.1 U/ml的任氏液灌流離體蟾蜍心臟制備心肌缺血模型。

1.3.2 給藥方法 任氏液組離體蟾蜍心臟只灌流任氏液；模型組為任氏液灌流基礎(chǔ)上改灌流含有垂體后葉素0.1 U/ml的任氏液；實(shí)驗(yàn)組先灌流不同濃度TPs(200、400、800 mg/L)，然后再灌流含有0.1 U/ ml垂體后葉素的任氏液。心室外容積始終固定為1.0 ml，每次換液穩(wěn)定后記錄40 min。

1.3.3 檢測(cè)指標(biāo) 取2個(gè)鐵支臺(tái)放置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，分別用于固定蛙心插管和張力換能器，參照文獻(xiàn)〔7〕同時(shí)記錄離體蟾蜍心肌收縮力和心電圖。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS19.0軟件行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 心肌缺血對(duì)離體蟾蜍心臟活動(dòng)的影響 在正常蟾蜍離體蛙心標(biāo)本灌流任氏液穩(wěn)定后，改灌流含有0.1 U/ml垂體后葉素任氏液溶液，換液前后比較心肌收縮力明顯減小(P<0.01)，心率明顯減少(P<0.05)，心電圖QRS波峰值明顯減小(P<0.001)，心電圖T波峰值明顯增大(P<0.001)。見(jiàn)表1，表2。

2.2 TPs對(duì)心肌缺血離體蟾蜍心臟活動(dòng)的影響

2.2.1 TPs預(yù)處理對(duì)心肌缺血離體蟾蜍心肌收縮力的影響 在正常蟾蜍離體蛙心標(biāo)本灌流任氏液穩(wěn)定后，改灌流含有不同濃度TPs任氏液后，換液前后心肌收縮力開(kāi)始增加，灌流含有200 mg/L TPs任氏液溶液后心肌收縮力略有增加，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而灌流含有400 mg/L或800 mg/L TPs的任氏液后心肌收縮力明顯增加(P<0.05)，見(jiàn)表1。在灌流含0.1 U/ml垂體后葉素任氏液之前，先灌流含有200 mg/L TPs的任氏液，心肌收縮力略有增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；而先灌流含有400 mg/L或800 mg/L TPs的任氏液，心肌收縮力顯著增加(P<0.05)。即一定濃度的TPs預(yù)處理對(duì)心肌缺血引起的心肌收縮力下降有對(duì)抗作用。

2.2.2 TPs預(yù)處理對(duì)心肌缺血離體蟾蜍心率的影響 在正常

表1 TPs預(yù)處理對(duì)心肌缺血離體蟾蜍心肌收縮力及心率的影響±s，n=10)

蟾蜍離體蛙心標(biāo)本灌流任氏液穩(wěn)定后，改灌流含有不同濃度TPs任氏液溶液，換液前后心率開(kāi)始增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。在灌流含0.1 U/ml垂體后葉素任氏液溶液之前，先灌流含有不同濃度TPs任氏液，心率略有增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。即一定濃度的TPs預(yù)處理對(duì)心肌缺血引起的心率下降有對(duì)抗作用。

2.2.3 TPs預(yù)處理對(duì)心肌缺血離體蟾蜍心電圖QRS波峰峰值的影響 在正常蟾蜍離體蛙心標(biāo)本灌流任氏液穩(wěn)定后，改灌流含有不同濃度TPs任氏液，心電圖QRS波略有增加，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在灌流含0.1 U/ml垂體后葉素任氏液溶液之前，先灌流含有不同濃度TPs任氏液，心電圖QRS波略有下降，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。即一定濃度的TPs預(yù)處理對(duì)心肌缺血引起的心電圖QRS波下降有對(duì)抗作用。

表2 TPs預(yù)處理對(duì)心肌缺血離體蟾蜍心電圖QRS波群及T波峰值的影響±s，n=10，mV)

與灌流任氏液時(shí)比較：1)P<0.05；2)P<0.001；下表同

2.2.4 TPs預(yù)處理對(duì)心肌缺血離體蟾蜍心電圖T波峰值的影響 在正常蟾蜍離體蛙心標(biāo)本灌流任氏液穩(wěn)定后，改灌流含有不同濃度TPs任氏液，換液前后心電圖T波峰值略有變化，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在灌流含0.1 U/ml垂體后葉素任氏液之前，先灌流含有不同濃度TPs任氏液，心電圖T波峰值略有變化，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表2。即一定濃度的TPs預(yù)處理對(duì)心肌缺血引起的心電圖T波峰值上升有對(duì)抗作用。

3 討 論

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，TPs能對(duì)抗心肌缺血后心臟活動(dòng)下降，起到對(duì)心肌缺血的預(yù)防作用。垂體后葉素是從動(dòng)物垂體中提取的，內(nèi)含加壓素和催產(chǎn)素，加壓素可以直接收縮小動(dòng)脈和毛細(xì)血管，使冠狀動(dòng)脈收縮從而升高血壓，造成心肌缺血。當(dāng)心肌急性缺血時(shí)，心室壁張力降低，引起心功能不全，心電圖和心率同樣會(huì)發(fā)生變化〔4〕，本實(shí)驗(yàn)與上述結(jié)果基本相符。

本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)TPs對(duì)心肌缺血離體蟾蜍有預(yù)防作用，這是因?yàn)門(mén)Ps具有清除氧自由基和抗氧化等作用〔8〕。有研究表明心肌缺血損傷發(fā)生的機(jī)制之一是組織局部氧自由基產(chǎn)生增加并集聚，且通過(guò)對(duì)膜的脂質(zhì)過(guò)氧化，加劇心肌損傷。心肌損傷后心肌超氧化物歧化酶(SOD)活性下降，心肌丙二醛(MDA)含量增高，SOD等氧自由基清除劑的增加可減輕心肌缺血〔9〕。氧自由基生成及脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)增強(qiáng)是心肌缺血損傷的主要機(jī)制之一〔10〕。TPs可以提高SOD的活力，降低MDA含量，削弱脂質(zhì)過(guò)氧化作用，清除氧自由基，增強(qiáng)心肌供氧和供血能力〔11〕。SOD活性增強(qiáng)能夠清除體內(nèi)過(guò)多的氧自由基，產(chǎn)生大量的氧分子，從而增加血液中氧分子含量，緩解缺氧缺血癥狀〔12〕。富麗等〔13〕通過(guò)鄰苯三酚自氧化和抗體外氫氧根法分別測(cè)定TPs和維生素C的抗氧化作用發(fā)現(xiàn)，雖然TPs不如維生素C降低自氧化速率的能力，但是TPs的體外抗氧化和抗自由基強(qiáng)于維生素C。TPs對(duì)心肌缺血更深入的機(jī)制探討尚待進(jìn)一步研究。

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〔2017-01-20修回〕

(編輯 曲 莉)

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81200155)

趙心宇(1966-)，女，碩士，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，主要從事臨床檢驗(yàn)基礎(chǔ)研究。

傅 雷(1965-)，男，碩士，高級(jí)實(shí)驗(yàn)師，主要從事循環(huán)和腎臟生理研究。

R54

A

1005-9202(2017)11-2601-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.11.001

1 檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)院