超聲引導(dǎo)細(xì)針抽吸細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢查對甲狀腺癌的診斷價值

戴維德，陳秀華，馬娜，王川予，吳明曉，陳嵐，何淑蓉，韓秀婕，郭發(fā)金

(北京醫(yī)院，a 超聲科,b 病理科,北京 100730)

·論著·

超聲引導(dǎo)細(xì)針抽吸細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢查對甲狀腺癌的診斷價值

戴維德a，陳秀華a，馬娜a，王川予a，吳明曉a，陳嵐b，何淑蓉b，韓秀婕a，郭發(fā)金a

(北京醫(yī)院，a 超聲科,b 病理科,北京 100730)

目的 探討超聲引導(dǎo)細(xì)針抽吸細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢查對于甲狀腺癌的診斷價值。方法 對54例甲狀腺結(jié)節(jié)患者進(jìn)行超聲引導(dǎo)下細(xì)針穿刺抽吸，所獲得標(biāo)本送細(xì)胞學(xué)檢查和組織塊免疫組織化學(xué)檢測。將穿刺病理結(jié)果與術(shù)后病理結(jié)果或隨訪結(jié)果進(jìn)行回顧性分析及對比。結(jié)果 穿刺取材成功率為96.3%(52/54)。52例患者中，47例細(xì)胞學(xué)檢查與細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢測聯(lián)合診斷結(jié)果與隨訪結(jié)果相符，臨床診斷符合率為90.4%(47/52)。細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果：甲狀腺癌36例，良性病變11例。術(shù)后病理或臨床隨訪結(jié)果：甲狀腺癌39例，良性病變13例。該技術(shù)對甲狀腺癌的診斷敏感度為92.3%(36/39)，特異度為100%(11/11)。結(jié)論 超聲引導(dǎo)細(xì)針抽吸細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢測技術(shù)對甲狀腺癌的診斷簡便實(shí)用、安全可靠、準(zhǔn)確率高。

甲狀腺腫瘤；活組織檢查，細(xì)針；免疫組織化學(xué)；超聲檢查

甲狀腺癌(TC)是最為常見的頸部惡性腫瘤[1]。如果能早期發(fā)現(xiàn)、早期治療，對于TC治療有重要的臨床意義。超聲引導(dǎo)細(xì)針穿刺細(xì)胞學(xué)檢查(UG-FNAC)是一種成熟的TC診斷方法[2]，具有快速、簡便、有效的特點(diǎn)。但仍有10%～40%的結(jié)節(jié)無法通過這項(xiàng)檢查得到明確診斷。因此探索新的TC診斷方法，從而提高TC的診斷水平，成為本研究領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。隨著分子診斷技術(shù)的進(jìn)步，甲狀腺結(jié)節(jié)分子標(biāo)志物檢測對于TC的診斷、預(yù)后甚至選擇合適的治療方案都具有重要的意義[3]。本研究通過對54例甲狀腺結(jié)節(jié)患者進(jìn)行超聲引導(dǎo)細(xì)針抽吸細(xì)胞學(xué)檢查的同時制作細(xì)胞塊，對其進(jìn)行分子標(biāo)志物的免疫組織化學(xué)檢測，評價該技術(shù)對于TC的診斷價值。

1 對象和方法

1.1 研究對象 選取2016年1月至2016年12月在我院門診及病房就診的甲狀腺結(jié)節(jié)患者54例，其中男13例，女41例；年齡23～65歲，平均年齡(43.6±3.2)歲。本組病例中甲狀腺結(jié)節(jié)直徑在0.3～1.5 cm。細(xì)針穿刺活檢實(shí)施指征：具有超聲可疑惡性征象中的一個或數(shù)個(形態(tài)不規(guī)則、縱橫比大于1、邊界模糊不清、極低回聲、微鈣化、中央型血流)。在行甲狀腺穿刺前常規(guī)檢測凝血功能、血常規(guī)；醫(yī)生向患者或其家屬詳細(xì)交代超聲引導(dǎo)穿刺的方法、目的、注意事項(xiàng)及可能的并發(fā)癥，并簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 設(shè)備器材 百勝M(fèi)ylab90型彩色多普勒超聲成像系統(tǒng)，探頭頻率5～12 MHz。穿刺器材：10 mL一次性注射器和25G空針各2支。

1.2.2 超聲引導(dǎo)下穿刺取材 患者取仰臥位或側(cè)臥位，充分顯露穿刺部位，先進(jìn)行常規(guī)甲狀腺超聲檢查，選擇最佳穿刺點(diǎn)、測量進(jìn)針深度并完成體表定位。穿刺部位常規(guī)消毒鋪巾，2%利多卡因局部麻醉后，手持10 mL注射器接25G針頭，在彩色多普勒超聲引導(dǎo)下避開大血管、神經(jīng)及氣管等重要組織和臟器，進(jìn)針到達(dá)腫塊邊緣。穿刺入腫塊內(nèi)后，提拉注射器針芯至2 mL刻度處，使注射器保持負(fù)壓狀態(tài)，反復(fù)旋轉(zhuǎn)抽吸3～5次后改變進(jìn)針方向，使針頭在腫塊內(nèi)呈扇形朝不同方向抽吸，當(dāng)注射器乳頭內(nèi)出現(xiàn)吸取物后，去負(fù)壓退針。一部分吸取物常規(guī)涂片2～3張，置入95%乙醇固定液中送檢。一部分注入液基薄層細(xì)胞學(xué)檢測(TCT)小瓶中并送檢。穿刺部位無菌紗布覆蓋并以適當(dāng)力量壓迫穿刺點(diǎn)10 min。觀察20 min無不良反應(yīng)方可離開。

1.3 免疫組織化學(xué) 抗體選用細(xì)胞周期l蛋白(CyclinDl)和CD117。將細(xì)胞塊脫蠟和水化，胰酶抗原修復(fù)，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶。先加入CyclinD1/CD117抗體,再加入加酶標(biāo)聚合物。隨后顯色、復(fù)染、梯度乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠和蓋玻片封片。

1.4 結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn) Cyclin D1的陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核。CD117的陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿。陽性細(xì)胞著色特征為棕黃色或棕褐色細(xì)顆粒樣分布。評分標(biāo)準(zhǔn)采用半定量積分法，將染色強(qiáng)度分3級：無著色記1分，淺著色記2分，棕黃色或棕褐色記3分；陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。上述兩項(xiàng)評分的乘積為最后得分：0～1分為陰性(-)；2～3分為陽性(+～++)；≥4分為強(qiáng)陽性(+++)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)病例取材成功率、臨床診斷符合率。評價超聲引導(dǎo)細(xì)針抽吸細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)技術(shù)對于TC診斷的敏感度、特異度。

2 結(jié)果

2.1 超聲引導(dǎo)細(xì)針抽吸細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果 本組病例穿刺取材成功率為96.3%(52/54)。穿刺細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)結(jié)果：TC 36例，甲狀腺良性病變11例，5例無法診斷。術(shù)后病理或臨床隨訪結(jié)果：TC 39例，良性病變13例。

2.2 超聲引導(dǎo)細(xì)針抽吸細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢測評價TC 超聲引導(dǎo)細(xì)針抽吸細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢測對TC的診斷敏感度為92.3%(36/39)，特異度為100%(11/11)。臨床診斷符合率為90.4%(47/52)。見表1。

表1 超聲引導(dǎo)細(xì)針抽吸細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢測診斷TC(例)

3 討論

甲狀腺結(jié)節(jié)是一種常見疾病，臨床發(fā)現(xiàn)的甲狀腺結(jié)節(jié)有5%～10%為TC[4]，占癌癥死亡病例的0.4%。FNAC簡便、快速、準(zhǔn)確，已經(jīng)成為臨床診斷甲狀腺結(jié)節(jié)的首選檢查方法，TC有其典型的細(xì)胞學(xué)特征，包括核溝、核內(nèi)包涵體、核重疊、及核異型等細(xì)胞核改變，而具備這些特征對于TC的明確診斷具有決定意義。但仍有少部分FNAC檢查結(jié)果模棱兩可，無法對結(jié)節(jié)性質(zhì)予以確診。隨著分子診斷技術(shù)的不斷提高，對與TC相關(guān)的分子標(biāo)志物的研究也越來越深入，這些標(biāo)志物對于TC的診斷、預(yù)后、治療方案的選擇發(fā)揮重要作用[5]。本研究在超聲引導(dǎo)下，行甲狀腺結(jié)節(jié)細(xì)針穿刺并制作細(xì)胞塊，對其進(jìn)行CyclinDl和CD117的免疫組織化學(xué)檢測，研究其在TC診斷與鑒別診斷方面的診斷價值和臨床意義。

CyclinD1屬于細(xì)胞周期蛋白家族，是一種重要的細(xì)胞周期正性調(diào)控因子。它主要在細(xì)胞周期G1進(jìn)人S期過程中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。正常生理狀態(tài)下，CyclinD1在細(xì)胞進(jìn)入S期后會快速裂解。如未發(fā)生裂解而表現(xiàn)為過表達(dá)，細(xì)胞周期的正常發(fā)展過程隨之會受到影響；表現(xiàn)為細(xì)胞增殖加快，從Gl期快速進(jìn)入S期，最終發(fā)生癌變。研究發(fā)現(xiàn) CyclinD1的過表達(dá)與TC的發(fā)生、發(fā)展及不良預(yù)后密切相關(guān)，可作為鑒別甲狀腺結(jié)節(jié)良、惡性及評估TC侵襲、轉(zhuǎn)移能力的分子指標(biāo)[6-8]。CD117是Ⅲ型跨膜酪氨酸激酶受體家族成員，在人體多種細(xì)胞中表達(dá)。CD117在胃腸道間質(zhì)腫瘤、精原細(xì)胞瘤、腺樣囊性癌等多種腫瘤的診斷與鑒別診斷中發(fā)揮重要作用。研究表明，CD117在TC的表達(dá)率顯著降低，其表達(dá)水平與CyclinD1完全相反[9]。兩者聯(lián)合可以顯著提高TC良惡性鑒別的準(zhǔn)確性。

細(xì)胞塊作為細(xì)胞學(xué)診斷重要手段之一，與傳統(tǒng)的細(xì)胞涂片相比，細(xì)胞集中，背景清晰?？朔藗鹘y(tǒng)涂片細(xì)胞堆積重疊擁擠、厚薄不均等現(xiàn)象，進(jìn)一步提高了細(xì)胞學(xué)診斷的陽性率。細(xì)胞塊可以連續(xù)切片，標(biāo)本易于保存，能做免疫組織化學(xué)染色、特殊染色或分子病理學(xué)檢測。而免疫組織化學(xué)技術(shù)是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理—抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原，對其進(jìn)行定位、定性及相對定量的研究，結(jié)果準(zhǔn)確、客觀。近年來，免疫組織化學(xué)技術(shù)逐步發(fā)展成為臨床病理診斷不可缺少的技術(shù)手段[10-13]。

本研究中，超聲引導(dǎo)細(xì)針抽吸取得的細(xì)胞塊，選取CyclinD1和CD117進(jìn)行免疫組織化學(xué)標(biāo)記染色，可進(jìn)一步明確甲狀腺結(jié)節(jié)的良惡性 。本研究中，細(xì)針取材僅有2例不滿意，成功率為96.3%。47例細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果與隨訪結(jié)果相符，臨床診斷符合率為90.4%。細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)結(jié)果與手術(shù)病理或臨床隨訪結(jié)果比較，該技術(shù)對TC的診斷敏感度為92.3%(36/39)，特異度為100%(11/11)。表明細(xì)針抽吸細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢測技術(shù)對TC的術(shù)前診斷和鑒別診斷具有較高的應(yīng)用價值，尤其適用于單純FNAC診斷不明確的病例。

總之，UG-FNAC標(biāo)本細(xì)胞學(xué)檢查結(jié)合細(xì)胞塊免疫組織化學(xué)檢查技術(shù)簡便實(shí)用、安全，患者依從性好，具有較高的臨床診斷符合率和敏感度。

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The evaluation of ultrasound-guided fine needle aspiration cytology combined with cell block immunohistochemistry in the diagnosis of thyroid carcinoma

Dai Weide*,Chen Xiuhua,Ma Na,Wang Chuanyu,Wu Mingxiao,Chen Lan，He Shurong，Han Xiujie，Guo Fajin

(*Department of Ultrasound,Beijing Hospital,Beijing 100730,China)

GuoFajin,Email:guofajinbh@163.com

Objective To evaluate the clinical value of ultrasound-guided fine needle aspiration cytology combined with cell block immunohistochemistry in diagnosing thyroid carcinoma.Methods Thyroid nodules of 54 patients were punctured and aspirated by using fine needle under ultrasound-guided.The obtained samples were tested for cytology and cell block was detected by immunohistochemistry.The conclusions and the follow-up results were retrospectively analyzed and compared.Results The puncture success rate of this group was 96.3%(52/54).Among 52 patients,the results of the cytology combined with cell block immunohistochemistry of 47 cases were consistent with follow-up results.The coincidence rate of clinical diagnosis was 90.4%(47/52).The diagnose results of cytology combined with cell block immunohistochemistry:36 cases of thyroid carcinoma,11 cases of benign lesion.The pathology diagnoses results after operation or follow-up:39 cases of thyroid carcinoma,13 cases of benign lesion.The sensitivity and specificity of diagnose was 92.3%(36/39) and 100%(11/11),respectively.Conclusion Ultrasound-guided fine needle aspiration cytology combined with cell block immunohistochemical diagnosis of thyroid carcinoma is simple,practical,safe and reliable.

Thyroid neoplasms；Biopsy,fine-needle;Immunohistochemistry；Ultrasonography

國家科技支撐計(jì)劃課題(2014BAI08B03)

戴維德，主任醫(yī)師，Email：dai.weide@126.com

郭發(fā)金，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，Email:guofajinbh@163.com

R736.1

A

10.3969/J.issn.1672-6790.2017.03.001

2017-01-13)