射頻消融術(shù)對(duì)原發(fā)性肝癌患者甲胎蛋白和外周血CD4 + CD25 + Foxp3 + Treg 細(xì)胞的影響

崇楊，江濤，張冬華，王兵濟(jì)，王軒*

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，江蘇 南京210023;2.解放軍第81 醫(yī)院腫瘤外科，江蘇 南京210002)

射頻消融術(shù)(radiofrequency ablation，RFA)是近年發(fā)展起來(lái)的一種治療肝癌的新興手段，具有微創(chuàng)、痛苦少、治療確切、耗時(shí)短、并發(fā)癥少、可重復(fù)治療等優(yōu)點(diǎn)，日益受到臨床的重視［1]。RFA 為位置深在的較小病灶或肝功能差無(wú)法耐受手術(shù)的患者提供了可靠的治療手段。眾所周知，在肝癌的治療中，機(jī)體免疫功能尤其是細(xì)胞免疫功能對(duì)預(yù)后起到重要的作用。Forkhead 家族叉頭翼狀螺旋轉(zhuǎn)錄因子(Foxp3)組成性表達(dá)CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞，是真正意義上的調(diào)節(jié)性T 淋巴細(xì)胞，對(duì)機(jī)體免疫起著決定性的作用［2]。研究表明Treg 細(xì)胞在腫瘤患者外周血和腫瘤組織中升高［3]，而且比例越高，腫瘤患者的預(yù)后越差［4]。本文擬觀察RFA 治療前后原發(fā)性肝癌患者CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞的變化，探討其用于判斷肝癌預(yù)后的臨床價(jià)值。

1 對(duì)象與方法

1.1 病例

選擇2011年6月至2012年6月期間在我科行經(jīng)皮肝穿刺RFA 治療的58例原發(fā)性肝癌患者，其中男40例，女18例。年齡38 ～79 歲，中位年齡(57.5 ± 6.5)歲。肝癌病灶1 ～3 枚，病灶直徑2 ～5 cm，平均3.2 cm。所有患者均按2011年版原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)［5]臨床診斷為原發(fā)性肝癌或行肝穿活檢病理學(xué)明確診斷。

1.2 治療設(shè)備

多電極射頻消融系統(tǒng)(S-1500 射頻治療儀，上海邁德醫(yī)療科技公司)，主頻460 kHz，輸出功率1 ～90 W 連續(xù)可調(diào)，術(shù)中阻抗變化和組織凝固性壞死程度由主機(jī)自動(dòng)測(cè)試完成。配套使用該公司的VITA(10-161361)型多電極射頻針，穿刺后可呈傘狀均勻張開(kāi)10 枚電極，展開(kāi)最大直徑為4.0 cm。若病灶較大者按重疊消融原理多次反復(fù)穿刺消融以最大限度滅活病灶。

1.3 檢測(cè)方法

于術(shù)前、術(shù)后1月分別抽血送檢，采用流式細(xì)胞計(jì)數(shù)儀(XL/XL-MCL，美國(guó)貝克曼公司)檢測(cè)CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值及CD4+/CD8+比值。采用全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀(ACCESS，美國(guó)貝克曼公司)檢測(cè)甲胎蛋白含量。術(shù)后1月隨訪，行彩超、超聲造影、CT、MRI 等檢查明確有無(wú)肝內(nèi)、肝外復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移。

1.4 療效標(biāo)準(zhǔn)

均按衛(wèi)生部辦公廳公布的《腫瘤射頻消融治療技術(shù)管理規(guī)范》療效標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià):射頻消融后1 個(gè)月左右，采用對(duì)比增強(qiáng)CT/MRI 或超聲造影判定腫瘤是否被完全消融。獲得完全消融的病灶表現(xiàn)為完全無(wú)血供即影像學(xué)表現(xiàn)為無(wú)增強(qiáng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有檢測(cè)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，應(yīng)用SPSS 13.0 統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。兩個(gè)獨(dú)立樣本間采用Wilcoxon 檢驗(yàn)，術(shù)前術(shù)后兩樣本間采用配對(duì)t檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 療效

本組所有患者經(jīng)過(guò)射頻消融治療后無(wú)死亡病例，無(wú)射頻消融相關(guān)手術(shù)并發(fā)癥，均于術(shù)后1月正常隨訪和完成檢查、檢驗(yàn)，無(wú)失訪。這58例患者中術(shù)前甲胎蛋白正常者4例，甲胎蛋白值10 ～400μg/L者30例，甲胎蛋白值＞400 μg/L 者24例。術(shù)后復(fù)查所有病灶完全消融者39例，不完全消融者5例，發(fā)現(xiàn)新病灶者8例。術(shù)后1月甲胎蛋白恢復(fù)正常者38例，甲胎蛋白部分降低但未達(dá)到正常范圍者16例，未降低反而增高者4例。

2.2 術(shù)前甲胎蛋白與CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞的關(guān)系

如果將術(shù)前甲胎蛋白值按800 μg/L 進(jìn)行分組來(lái)觀察CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值及CD4+/CD8+比值兩項(xiàng)細(xì)胞免疫指標(biāo)，我們發(fā)現(xiàn) 甲胎蛋白明顯升高組的患者CD4+/CD8+比值顯著降低，CD4+CD25+Foxp3+Treg 明顯增高，兩指標(biāo)在兩組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 術(shù)前甲胎蛋白與CD4 +CD25 +Foxp3 + /CD4 +變化

2.3 RFA 后甲胎蛋白恢復(fù)正常患者CD4+CD25+Foxp3+ /CD4+的變化

術(shù)后1月甲胎蛋白恢復(fù)正常的38例外周血中CD4+/CD8+比值未見(jiàn)明顯變化，但射頻消融后CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)表2。

表2 甲胎蛋白恢復(fù)正?；颊咧蠧D4 +CD25 +Foxp3 + /CD4 +的變化

2.4 甲胎蛋白部分降低但未達(dá)到正常范圍患者CD4+CD25+Foxp3+ /CD4+的變化

本組射頻消融術(shù)后有16例患者甲胎蛋白有所下降，但未達(dá)正常水平。這部分病例CD4+/CD8+比值在射頻前后變化不明顯，但CD4+CD25+Foxp3+/CD4+在射頻消融后明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表3。

2.5 術(shù)后甲胎蛋白增高患者CD4+CD25+Foxp3+ /CD4+的變化

有4例患者術(shù)后甲胎蛋白不降反增，其CD4+CD25+Foxp3+/CD4+及CD4+/CD8+均變化不明顯。見(jiàn)表4。

表3 甲胎蛋白部分降低但未達(dá)到正常范圍患者CD4 +CD25 +Foxp3 + /CD4 +在射頻前后的變化

3 討論

目前常規(guī)治療原發(fā)性肝癌的方法如手術(shù)切除、肝動(dòng)脈插管化療栓塞術(shù)對(duì)機(jī)體的免疫功能干擾大，手術(shù)后早期出現(xiàn)明顯的免疫抑制，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，增加了腫瘤的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)率［6]，對(duì)肝癌患者不利。射頻消融治療原發(fā)性肝癌的療效已得到臨床上的肯定，有文獻(xiàn)認(rèn)為有增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能的作用［7]。

CD4+細(xì)胞為輔助性T 細(xì)胞，幫助完成抗腫瘤免疫，在協(xié)同清除、消滅腫瘤細(xì)胞方面有重要作用，CD4+細(xì)胞減少可使腫瘤發(fā)生免疫逃逸，CD8+細(xì)胞增多往往引起細(xì)胞免疫功能損害，我們常通過(guò)CD4+/CD8+比值來(lái)反映細(xì)胞免疫功能［8]。腫瘤患者的細(xì)胞免疫缺陷與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后密切相關(guān)［9]，本研究結(jié)果中我們發(fā)現(xiàn)甲胎蛋白顯著升高組的患者CD4+/CD8+比值異常增高，也同樣反映了這個(gè)問(wèn)題。但我們發(fā)現(xiàn)CD4+/CD8+比值在消融術(shù)后短期內(nèi)未見(jiàn)明顯變化，因此無(wú)法作為即時(shí)反映免疫功能變化的參考指標(biāo)。

Sakaguchi 等［10]首次定義CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞的概念后，越來(lái)越多證據(jù)表明CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞是具有免疫抑制作用的真正意義上的Treg 細(xì)胞，F(xiàn)oxp3 在Treg 細(xì)胞發(fā)育和發(fā)揮功能的過(guò)程中起決定作用。于榮等［11]的研究表明CD4+CD25+Foxp3+Treg 可在有效治療后明顯下降，并建議將其作為評(píng)估療效的重要預(yù)測(cè)指標(biāo)之一。本研究檢測(cè)了射頻消融術(shù)前術(shù)后CD4+CD25+Foxp3+/CD4+比值的變化，結(jié)果顯示RFA 治療后外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞出現(xiàn)顯著變化，在術(shù)后甲胎蛋白恢復(fù)正常的患者中CD4+CD25+Foxp3+Treg 在射頻治療后1月迅速下降，提示RFA后細(xì)胞免疫功能得以恢復(fù)或者是抗腫瘤免疫的增強(qiáng)，因此我們認(rèn)為射頻消融可通過(guò)免疫途徑對(duì)機(jī)體產(chǎn)生積極影響。

綜上所述，本研究提示CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞在射頻消融治療前后的變化與甲胎蛋白存在相關(guān)性，對(duì)肝癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞水平的監(jiān)測(cè)，不但有利于了解患者的免疫狀態(tài)，對(duì)肝癌的預(yù)后評(píng)估也具有重要的意義。因本研究例數(shù)較少，CD4+CD25+Foxp3+Treg 細(xì)胞的水平變化能否成為一種預(yù)后預(yù)測(cè)指標(biāo)，需要今后作進(jìn)一步的研究。

［1]Lu MD，Xu HX，Xie XY，et al. Percutaneous microwavl and radiofrequency ablation for hepatocellular cracinoma:a retrospective comparative study［J]. Gastoenterol，2005，40(11):1054-1056.

［2]Khattri R，Cox T，Yasayko SA，et al. An essential role for Scurfin in CD4+CD25+T regulatory cells［J]. Nat Immunol，2003，4(4):337-342.

［3]Fu J，Xu D，Liu Z，et al. Increased regulatory T cells correlate with CD8 T-cell impairment and poor survival in hepatocellular carcinoma patients［J]. Gastroenterology，2007，132(7):2328-2339.

［4]Curiel TJ，Coukos G，Zou L，et al. Specific recruitment of regulatory T cells in ovarian carcinoma fosters immune privilege and predicts reduced survival［J]. Nat Med，2004，10(9):942-949.

［5]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部. 原發(fā)性肝癌的診療規(guī)范(2011年版)摘要［J]. 中華肝臟病雜志，2012，20(6):419-426.

［6]孫婧婧，吳孟超.肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制［J].中國(guó)實(shí)用外科雜志，2000，20(3):176-178.

［7]Alessandro Z，Massimo P，Amalia P，et al.Radiofrequency thermal ablation of hepatocellular carcinoma liver nodules responses［J].Cancer Res，2006，66(23):1139-1146.

［8]溫江濤，孫林，劉海紅.胃癌患者外周血T 淋巴細(xì)胞及NK 細(xì)胞檢測(cè)的臨床意義［J]. 江蘇大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2006，16(2):145-147.

［9]付白清，吳朝陽(yáng)，許亞平，等. 食管癌患者外周血CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞檢測(cè)及其臨床意義［J]. 江蘇大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版，2008，18(6):532-534.

［10]Sakaguchi S，Sakaguchi N，Asano M，et al. Immunological self-tolerance maintained by activated T cells expressing IL-2 receptor α-chains (CD25):Breakdown of single mechanism of self-tolerance causes various autoimmunediseases［J].J Immunol，1995，155(3):1151-1164.

［11]于榮，候建青.紫杉醇聯(lián)合鉑類化療對(duì)晚期卵巢上皮細(xì)胞癌患者CD4+CD25+Foxp3+細(xì)胞的影響及意義［J].濱州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，35(4):248-250.