手足口病患者不同標(biāo)本中腸道病毒檢測結(jié)果分析

陳贊+梁小鳳

[摘要] 目的 比較手足口病患者不同標(biāo)本中的腸道病毒檢測結(jié)果。方法 方便選取該中心2014年1月—2016年12月手足口病輕癥病例監(jiān)測檢查中120例肛拭子標(biāo)本以及112例咽拭子標(biāo)本作為研究對象，分別檢測兩種標(biāo)本中的腸道病毒通用型（EV）、腸道病毒71型（EV71）以及柯薩奇病毒A16型（CoxA16）的陽性率。結(jié)果 肛拭子標(biāo)本中EV、EV17、CoxA16陽性率分別為91.67%、43.33%、26.67%均高于咽拭子標(biāo)本陽性率86.60%、38.39%、21.43%，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 肛拭子標(biāo)本以及咽拭子標(biāo)本的陽性檢出率差異較小，臨床可根據(jù)患者具體情況選擇適當(dāng)?shù)牟杉绞健?/p>

[關(guān)鍵詞] 手足口??；標(biāo)本；腸道病毒；檢測結(jié)果

[中圖分類號] R512.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-0742（2017）04（a）-0056-03

Analysis of Test Results of Enterovirus in Different Specimens in Patients with Hand-foot-and-mouth Disease

CHEN Zan， LIANG Xiao-feng

Baise Disease Control and Prevention Center， Baise， Guangxi， 533000 China

[Abstract] Objective To compare the test results of enterovirus in different specimens in patients with hand-foot-and-mouth disease. Methods 120 cases of anal swab specimens and 112 cases of pharyngo swab specimens in the mild case monitoring and examination of hand-foot-and-mouth disease from January 2014 to December 2016 were conveniently selected as the research objects and the positive rate of EV， EV71 and CoxA16 of the two specimens was respectively tested. Results The positive rate of EV， EV71， CoxA16 in the anal swab specimens was higher than that in the pharyngo swab specimens， but the difference was not statistically significant（91.67%，43.33%，26.67% vs 86.60%，38.39%，21.43%）（P>0.05）. Conclusion The difference in the positive test rate between the anal swab specimens and pharyngo swab specimens is small， and we can select the proper collection method according to the practical conditions in clinic.

[Key words] Hand-foot-and-mouth disease； Specimen； Enterovirus； Test result

手足口病多發(fā)于兒童，主要表現(xiàn)為患者的手、足以及口部出現(xiàn)水皰或皮疹，并伴有低熱、腹痛、流涎以及拒食等臨床癥狀[1]。該病多由腸道病毒所引起[2]，病情發(fā)展較快，傳染性較高，若不及時(shí)治療，將導(dǎo)致患者出現(xiàn)呼吸以及神經(jīng)系統(tǒng)損害甚至死亡，嚴(yán)重影響患者的生長發(fā)育以及生命健康。因此，對患者進(jìn)行及時(shí)準(zhǔn)確地診斷，使患者及早得到對癥治療意義重大。臨床對手足口病一般通過實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行診斷，咽拭子標(biāo)本以及肛拭子標(biāo)本檢測使其常用方法，究竟哪種方法檢測更為準(zhǔn)確，該研究方便選取2014年1月—2016年12月手足口病輕癥病例監(jiān)測檢查中的120例肛拭子標(biāo)本以及112例咽拭子標(biāo)本作為研究對象，觀察兩組標(biāo)本的腸道病毒檢測情況，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

方便選取百色市疾病預(yù)防控制中心手足口病病例監(jiān)測檢查中的120例肛拭子標(biāo)本以及112例咽拭子標(biāo)本。標(biāo)本來源以縣區(qū)為單位，各地每月最少需采集5例首次就診的普通手足口病病例的標(biāo)本，以及對所有暴發(fā)疫情、聚集性病例均要采集的標(biāo)本開展病原學(xué)監(jiān)測。所有患者均符合下列納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合《手足口病預(yù)防控制指南》[3]中手足口病的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)：實(shí)驗(yàn)室血清學(xué)檢查無顯著異常；②臨床癥狀表現(xiàn)為低熱、腹痛、手足口部位有皮疹或水皰者；③簽訂知情同意書并積極配合者；④年齡<7歲。其中肛拭子標(biāo)本男65例，女55例，年齡5個(gè)月～7歲，平均（2.12±1.13）歲，咽拭子標(biāo)本男59例，女53例，年齡6個(gè)月～7歲，平均（2.36±1.21）歲，兩組受檢患者一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

1.2 方法

將采集的肛拭子標(biāo)本以及咽拭子標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測，采用MagPure Viral RNA KF Kit核酸提取試劑盒提取標(biāo)本中核酸樣本，MagPure Viral RNA KF Kit采用高結(jié)合力的納米磁性粒子純化方式。取樣品50 μL在裂解液作用下裂解消化，RNA釋放到裂解液中。加入乙醇和磁性粒子吸附RNA，而蛋白質(zhì)則不被吸附而去除。吸附了RNA的粒子經(jīng)洗滌液洗滌去除蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，經(jīng)高濃度的乙醇液洗滌去除鹽分，最后RNA被50 μL DEPC處理水洗脫。把洗脫后得到的純化產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中。再采用江蘇碩士生物科技有限公司柯薩奇病毒A16、腸道病毒71型和腸道病毒通用型核酸檢測試劑按比例配制好反應(yīng)液，每個(gè)PCR反應(yīng)管中加入配制好的20 μL反應(yīng)液，再分別加入純化好的待檢標(biāo)本RNA、陰性參考品、陽性參考品各5 μL，蓋緊管蓋，瞬時(shí)低速離心。將反應(yīng)管放入美國ABI 7500熒光定量PCR儀對病毒進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量檢測，參數(shù)設(shè)定為逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)50℃ 30 min/次、預(yù)變性95℃ 5 min/次、變性95℃ 10 s。FAM通道為CoxA16，VIC通道為EV71，ROX通道為通用型。陽性判斷：標(biāo)本檢測結(jié)果Ct≤35，線性呈S型且有明顯指數(shù)增長期；可疑：標(biāo)本檢測結(jié)果3538或未檢出，則結(jié)果判斷為陰性。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察記錄兩種標(biāo)本中腸道病毒通用型（EV）、腸道病毒71型（EV71）以及柯薩奇病毒A16（CoxA16）檢測的陽性例數(shù)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用[n（%）]表示計(jì)數(shù)資料，采用χ2檢驗(yàn)；使用Kappa進(jìn)行一致性檢驗(yàn)，以α=0.05為準(zhǔn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

肛拭子標(biāo)本檢測中EV、EV71以及CoxA16陽性率高于咽拭子標(biāo)本，比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3 討論

手足口病一般由腸道病毒引起，患者以及隱性感染者為主要傳染源，主要通過糞便、食物、唾液以及空氣飛沫傳播[4]。其可發(fā)生在較低齡年齡段[5]，但由于嬰幼兒免疫力較差，故而臨床發(fā)病多見1～3歲兒童[6]。相關(guān)研究顯示，該病發(fā)展迅速，其中EV71病毒感染甚至對患者的中樞神經(jīng)造成影響，嚴(yán)重影響患兒的生長發(fā)育水平，由此病毒造成的腦干腦炎以及神經(jīng)源性肺水腫是其主要致死原因。而目前臨床不同標(biāo)本間腸道病毒的陽性檢出率有所不同，在相關(guān)研究中[7]，糞便和咽拭子標(biāo)本腸道病毒總陽性率分別為86.7%、77.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.92，P=0.027）；72例配對標(biāo)本結(jié)果同為陽性的54例，同為陰性的11例，糞便陽性、咽拭子陰性為7例，糞便陰性、咽拭子陽性為0例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Mc Nemar P=0.016）；72例配對標(biāo)本定量結(jié)果顯示糞便標(biāo)本中病毒含量高于咽拭子標(biāo)本（t=6.924，P=0.000）。結(jié)論糞便標(biāo)本中腸道病毒檢出率高于咽拭子標(biāo)本，且病毒載量也高于咽拭子標(biāo)本。

該研究結(jié)果顯示，肛拭子標(biāo)本檢測中EV、EV71以及CoxA16陽性率略高于咽拭子標(biāo)本，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且兩種標(biāo)本檢測中EV、EV71以及CoxA16陽性檢出率與上述研究結(jié)果相差無幾，肛拭子標(biāo)本與咽拭子標(biāo)本檢出率具有正向一致性，體現(xiàn)出兩種標(biāo)本檢測準(zhǔn)確度相當(dāng)，均可有效檢測病原體。另有相關(guān)研究顯示[8]，咽拭子標(biāo)本檢測靈敏度高于肛拭子標(biāo)本檢測，且臨床操作簡便，應(yīng)用廣泛。但由于該研究受研究方法、研究條件以及實(shí)際操作等條件限制，可能與其他研究存在不同，還需以后進(jìn)行大型專業(yè)研究以確保研究效果。兩種檢測方法臨床操作均較為簡便，但考慮到患者多為兒童，應(yīng)用咽拭子檢測可能導(dǎo)致患者依從性不佳，從而出現(xiàn)標(biāo)本采集不便以及患者哭鬧等現(xiàn)象，而冬天患者身著衣物較多，肛拭子標(biāo)本采集將受到一定限制，故而臨床標(biāo)本采集應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況擇優(yōu)而選，以提高臨床標(biāo)本檢測的準(zhǔn)確度，提高陽性檢出率。

綜上所述，咽拭子標(biāo)本以及肛拭子標(biāo)本應(yīng)用于臨床手足口病患者的檢測之中，均可有效檢測出腸道病毒，EV、EV71以及CoxA16的陽性檢出率差異不大，臨床可通過結(jié)合實(shí)際情況適當(dāng)選擇方便有效的方法進(jìn)行檢測，提高臨床檢測準(zhǔn)確度，使患者得到正確有效治療，減少病情發(fā)展對身體的損害，促進(jìn)其早日康復(fù)。

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（收稿日期：2017-01-09）