高效液相色譜法測定水產(chǎn)品中喹乙醇的殘留量

劉文俠　鄭景嬌

摘 要：為測定水產(chǎn)品中喹乙醇的殘留量，建立了高效液相色譜-固相萃取的測定方法。此方法檢出限低、回收率高、定性可靠、定量準確，適合于水產(chǎn)品中喹乙醇殘留的檢測。對采用固相萃取凈化、反相色譜柱分離、紫外檢測器檢測、外標法定量檢測水產(chǎn)品樣品進行實驗。

關鍵詞：水產(chǎn)行業(yè)；液液萃??；殘留量；高效液相色譜法

中圖分類號：O657.7+2 文獻標識碼：A DOI：10.15913/j.cnki.kjycx.2017.09.137

喹乙醇，又稱“喹酰胺醇”，是一種化學合成抗菌促生長的飼料添加劑，可促進動物生長，提高飼料轉化率和利用率，被廣泛用于水產(chǎn)養(yǎng)殖動物飼料添加劑中，它對魚類致病菌均有較好的抑制作用，可用于淡水養(yǎng)殖魚類敗血癥等病癥的防治。但是喹乙醇添加過量會引起中毒，且對大部分動物有致畸作用，對人類也有潛在的“三致”作用。為保證食品安全及我國水產(chǎn)品的質(zhì)量安全，建立有效的水產(chǎn)品中喹乙醇的測量方法十分必要。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

實驗儀器：液相色譜儀（島津HPLC-20AD），配SPD-20AV紫外檢測器；HU3120B超聲波清洗器（天津恒奧）；VTX3000L漩渦混勻器（日本EYELA公司）；TDL-5-A臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；固相萃取儀（上海安譜）。

實驗試劑：喹乙醇（純度99.0%，Dr.Ehrenstorfer公司）。先用少量水溶解，再用色譜純甲醇溶解配制成100 mg/L標準儲備液，再根據(jù)需要用體積分數(shù)為15%的甲醇溶液稀釋成合適的標準工作液，4 ℃避光保存。

1.2 色譜條件

色譜柱為WondaSil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），色譜柱溫度為35 ℃。流動相：體積分數(shù)為15%的甲醇溶液，流速1.0 mL/min。檢測器波長380 nm，進樣量20 μL。

1.3 實驗方法

1.3.1 提取

稱取混合均勻的勻漿試樣10 g（精確至0.01 g）于50 mL離心管中，加入10 mL體積分數(shù)為5%的甲醇溶液，超聲提取10 min，以5 000 r/min離心10 min；上清液轉移至另一50 mL離心管中，重復提取一次，合并提取液，向提取液中加入1 mL質(zhì)量分數(shù)為16%的NaCl溶液，用體積分數(shù)為15%的甲醇溶液定容至25 mL（實驗過程盡量避免光線直射）。

1.3.2 凈化濃縮

向定容后的提取液中加入10 mL正己烷，充分混勻后，以5 000 r/min離心10 min，棄取上層溶液，下層凈化溶液待用。

給每個樣品準備一根HLB固相萃取小柱，預先用4 mL甲醇、4 mL水活化小柱，吸取10 mL凈化溶液加入活化后的固相萃取小柱，依次用4 mL0.02 mol/L的HCl溶液、0.1 mol/L的HCl溶液和水淋洗小柱，最后用3 mL體積分數(shù)為40%的甲醇溶液洗脫，收集洗脫液。用0.45 μm針頭濾膜過濾至進樣瓶中，在色譜條件下分析測定。

2 結果與討論

2.1 提取和凈化方式的選擇

分別按照實驗方法和水產(chǎn)行業(yè)標準方法SC/T 3019—2004規(guī)定的有機溶劑提取、液液萃取凈化后蒸發(fā)濃縮的方法對樣品進行提取、凈化和濃縮。結果表明，經(jīng)過甲醇水溶液提取、正己烷除脂、固相萃取小柱凈化的樣品平均加標回收率（90%）比有機溶劑提取、液液萃取凈化后蒸發(fā)濃縮的方法平均加標回收率（70%）高，本實驗方法的樣品重復性也明顯較好。

本實驗方法對于水產(chǎn)品樣品中大量的脂類干擾物的去除，仍采用傳統(tǒng)的正己烷萃取除脂法，為了減少萃取過程中乳化現(xiàn)象的產(chǎn)生，在萃取前加入了NaCl溶液，利用NaCl的強電解質(zhì)性增加液體的表面張力，減少乳化現(xiàn)象。液液萃取凈化直接蒸發(fā)濃縮后的草魚加標色譜圖和固相萃取小柱凈化富集的草魚加標色譜圖的比較表明：固相萃取小柱凈化富集的樣品色譜圖干擾峰明顯少于液液萃取凈化直接蒸發(fā)濃縮后的色譜圖。本實驗選擇了甲醇水溶液提取、固相萃取小柱凈化濃縮樣品。

2.2 SPE小柱條件的優(yōu)化

由于體積分數(shù)為5%的甲醇溶液在提取樣品過程中，會將水產(chǎn)品中的一些水溶性蛋白質(zhì)、維生素等物質(zhì)溶解，而這些物質(zhì)在反相柱上會有保留，根據(jù)HLB小柱推薦的方法和楊文軍、張麗英等人的研究結果，選用0.02 mol/L的HCl溶液和0.1 mol/L的HCl溶液依次淋洗固相萃取小柱，凈化樣品。為了避免HCl溶液對后續(xù)色譜分離過程產(chǎn)生影響，楊文軍、張麗英等人在HCl淋洗結束后加入了體積分數(shù)為5%的甲醇溶液緩沖淋洗，本實驗通過比較發(fā)現(xiàn)在檢測水產(chǎn)品樣品時，采用體積分數(shù)為5%的甲醇溶液緩沖淋洗和純水緩沖淋洗平均加標回收率分別為60%和90%.因此本實驗在洗脫前選擇純水緩沖淋洗。洗脫液選擇具有足夠洗脫能力的質(zhì)量分數(shù)為40%的甲醇溶液洗脫，既將HLB小柱上吸附的喹乙醇全部洗脫，又避免了純甲醇溶液進樣時對喹乙醇峰形展寬的影響。

2.3 色譜條件的選擇

參考水產(chǎn)行業(yè)標準方法，選擇甲醇-水溶液（15∶85，V/V）作為流動相，柱流速1.0 mL/min，等度洗脫，采用SymmetryshieldTMRP18色譜柱分離，標準品出峰峰型對稱，出峰時間較早。圖1為0.50 μg/mL喹乙醇標準溶液的色譜圖，圖2為草魚加標樣品和草魚空白樣品色譜圖。

2.4 標準曲線和方法的檢出限、定量限

將100 mg/L的喹乙醇標準儲備溶液利用流動相配制成質(zhì)量濃度分別為0.05 mg/L、0.10 mg/L、0.20 mg/L、0.25 mg/L、0.50 mg/L、0.75 mg/L、1.00 mg/L的喹乙醇標準溶液，在色譜條件下測定，以喹乙醇的質(zhì)量濃度為橫坐標（ρ），峰面積為縱坐標（y）繪制標準曲線，線性回歸方程為Y=5.08×104ρ-54，相關系數(shù)為r=0.999 9.

國家藥物殘留標準方法要求檢出限對應色譜圖S/N大于3；定量限對應色譜圖S/N大于10，且平均加標回收率不小于75%.根據(jù)高若梅、田強兵等人對分析方法的檢出限和測定下限的研究，將0.05 mg/kg的加標樣品按照實驗方法測定，結合平均加標回收率統(tǒng)計數(shù)據(jù)，本實驗方法的檢出限為0.02 mg/kg，方法定量限為0.05 mg/kg。

2.5 方法的精密度和回收率

分別稱取10.0 g草魚、對蝦和黃鱔陰性樣品各6份于離心管中，加入喹乙醇標準溶液適量，制成3個添加水平的加標樣品進行方法的精密度和回收率測定，每個添加水平平行測定6次，結果見表1.方法在3個不同添加水平的相對標準偏差分別為5.8%，7.7%和2.2%，3個不同添加水平的平均回收率分別為83.2%，93.1%和94.4%.方法的加標回收率符合藥物殘留檢測要求，精密度和回收率能滿足水產(chǎn)品中喹乙醇的測定，采用本方法對50份樣品進行了測定，均未檢出喹乙醇。

3 結束語

綜上所述，本實驗采用部分提取液凈化后直接進樣分析的方法，不僅操作簡單，提高了檢測效率，還避免了大量使用有機試劑，減少了對環(huán)境的污染。而且此方法檢出限低、重現(xiàn)性好、回收率高、定性可靠、定量準確，可為水產(chǎn)品中喹乙醇藥物殘留量在水產(chǎn)品中的測定提供準確的測量手段，為食品的安全提供了有力保障。

參考文獻

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〔編輯：劉曉芳〕