• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    1071例地中海貧血基因篩查結(jié)果分析

    2017-06-06 09:09陳育華周碧云梁斯鍶吳顯勁
    中國當代醫(yī)藥 2017年12期
    關(guān)鍵詞:基因型陽性貧血

    陳育華++周碧云++梁斯鍶++吳顯勁++李海燕

    [摘要]目的 了解來我院就診的地中海貧血(簡稱“地貧”)篩查患者地貧基因類型并分析平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)在地貧篩查中的應用價值。方法 對2015年12月~2016年9月來我院就診的1071例地貧篩查患者采用裂口PCR(gap-PCR)擴增法檢測α地貧基因以及PCR-反向斑點雜交(PCR-RDB)技術(shù)檢測β地貧基因,血細胞分析儀分析904例患者外周血的MCV、MCH。結(jié)果 ①1071例檢測樣本中男性556例,檢出地貧230例(41.37%);女性515例,檢出地貧238例(46.21%),不同性別組檢測陽性差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.55,P>0.05)。②兒童組(0~16歲)360例,檢出地貧174例(48.33%);青壯年組(17~49歲)651例,檢出地貧278例(42.7%);老年組(≥50歲)60例,檢出地貧16例(26.67%),不同年齡組檢測陽性差異有統(tǒng)計學意義(χ2=10.48,P<0.01)。③1071例樣本共檢測α地貧293例(27.36%),其中以αα/--SEA、-α3.7/αα、αα/-α4.2基因型為主,占α地貧的93.86%;檢測β地貧157例(14.66%),其中以CD41-42、IVS-Ⅱ-654、-28、CD71-72、CD17基因型為主,占β地貧的82.81%;α地貧復合β地貧18例,比例為1.68%。④MCV用于α地貧、β地貧和αβ復合型地貧的篩查的靈敏度分別為91.18%、99.21%、92.31%,特異度為54.18%;MCH用于α地貧組、β地貧組和αβ復合型地貧組的篩查的靈敏度分別為94.12%、99.21%、100.00%,特異度為51.90%;MCV+MCH用于α地貧組、β地貧組和αβ復合型地貧組的篩查的靈敏度分別為89.08%、99.21%、84.62%,特異度為49.24%;MCV與MCH的靈敏度差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.77,P>0.05),特異度差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.55,P>0.05)。結(jié)論 1071例地貧患者中α地貧中以αα/--SEA基因型最為常見,β地貧中以βCD41-42基因型最為常見,在地貧篩查中,MCV+MCH用于篩查效果好。

    [關(guān)鍵詞]α地中海貧血;β地中海貧血;平均紅細胞體積;平均紅細胞血紅蛋白含量

    [中圖分類號] R556.71 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721(2017)04(c)-0159-05

    [Abstract]Objective To investigate the genetic heterogeneity of thalassemin of patients in our hospital

    and the diagnostic value of mean corpuscular volume(MCV) and mean corpuscular hemoglobin (MCH)in thalassemia screening.Methods From December 2015 to September 2016,1071 patients with thalassemia in our hospital were selected,gap-PCR and polymerase chain reaction-reverse dot blot (PCR-RDB) were used to test α-thalassemia gene and β-thalassemia gene,hematology analyzer was used to test mean corpuscular volume (MCV) and mean corpuscular hemoglobin (MCH) of 904 patients.Results ①Among the 1071 cases,556 cases was male and 515 cases was female,the positive rate of thalassemia was 41.37%(230 cases) for male and 46.21%(238 cases) for female,which was displayed no statistical differences in the two groups (χ2=2.55,P>0.05).②During different group such as children group (0-16 years old,360 cases),adult group (17-49 years old,651 cases) and senior group (≥ 50 years old,60 cases),the positive rate of thalassemia was 48.33%(174 cases),42.7%(278 cases) and 26.67%(16 cases),respectively,which was displayed statistical differences among the groups (χ2=10.48,P<0.01).③among 1071specimens,293 cases (27.36%) were diagnosed as α-thalassemia and 157 cases (14.66%) were diagnosed as β-thalassemia.Among the α-thalassemia genotypes,αα/--SEA,-α3.7/αα,αα/-α4.2 were the most common genotypes (93.86%);among the β-thalassemia genotypes,CD41-42,IVS-Ⅱ-654,-28,CD71-72,CD17 were the most common genotypes (82.81%);18 cases (1.68%) were diagnosed as α- thalassemia combined with β-thalassemia.④The diagnostic sensitivity of MCV for α-thalassemia,β-thalassemia and αβ-thalassemia screening were 91.18%,99.21% and 92.31%,respectively,and 54.18% for the diagnostic specificity.The diagnostic sensitivity of MCH for α-thalassemia,β-thalassemia and αβ-thalassemia screening were 94.12%,99.21% and 100.00%,respectively,and 51.90% for the diagnostic specificity.The diagnostic sensitivity of MCV+MCH for α-thalassemia,β-thalassemia and αβ-thalassemia screening were 89.08%,99.21% and 84.62%,respectively,and 49.24%% for the diagnostic specificity.There was no significant difference in the sensitivity and specificity between MCV and MCH (χ2=1.77,P>0.05;χ2=0.55,P>0.05).Conclusion αα/-SEA genotype and βCD41-42 genotype are the most common type in α-thalassemia and β-thalassemia in 1071 patients with thalassemia,it is reasonable to screening the thalassemia by MCV combine with MCH.

    [Key words]α-thalassemia;β-thalassemia;Mean corpuscular volume;Mean corpuscular hemoglobin

    地中海貧血(簡稱“地貧”)又稱海洋性貧血或珠蛋白合成障礙性貧血,是一種常染色體隱性的單基因遺傳病[1]。由于珠蛋白基因缺陷導致血紅蛋白中的珠蛋白肽鏈合成減少或不能合成,使得血紅蛋白的組分和含量發(fā)生改變,影響到紅細胞的攜氧能力,從而導致不同程度的溶血,使患者發(fā)生貧血,其中以α和β地貧較為常見[2]。據(jù)WHO估計,世界人口約有4.5%的人群攜帶有地貧基因[3],在中國主要集中在長江以南的福建、江西、湖南、廣東、廣西、海南、重慶、四川、貴州、云南等省(市、自治區(qū)),尤其以兩廣地區(qū)最為嚴重。廣東地貧基因攜帶者超過10%,廣西地貧基因攜帶者超過20%,目前世界上還沒有治療地貧的有效方法,所以預防地貧兒的出生尤為重要[4-9]。本研究分析來我院就診的地貧篩查患者的地貧基因類型并分析平均紅細胞體積(mean corpuscular volume,MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(mean corpuscular hemoglobin,MCH)在地貧篩查中的應用價值。

    1對象與方法

    1.1對象

    選擇2015年12月~2016年9月于我院進行地貧基因檢測的患者1071例,以MCV<80 fl和(或)MCH<27 pg者為篩查陽性,對篩查陽性患者再進行地貧基因檢測。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準,參與研究者均簽屬知情同意書。其中男性556例,女性515例;按年齡分為兒童組(1~16歲)360例,青壯年組(17~49歲)651例,老年組(≥50歲)60例。

    1.2儀器與試劑

    血細胞分析儀(LH750)為美國貝克曼庫爾特公司產(chǎn)品,試劑為產(chǎn)家原裝配套試劑。PCR擴增儀(Hema 9600)為貝登生物科技有限公司產(chǎn)品,地貧基因檢測試劑盒由深圳亞能生物技術(shù)有限公司提供。

    1.3檢測方法

    1.3.1血細胞分析 用EDTA抗凝管抽取2 ml靜脈血,直接將樣本在血細胞分析儀上檢測,主要觀察指標為平均紅細胞體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白含量(MCH)。

    1.3.2地貧基因分析 用EDTA抗凝管抽取3 ml靜脈血,按照亞能生物公司核酸提取試劑盒說明書提取全血DNA。α地貧基因PCR擴增:取2 μl DNA加入反應管中(反應總體系為25 μl),先96℃加熱5 min,然后98℃ 45 s,65℃ 90 s,72℃ 3 min共10個循環(huán),再98℃ 30 s,65℃ 45 s,72℃ 3 min,共25個循環(huán),最后72℃ 10 min。取PCR產(chǎn)物及示蹤染料各1 μl混勻后,1.0%瓊脂糖凝膠電泳60 min,電泳結(jié)束后,將瓊脂糖凝膠放入紫外透射分析儀上觀察α地貧缺失類型。β地貧基因PCR擴增:取2 μl DNA加入反應管中(反應總體系為25 μl),先50℃加熱15 min,然后95℃加熱10 min,再94℃ 1 min,55℃ 30 s,72℃ 30 s共35個循環(huán),最后72℃ 10 min,將PCR產(chǎn)物與試劑盒膜條進行雜交,然后洗膜、顯色,肉眼觀察β地貧突變位點類型。

    1.3.3各指標的計算方法 真陽性者(TP):初篩陽性而地貧基因陽性患者;假陽性者(FP):初篩陽性而地貧基因陰性患者;真陰性者(TN):初篩陰性而地貧基因陰性患者;假陰性者(FN):初篩陰性而地貧基因陽性患者;靈敏度=[TP/(TP+FN)]×100%;特異度=[TN/(TN+FP)]×100%;陽性預測值=[TP/(TP+FP)]×100%;陰性預測值=[TN/(TN+FN)]×100%;準確度=[(TP+TN)/(TP+FP+TN+FN)]×100%。由于患者沒有進行血紅蛋白(Hb)電泳分析,而MCV、MCH僅為地貧篩查的初級篩查指標,因此本次的特異度、陽性預測值、陰性預測值、準確度僅針對總的地貧基因篩查進行統(tǒng)計。

    1.4統(tǒng)計學方法

    采用SPSS 17.0統(tǒng)計學軟件進行數(shù)據(jù)分析,計數(shù)資料用率表示,組間比較采用χ2檢驗,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2結(jié)果

    2.1 1071例地貧患者地貧基因型的分布情況

    2.1.1 1071例檢測樣本中按性別和年齡分組的結(jié)果分析 1071例檢測樣本中,男性檢出地貧基因230例(41.37%),女性檢出地貧基因238例(46.21%),男、女地貧基因檢測陽性差異無統(tǒng)計學意義(χ2=2.55,P>0.05);兒童組檢出地貧基因174例(48.33%),青壯年組檢出地貧基因278例(42.7%),老年組檢出地貧基因16例(26.67%),不同年齡組地貧基因檢測陽性差異有統(tǒng)計學意義(χ2=10.48,P<0.01)。

    2.1.2 1071例檢測樣本中按地貧基因類型的結(jié)果分析 1071例檢測樣本中,確診為α地貧293例(27.36%),包括5種基因亞型,其中以αα/--SEA(174例,59.39%)、-α3.7/αα(72例,24.57%)、αα/-α4.2(29例,9.90%)基因型為主,占總體α地貧的93.86%(表1);確診為β地貧157例(14.66%),包括15種基因亞型,其中以CD41-42(37.58%)、IVS-Ⅱ-654(22.30%)、-28(10.83%)、CD17(8.92%)、CD71-72(3.18%)基因型為主,占總體β地貧的82.81%(表2);確診為α地貧復合β地貧基因型18例(1.68%),包括11種復合基因亞型(表3)。

    2.2 MCV、MCH在地貧篩查中的價值

    本次確診α地貧、β地貧以及α地貧復合β地貧分別為238、127、13例,未檢出地貧基因526例。在三種地貧基因篩查陽性例數(shù)中,MCV陽性例數(shù)分別為217、126、12例,MCH陽性例數(shù)分別為224、126、13例,MCV+MCH陽性例數(shù)分別為212、126、11例,MCV、MCH、MCV+MCH三個指標在地貧基因篩查的靈敏度、特異度、陽性預測值、陰性預測值、準確度見表4。應用統(tǒng)計學軟件進行分析,MCV與MCH的靈敏度差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.77,P>0.05),特異度差異無統(tǒng)計學意義(χ2=0.55,P>0.05)。

    3討論

    地貧一旦發(fā)病,不僅會給患者自身的身心健康帶來嚴重的危害,也會給社會及患者家庭帶來沉重的精神負擔和經(jīng)濟負擔[10]。在地貧較為流行的國家和地區(qū),地貧已經(jīng)成為一個重大的公共衛(wèi)生問題。在現(xiàn)有的技術(shù)條件下,地貧一旦發(fā)生尚沒有辦法根治,只能依靠規(guī)范的產(chǎn)前篩查和診斷,有效地預防和控制地貧的發(fā)生,及時發(fā)現(xiàn)可能出生的中重型地貧患兒并終止妊娠[2]。地貧檢測的方法包括血液學進行初篩和基因診斷進行確診[11]。血液學進行初篩,主要是通過血常規(guī)指標血紅蛋白含量、MCV、MCH等,結(jié)合血清鐵檢測和血紅蛋白電泳分析可初步篩查出地貧患者,基因診斷主要依靠分子生物學手段檢測基因的缺失及突變[12]。

    本研究檢測的1071例地貧患者中,檢出地貧基因攜帶者468例,陽性率達到43.70%,反映出本地區(qū)是地貧的高發(fā)區(qū),應加強本地區(qū)地貧的篩查和基因診斷以檢出攜帶者,同時開展人群普查和遺傳咨詢、做好婚前指導以避免地貧基因攜帶者之間聯(lián)姻,這對于預防本病有重要意義。本次確診為α地貧患者293例(27.36%),其中以αα/--SEA、-α3.7/αα、αα/-α4.2基因型為主,占總體α地貧的93.86%。其中以αα/--SEA(59.39%)占多數(shù),其基因型與東莞、深圳、廣州地區(qū)的基因型相同,與廣東、廣西、湖南、四川、江西等省人群中缺失型α地貧常見基因型相同[13-16]。另外β地貧檢出157例(14.66%),以CD41-42(-TCTT)(37.58%)占多數(shù),其次為IVS-Ⅱ-654(C→T)(22.30%),這與東莞、深圳的β地貧基因型突變類型一致,而重慶、云南地區(qū)的β地貧基因型突變類型以CD17(A→T)最多,其次為CD41-42(-TCTT)、IVS-Ⅱ-654(C→T)[17-18];廣東、廣西β地貧基因型突變類型以CD41-42(-TCTT)最多[4,13],這表明不同地域和不同人群的β地貧基因突變譜的構(gòu)成也不盡相同[19]。

    本研究還發(fā)現(xiàn),MCV或MCH作為地貧篩查的指標,其靈敏度可達90%以上,但特異性偏低,分別為54.18%、51.90%、49.24%,主要是由于其他一些小細胞低色素性貧血的干擾所致,其中以缺鐵性貧血最為常見,臨床上可以通過測定血清鐵蛋白加以鑒別診斷[1]。此外,本實驗室只檢測3種常見缺失型α-地貧基因(--SEA、-α3.7、-α4.2),對于少見的缺失型α-地貧基因[--THAI,--FIL,--MED,-(α)20.5]以及非缺失型α-地貧基因(αCSα、αQSα及αWSα)沒有檢測,這也是導致初篩特異性偏低的原因之一[20]。也有研究表明[16],當MCV、MCH均下降,HbA2>4.0%時,應高度懷疑β地貧,因此繼續(xù)探討HbA2、MCV+MCH+HbA2聯(lián)合方案對臨床的應用價值,值得進一步研究。

    綜上所述,對于地貧基因的初篩,不管是一級篩查還是二級篩查,都有漏檢的可能性。在臨床工作中,尤其是優(yōu)生遺傳咨詢的醫(yī)生,對于有地貧家族史且有血液學表型異常但常規(guī)基因檢測又未見異常的標本,需告訴檢測者要進一步采用基因測序等技術(shù)進一步確診,以提高地貧基因攜帶的檢出率及準確性,減少因漏檢及假陽性給家庭和社會帶來的危害。

    [參考文獻]

    [1]陳亦明,楊圖深,王長金,等.應用紅細胞平均體積篩查無償獻血者攜帶地貧基因的價值[J].現(xiàn)代醫(yī)院,2012,12(2):60-61.

    [2]張小莊,馮占春,葉寧.地中海貧血的預防控制[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2014:1-2.

    [3]劉興梅,李貴芳,吳嫻,等.貴州165例α-地中海貧血基因突變類型初步分析[J].重慶醫(yī)學,2015,44(17):2146-2418.

    [4]林慧,段金良.廣西不孕癥婦女α和β地中海貧血的基因鑒定[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2016,24(1):47-48.

    [5]張玲,韓坤,胡朝暉,等.廣州地區(qū)528例珠蛋白生成障礙性貧血患者的ABO血型分布[J].檢驗醫(yī)學與臨床,2016, 13(2):228-229.

    [6]林金瑞,李介華,黃振勇,等.清遠地區(qū)CD41-42β地中海貧血人群基因型組合特點及紅細胞參數(shù)特點分析[J].廣東醫(yī)學,2015,36(3):410-413.

    [7]姜碧,姚倩瑜,韋思似,等.東莞地區(qū)孕前優(yōu)生健康槍柄夫婦地中海貧血結(jié)果分析[J].中國婦幼保健,2016,31(7):1475-1477.

    [8]姜碧,鐘鳴,韋思似,等.東莞地區(qū)育齡人群α地中海貧血分子流行病學調(diào)查[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2015,23(7):22-23.

    [9]陳淑芬,贍淑莉,宋春林,等.佛山地區(qū)非缺失型α地中海貧血基因突變分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2015,23(3):17-22.

    [10]陳宜升,蔡桂花,孫玉紅,等.潮州地區(qū)7293例新生兒α-地中海貧血篩查分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2016, 24(1):88-85.

    [11]林金端,李介華,黃振勇,等.地中海貧血初篩表型陰性的育齡人群基因檢測結(jié)果分析[J].廣東醫(yī)學,2014,35(24):3836-3837.

    [12]杜偉,歐陽小峰,甘承文,等.重慶地區(qū)8024例地中海貧血篩查結(jié)果及地貧基因型分析[J].重慶醫(yī)科大學學報,2014,39(5):694-697.

    [13]王晶晶,朱文彪,黃霜,等.廣州市1381例育齡人群地中海貧血基因譜分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2015,23(2):5-7.

    [14]田玉玲,雷力民,黃偉.2650例育齡期婦女地中海貧血的篩查結(jié)果分析[R].重慶醫(yī)學,2014,43(31):4232-4234.

    [15]鐘鳴,姜碧,劉惠,等.東莞地區(qū)26906對育齡夫婦地中海貧血篩查結(jié)果分析[J].中國優(yōu)生與遺傳雜志,2015,23(5):25-26.

    [16]鄭琳,黃海龍,范向群,等.血細胞和血紅蛋白分析在地中海貧血中的應用價值[J].中國婦幼保健,2016,31(3):547-549.

    [17]李良瓊,熊見,王長本,等.渝東北區(qū)地中海貧血常見基因類型的調(diào)查研究[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2015,36(6):753-757.

    [18]張杰,賀靜,曾小紅,等.云南省人群地中海貧血遺傳多樣性的研究[J].昆明醫(yī)科大學學報,2016,37(1):28-34.

    [19]陳興,肖奇志,于雯,等.應用探針熔解曲線分析技術(shù)快速檢測非缺失型α-地中海貧血[J].國際檢驗醫(yī)學雜志,2015,36(14):2009-2014.

    [20]唐海深,萬志丹,張艷芳,等.2例未知基因型地中海貧血的產(chǎn)前診斷[J].中國計劃生育和婦產(chǎn)科,2017,9(2):64-67.

    (收稿日期:2017-03-15 本文編輯:任 念)

    猜你喜歡
    基因型陽性貧血
    血常規(guī)檢測結(jié)果對鑒別診斷缺鐵性貧血、地中海貧血價值觀察
    成熟度和生長調(diào)節(jié)劑對不同基因型觀賞向日葵種子休眠期的影響
    新型冠狀病毒IgM抗體檢測假陽性患者特征分析
    你對貧血知多少
    中小學生貧血原因調(diào)查與分析
    淺談分枝法在解決遺傳學題目中的應用
    檢驗呈陽性不一定是壞事
    從一道高考題看自交與自由交配的相關(guān)計算
    基因型、表現(xiàn)型種類數(shù)的快速求算
    妊娠貧血與飲食療法
    久久这里有精品视频免费| 高清午夜精品一区二区三区 | 国产av在哪里看| 日本-黄色视频高清免费观看| 天天一区二区日本电影三级| 美女被艹到高潮喷水动态| 性欧美人与动物交配| 午夜激情福利司机影院| 99在线视频只有这里精品首页| 亚洲va在线va天堂va国产| 亚洲五月天丁香| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 午夜福利在线观看吧| 99riav亚洲国产免费| 好男人视频免费观看在线| 能在线免费看毛片的网站| 国产精品久久久久久av不卡| 一级二级三级毛片免费看| 偷拍熟女少妇极品色| 噜噜噜噜噜久久久久久91| a级毛片免费高清观看在线播放| 听说在线观看完整版免费高清| 淫秽高清视频在线观看| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲欧洲国产日韩| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 26uuu在线亚洲综合色| 26uuu在线亚洲综合色| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产一区二区在线观看日韩| av国产免费在线观看| 成人三级黄色视频| 少妇被粗大猛烈的视频| 国产精品一及| 国产精品一区二区三区四区久久| 少妇的逼好多水| 五月玫瑰六月丁香| 国产一区二区在线av高清观看| 我要看日韩黄色一级片| 免费人成视频x8x8入口观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 毛片一级片免费看久久久久| 日韩欧美精品免费久久| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产人妻一区二区三区在| 一级黄片播放器| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲人成网站在线观看播放| 赤兔流量卡办理| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲性久久影院| 中国美白少妇内射xxxbb| 少妇熟女aⅴ在线视频| 三级经典国产精品| av.在线天堂| 大型黄色视频在线免费观看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 一区福利在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 变态另类丝袜制服| 久久中文看片网| 国产精品人妻久久久影院| 淫秽高清视频在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 亚洲精品久久国产高清桃花| 日本爱情动作片www.在线观看| 嫩草影院入口| 一本久久中文字幕| 久久九九热精品免费| 国产人妻一区二区三区在| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产精品久久久久久久久免| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 男女那种视频在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 伊人久久精品亚洲午夜| 女同久久另类99精品国产91| 免费观看在线日韩| 国产三级中文精品| 精品人妻视频免费看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产毛片a区久久久久| 一个人看视频在线观看www免费| 在线观看免费视频日本深夜| av福利片在线观看| 两个人的视频大全免费| 日本五十路高清| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产精品一区二区三区四区久久| 免费大片18禁| 日韩成人av中文字幕在线观看| 国产成人a∨麻豆精品| 好男人在线观看高清免费视频| 99热这里只有是精品在线观看| 成人亚洲精品av一区二区| 国产日韩欧美在线精品| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 久久鲁丝午夜福利片| 中文亚洲av片在线观看爽| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久精品国产清高在天天线| 久久精品影院6| 少妇裸体淫交视频免费看高清| videossex国产| 国产老妇伦熟女老妇高清| 成人二区视频| 成人综合一区亚洲| 久久这里有精品视频免费| 国产伦在线观看视频一区| 岛国毛片在线播放| 国产午夜福利久久久久久| 2022亚洲国产成人精品| 欧美bdsm另类| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲无线在线观看| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲人与动物交配视频| 老司机福利观看| 成人一区二区视频在线观看| 亚洲无线观看免费| 黄色日韩在线| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 国产淫片久久久久久久久| 国产中年淑女户外野战色| 别揉我奶头 嗯啊视频| 成人综合一区亚洲| 黄色配什么色好看| 欧美精品一区二区大全| 婷婷色综合大香蕉| 精品久久国产蜜桃| 69av精品久久久久久| 乱系列少妇在线播放| 国产v大片淫在线免费观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 日韩欧美在线乱码| 国产老妇女一区| 免费看a级黄色片| 99热网站在线观看| 嫩草影院精品99| 最后的刺客免费高清国语| 少妇熟女欧美另类| 亚洲人成网站高清观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 午夜福利高清视频| 97超视频在线观看视频| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 亚洲成a人片在线一区二区| 午夜久久久久精精品| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 精品熟女少妇av免费看| 国产黄片美女视频| 波多野结衣巨乳人妻| 全区人妻精品视频| 五月伊人婷婷丁香| 亚洲av成人av| 一个人观看的视频www高清免费观看| 欧美xxxx性猛交bbbb| 高清在线视频一区二区三区 | 一级黄片播放器| 丝袜喷水一区| 国产毛片a区久久久久| 人人妻人人澡欧美一区二区| 免费电影在线观看免费观看| 18禁在线播放成人免费| 国产人妻一区二区三区在| 国产精品久久电影中文字幕| 少妇的逼水好多| 国产精品一区二区在线观看99 | 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 麻豆一二三区av精品| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 神马国产精品三级电影在线观看| 久久久久久久久久黄片| 狠狠狠狠99中文字幕| 最近2019中文字幕mv第一页| 真实男女啪啪啪动态图| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲人成网站高清观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产一区二区在线观看日韩| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产老妇伦熟女老妇高清| 嘟嘟电影网在线观看| 啦啦啦韩国在线观看视频| 白带黄色成豆腐渣| 91aial.com中文字幕在线观看| 变态另类丝袜制服| 一本久久中文字幕| 国产乱人偷精品视频| 少妇高潮的动态图| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 国产亚洲91精品色在线| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 免费看日本二区| 欧美高清成人免费视频www| 国产老妇女一区| 久久亚洲精品不卡| 深爱激情五月婷婷| 国产麻豆成人av免费视频| 黄色欧美视频在线观看| 三级经典国产精品| 亚洲精品日韩av片在线观看| 综合色av麻豆| 国产老妇伦熟女老妇高清| 国产 一区 欧美 日韩| 一个人看的www免费观看视频| 久久国产乱子免费精品| 中文字幕熟女人妻在线| 简卡轻食公司| 午夜视频国产福利| 欧美精品一区二区大全| 在线免费观看的www视频| 国产精品久久久久久av不卡| 在线播放国产精品三级| 岛国毛片在线播放| 2021天堂中文幕一二区在线观| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲人与动物交配视频| 国产av麻豆久久久久久久| 色哟哟哟哟哟哟| 国产成人精品婷婷| 乱系列少妇在线播放| 联通29元200g的流量卡| 日本黄大片高清| 99久久中文字幕三级久久日本| 欧美成人a在线观看| 如何舔出高潮| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 一个人免费在线观看电影| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产三级在线视频| 亚洲内射少妇av| 老司机影院成人| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲国产高清在线一区二区三| 色吧在线观看| 日韩欧美精品免费久久| 久久久久久久久久久丰满| av天堂中文字幕网| 国产伦精品一区二区三区视频9| 卡戴珊不雅视频在线播放| 校园春色视频在线观看| 大香蕉久久网| av国产免费在线观看| 嫩草影院新地址| 国产v大片淫在线免费观看| 黄色一级大片看看| 黄片wwwwww| 久久6这里有精品| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 伊人久久精品亚洲午夜| 国内揄拍国产精品人妻在线| 午夜老司机福利剧场| 精品久久久噜噜| 日韩欧美 国产精品| 久久久久久国产a免费观看| 午夜激情欧美在线| 91精品一卡2卡3卡4卡| 免费看a级黄色片| 免费观看人在逋| 老司机福利观看| 亚洲av二区三区四区| 午夜a级毛片| av卡一久久| 亚洲在线自拍视频| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲av免费在线观看| 在现免费观看毛片| 黄色欧美视频在线观看| 一区二区三区高清视频在线| 变态另类丝袜制服| 免费在线观看成人毛片| 尾随美女入室| 免费观看a级毛片全部| av视频在线观看入口| 亚洲成a人片在线一区二区| 久久久久国产网址| 午夜a级毛片| 能在线免费看毛片的网站| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国产老妇女一区| 亚洲精品色激情综合| 日韩 亚洲 欧美在线| 久久久欧美国产精品| 国产三级在线视频| 嫩草影院新地址| 在线播放国产精品三级| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 一边亲一边摸免费视频| 国产人妻一区二区三区在| 少妇的逼水好多| 91aial.com中文字幕在线观看| 日日干狠狠操夜夜爽| 天堂影院成人在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产成人福利小说| 日韩一区二区三区影片| 久久鲁丝午夜福利片| av免费在线看不卡| av女优亚洲男人天堂| 在线播放无遮挡| 精品国产三级普通话版| 一本久久中文字幕| 99精品在免费线老司机午夜| 美女大奶头视频| 高清毛片免费观看视频网站| 中文字幕av在线有码专区| 最新中文字幕久久久久| 毛片女人毛片| 国产精品国产高清国产av| 国产亚洲91精品色在线| 秋霞在线观看毛片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 欧美日韩精品成人综合77777| 亚洲四区av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 丰满的人妻完整版| 给我免费播放毛片高清在线观看| av专区在线播放| 亚洲乱码一区二区免费版| 成人午夜高清在线视频| 国产 一区 欧美 日韩| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲久久久久久中文字幕| 精品一区二区三区人妻视频| 我要搜黄色片| 中文字幕免费在线视频6| 在线观看免费视频日本深夜| 久久人人爽人人爽人人片va| 女人被狂操c到高潮| av.在线天堂| 听说在线观看完整版免费高清| 精品久久久久久成人av| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲av熟女| 精品久久久噜噜| 哪个播放器可以免费观看大片| 午夜老司机福利剧场| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲成人中文字幕在线播放| 久久久久九九精品影院| 欧美高清成人免费视频www| 一区福利在线观看| 国产人妻一区二区三区在| 国内精品一区二区在线观看| 美女黄网站色视频| 午夜爱爱视频在线播放| 少妇熟女aⅴ在线视频| 久久久久久久久大av| 最近2019中文字幕mv第一页| 内射极品少妇av片p| 亚州av有码| 成人鲁丝片一二三区免费| av.在线天堂| 国产精品精品国产色婷婷| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 男女视频在线观看网站免费| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲精品成人久久久久久| 亚洲最大成人手机在线| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 国产精品,欧美在线| 熟女人妻精品中文字幕| 少妇高潮的动态图| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 极品教师在线视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 最近中文字幕高清免费大全6| 亚洲在线自拍视频| 深夜a级毛片| 一本一本综合久久| 特级一级黄色大片| 美女黄网站色视频| 18+在线观看网站| 国产真实伦视频高清在线观看| 国产精华一区二区三区| av在线亚洲专区| 国产精品免费一区二区三区在线| 啦啦啦啦在线视频资源| 黄色一级大片看看| 精华霜和精华液先用哪个| 99riav亚洲国产免费| av黄色大香蕉| 网址你懂的国产日韩在线| 久久精品综合一区二区三区| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 午夜福利高清视频| 日韩成人av中文字幕在线观看| 可以在线观看毛片的网站| eeuss影院久久| 99热6这里只有精品| 国产老妇女一区| 久久综合国产亚洲精品| 国内精品久久久久精免费| www日本黄色视频网| 日韩亚洲欧美综合| 九草在线视频观看| 国产一区二区在线av高清观看| 成熟少妇高潮喷水视频| 91久久精品电影网| 欧美激情在线99| 国产欧美日韩精品一区二区| 热99在线观看视频| 麻豆乱淫一区二区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 在线观看美女被高潮喷水网站| 久久久精品大字幕| 亚洲欧美日韩无卡精品| 久久久色成人| 白带黄色成豆腐渣| 舔av片在线| 精品久久久噜噜| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 人妻少妇偷人精品九色| 看十八女毛片水多多多| 丰满乱子伦码专区| 一本精品99久久精品77| 久久久午夜欧美精品| 男人的好看免费观看在线视频| 国产亚洲精品av在线| 亚州av有码| 免费看日本二区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 好男人视频免费观看在线| 国产成人一区二区在线| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 99热这里只有精品一区| 日日啪夜夜撸| 亚洲av免费高清在线观看| 一个人看视频在线观看www免费| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 日本一本二区三区精品| 午夜a级毛片| 成人二区视频| 我的老师免费观看完整版| videossex国产| 国内精品一区二区在线观看| 综合色av麻豆| 国内精品久久久久精免费| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产麻豆成人av免费视频| 免费观看在线日韩| 丝袜美腿在线中文| 欧美激情国产日韩精品一区| 国产成人福利小说| 国产精品永久免费网站| 国产一区二区三区av在线 | 我的老师免费观看完整版| 一级毛片我不卡| 伦理电影大哥的女人| 中文字幕熟女人妻在线| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产成人精品婷婷| 婷婷亚洲欧美| 国产爱豆传媒在线观看| 黄片无遮挡物在线观看| 国产高潮美女av| 亚洲av中文av极速乱| 九色成人免费人妻av| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 日韩精品青青久久久久久| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产精品一区二区在线观看99 | 成年av动漫网址| 国产精品无大码| 国产精品美女特级片免费视频播放器| av福利片在线观看| 久久久精品欧美日韩精品| 99久久精品一区二区三区| 亚洲国产欧美在线一区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 精品人妻视频免费看| 午夜激情福利司机影院| 成年女人看的毛片在线观看| 成人无遮挡网站| 天天一区二区日本电影三级| 乱人视频在线观看| 午夜视频国产福利| 国产av不卡久久| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲精品成人久久久久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 一级毛片我不卡| 黄色一级大片看看| 久久综合国产亚洲精品| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 久久久久久久久久黄片| 国产久久久一区二区三区| 国产精品无大码| 欧美色欧美亚洲另类二区| ponron亚洲| 国产亚洲精品久久久com| 婷婷亚洲欧美| а√天堂www在线а√下载| 国产午夜精品论理片| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产激情偷乱视频一区二区| 波多野结衣高清作品| 又爽又黄a免费视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 99热这里只有是精品在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| av女优亚洲男人天堂| 亚洲成人久久性| 伊人久久精品亚洲午夜| 久久久久久伊人网av| 国产91av在线免费观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 能在线免费观看的黄片| 在线观看免费视频日本深夜| 观看美女的网站| 欧美人与善性xxx| av在线天堂中文字幕| 中文字幕av在线有码专区| 国国产精品蜜臀av免费| 精品久久久噜噜| 爱豆传媒免费全集在线观看| 丝袜喷水一区| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 3wmmmm亚洲av在线观看| 极品教师在线视频| 哪个播放器可以免费观看大片| 啦啦啦啦在线视频资源| 日日啪夜夜撸| 麻豆乱淫一区二区| 日韩精品青青久久久久久| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 久久热精品热| 日韩 亚洲 欧美在线| 色哟哟哟哟哟哟| 国产老妇伦熟女老妇高清| 永久网站在线| 久久久国产成人免费| 日本-黄色视频高清免费观看| 在线观看午夜福利视频| 网址你懂的国产日韩在线| 久久6这里有精品| 日韩成人伦理影院| av在线天堂中文字幕| 日韩欧美在线乱码| 一边亲一边摸免费视频| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产高清视频在线观看网站| 国产日韩欧美在线精品| 国产高清视频在线观看网站| 国内精品久久久久精免费| 国产一区二区激情短视频| 国产精品电影一区二区三区| 精品久久久久久久久av| 99久久精品一区二区三区| 天堂√8在线中文| 精品久久久噜噜| 国产一区二区在线av高清观看| 国产探花在线观看一区二区| 国产成人福利小说| 国产激情偷乱视频一区二区| or卡值多少钱| 免费看光身美女| 天天躁日日操中文字幕| 欧美日韩综合久久久久久| 日本欧美国产在线视频| ponron亚洲| 麻豆乱淫一区二区| 精华霜和精华液先用哪个| 精品久久久久久成人av| 久久中文看片网| 日韩大尺度精品在线看网址| 床上黄色一级片| 国产精品不卡视频一区二区| 一夜夜www| 波野结衣二区三区在线| 男插女下体视频免费在线播放| 两个人的视频大全免费| 秋霞在线观看毛片| 亚洲精品日韩av片在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 日韩大尺度精品在线看网址| a级毛片免费高清观看在线播放| 中国美白少妇内射xxxbb| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产高清不卡午夜福利| 毛片女人毛片| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品久久久久久久久免| 黄片wwwwww| 国产av一区在线观看免费| 久久精品影院6| 中文资源天堂在线| 一区二区三区四区激情视频 | 日日干狠狠操夜夜爽| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久久色成人| 2021天堂中文幕一二区在线观| 午夜精品国产一区二区电影 | 草草在线视频免费看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 人妻久久中文字幕网| 免费电影在线观看免费观看| 成人欧美大片| 久久综合国产亚洲精品| 一个人看的www免费观看视频| 国产精华一区二区三区| 波多野结衣高清无吗| 亚洲av不卡在线观看|