抑霉唑?qū)ζ咸训谋ｕr效果及其風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

章 豪， 張宜文， 凌淑萍， 張 亮， 陳若霞， 吳銀良， 朱 勇

(1.寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院 農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(寧波)，浙江 寧波 315040； 2.北京市計(jì)量檢測(cè)科學(xué)研究院，北京 100029)

抑霉唑?qū)ζ咸训谋ｕr效果及其風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

章 豪1， 張宜文2， 凌淑萍1， 張 亮1， 陳若霞1， 吳銀良1， 朱 勇1

(1.寧波市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院 農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估實(shí)驗(yàn)室(寧波)，浙江 寧波 315040； 2.北京市計(jì)量檢測(cè)科學(xué)研究院，北京 100029)

以葡萄為試材，經(jīng)抑霉唑處理后冷藏，研究不同施藥濃度對(duì)葡萄貯藏期間果實(shí)品質(zhì)的影響。結(jié)果表明，抑霉唑可較好地保持果實(shí)可溶性固形物及可滴定酸含量，抑制葡萄表面霉菌的繁殖，保持果實(shí)品質(zhì)。對(duì)貯藏后抑霉唑進(jìn)行膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，無(wú)論是250 mg·L-1還是500 mg·L-1濃度抑霉唑處理，急性和慢性膳食風(fēng)險(xiǎn)商均小于100%，屬于低風(fēng)險(xiǎn)范圍。

葡萄；抑霉唑；膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

作為世界產(chǎn)量最高、栽培面積最大的水果，葡萄酸甜可口，營(yíng)養(yǎng)豐富，深受人們喜愛(ài)[1]。葡萄皮薄汁多，含有較高的糖分和水分，在收貯運(yùn)過(guò)程中很容易發(fā)生失水、落粒、褐變、腐爛等問(wèn)題[2-3]。據(jù)估計(jì)，每年由于葡萄采后腐爛原因造成的損失約占總產(chǎn)量的27%[4]，這給鮮食葡萄的發(fā)展帶來(lái)極大困難[5]；因此，做好葡萄采摘后的防腐保鮮非常重要。在現(xiàn)有的方法中，SO2熏蒸處理是較為有效的保鮮措施[6-7]。SO2對(duì)葡萄貯藏中的主要霉菌病害等有很好的抑制作用，還可以有效降低葡萄的呼吸強(qiáng)度，同時(shí)，可以阻止和減緩葡萄貯藏期間的酶促褐變。適量的SO2還能抑制氧化酶活性，增強(qiáng)耐貯性[8]。但SO2使用劑量不好控制，過(guò)高濃度的SO2會(huì)以活性氧自由基和亞硫酸根陰離子的形式傷害果實(shí)，損害葡萄抗氧化的酶促防御系統(tǒng)[9-10]，引起葡萄的漂白傷害[11-14]。所以，研究非SO2的無(wú)害化保鮮劑是葡萄貯藏保鮮的重點(diǎn)研究方向之一，對(duì)葡萄產(chǎn)業(yè)的發(fā)展具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

抑霉唑是一種高效、廣譜內(nèi)吸性苯并咪唑類殺菌劑，具有良好的殺菌效果。陳婷等[15]考查了多菌靈、甲基托布津、抑霉唑、咪酰胺、施保功等常用柑橘保鮮劑對(duì)海南綠橙的保鮮效果，發(fā)現(xiàn)抑霉唑保鮮效果最佳，抑霉唑能夠有效減少病害的發(fā)生，防止病原菌的交叉感染，顯著提高好果率，常溫貯藏30 d其好果率為92.5%，貯藏時(shí)間較未處理的綠橙延長(zhǎng)70 d以上，且抑霉唑殘留量未超標(biāo)。羅遠(yuǎn)莉等[16]在莖瘤芥保鮮技術(shù)的研究中發(fā)現(xiàn)，抑霉唑防腐效果顯著，合適濃度為500 mg·kg-1，抑霉唑處理能有效抑制環(huán)境中微生物的生長(zhǎng)，降低莖瘤芥的腐爛率，延長(zhǎng)貯藏期，有利于保持莖瘤芥的商品性。目前，關(guān)于抑霉唑作用于葡萄保鮮的研究在檢索范圍內(nèi)尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)擬選用抑霉唑作為保鮮劑，在貯藏期間觀察其對(duì)葡萄貯藏保鮮的效果，研究抑霉唑在葡萄貯藏保鮮過(guò)程中的殘留量變化、降解行為及其趨勢(shì)，明確降解半衰期，并對(duì)貯藏后抑霉唑的膳食風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，以期為抑霉唑在葡萄貯藏保鮮中的應(yīng)用提供理論和實(shí)踐依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試葡萄采自浙江省寧波市寧海縣，品種為紅地球；試驗(yàn)用抑霉唑硫酸鹽(75%可溶粒劑)由安道麥馬克西姆有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

挑選無(wú)機(jī)械傷、無(wú)腐爛、無(wú)霉變、成熟度一致的葡萄，分別用250、500 mg·L-1抑霉唑硫酸鹽水溶液浸果1 min，將晾干后的所有果實(shí)以及不用抑霉唑處理的對(duì)照(CK)果實(shí)分別置于4 ℃冰箱內(nèi)貯藏，分時(shí)段取樣，測(cè)定指標(biāo)，每一處理重復(fù)3次。

1.3 測(cè)定指標(biāo)與方法

在每個(gè)重復(fù)中隨機(jī)取樣30粒對(duì)全果進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)測(cè)定。采用Atago PAL-1便攜式數(shù)顯折射計(jì)測(cè)定葡萄中可溶性固形物的含量；采用氫氧化鈉滴定法測(cè)定可滴定酸的含量，以蘋果酸計(jì)。參照GB 4789.15—2010《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)霉菌和酵母計(jì)數(shù)》中的方法測(cè)定葡萄中霉菌總數(shù)，簡(jiǎn)述如下：稱取25 g葡萄樣品至盛有225 mL無(wú)菌蒸餾水的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打2 min，制成1∶10的樣品勻液；取1 mL 1∶10稀釋液注入含有9 mL無(wú)菌水的試管中，另?yè)Q一支1 mL無(wú)菌吸管反復(fù)吹吸，制得1∶100稀釋液，按上述方法制備10倍系列稀釋樣品勻液；選擇2～3個(gè)合適稀釋度，分別吸取1 mL的樣品勻液于3個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)，并用無(wú)菌蒸餾水作空白對(duì)照；每皿中加入15～20 mL冷卻至46 ℃的孟加拉紅培養(yǎng)基，并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻，待瓊脂凝固后，將平板倒置，(28±1)℃培養(yǎng)5 d，觀察并記錄。參照GB 20769—2008《水果和蔬菜中450種農(nóng)藥及相關(guān)化學(xué)品殘留量的測(cè)定 液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法》中的方法測(cè)定葡萄中抑霉唑的含量。

1.4 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估

采用風(fēng)險(xiǎn)商的評(píng)價(jià)方法判定相關(guān)因子的風(fēng)險(xiǎn)水平。首先，估算每日攝入量和風(fēng)險(xiǎn)商：

(1)

(2)

式(1)、(2)中：EDI為估計(jì)每日攝入量，μg·kg-1·d-1；Fi為第i類食品的消費(fèi)量，g·d-1；Ci為第i類食品中的殘留量，mg·kg-1；BW為某類人群的平均體質(zhì)量，kg；RQ為風(fēng)險(xiǎn)商；ADI為每日允許攝入量，μg·kg-1·d-1。

當(dāng)RQ>1時(shí)，表示風(fēng)險(xiǎn)較大，不可接受，數(shù)值越大，風(fēng)險(xiǎn)越大；當(dāng)RQ<1時(shí)，表示風(fēng)險(xiǎn)較小，可以接受，數(shù)值越小，風(fēng)險(xiǎn)越小。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度抑霉唑處理對(duì)葡萄可溶性固形物含量的影響

可溶性固形物的含量在一定程度上反映了果實(shí)在貯藏過(guò)程中的含糖量。研究表明，果實(shí)中可溶性固形物80%以上是糖，其次是酸、可溶性色素以及可溶性單寧等；所以葡萄中可溶性固形物含量的變化直接影響著果實(shí)的風(fēng)味和口感。如圖1所示，在貯藏過(guò)程中，葡萄可溶性固形物的含量在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，無(wú)規(guī)律性變化。不同濃度抑霉唑處理下葡萄的可溶性固形物含量保持基本一致的變化趨勢(shì)。對(duì)比相同貯藏時(shí)間不同處理葡萄中的可溶性固形物含量可知，250 mg·L-1抑霉唑處理的葡萄中可溶性固形物含量相對(duì)最高，而500 mg·L-1抑霉唑處理的葡萄中可溶性固形物含量相對(duì)最低，說(shuō)明在一定濃度范圍內(nèi)，抑霉唑處理能抑制葡萄可溶性固形物含量的降低，而過(guò)高的抑霉唑濃度則會(huì)導(dǎo)致葡萄中可溶性固形物含量降低。這可能是因?yàn)檩^低濃度的抑霉唑處理在一定程度上抑制了葡萄的生理代謝水平，從而維持葡萄中可溶性固形物含量穩(wěn)定，而較高濃度的抑霉唑處理可能導(dǎo)致葡萄受到一定的損害，從而影響了其可溶性固形物含量。

2.2 不同濃度抑霉唑處理對(duì)葡萄可滴定酸含量的影響

葡萄中可滴定酸含量的高低是衡量果實(shí)貯藏效果的指標(biāo)之一，也是鑒別果實(shí)品質(zhì)的一個(gè)重要化學(xué)指標(biāo)。在葡萄的貯藏過(guò)程中，可滴定酸一般作為呼吸底物而被消耗。如圖2所示，在貯藏過(guò)程中，葡萄的可滴定酸含量在一定范圍內(nèi)波動(dòng)，無(wú)規(guī)律性變化，不同濃度抑霉唑處理下葡萄的可滴定酸含量變化趨勢(shì)基本一致，且相同貯藏時(shí)間，各處理的葡萄可滴定酸含量無(wú)顯著差異，說(shuō)明抑霉唑處理對(duì)葡萄的可滴定酸含量無(wú)顯著影響。

圖1 不同濃度抑霉唑處理對(duì)葡萄可溶性固形物含量的影響Fig.1 Effects of imazalil treatments on soluble solids content in grape

圖2 不同濃度抑霉唑處理對(duì)葡萄可滴定酸含量的影響Fig.2 Effects of imazalil treatments on titratable acidity content in grape

2.3 不同濃度抑霉唑處理對(duì)葡萄中霉菌總數(shù)的影響

貯藏保鮮過(guò)程中呼吸作用產(chǎn)生的二氧化碳和水會(huì)積聚在葡萄表面產(chǎn)生碳酸水濕蝕，對(duì)細(xì)胞膜造成破壞，很容易導(dǎo)致葡萄受霉菌侵染。霉菌污染葡萄后引起霉?fàn)€變質(zhì)，降低葡萄的食用價(jià)值，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。如圖3所示，室溫下未經(jīng)抑霉唑處理的葡萄中霉菌總數(shù)為5.2×103g-1，250 mg·L-1抑霉唑處理的葡萄中霉菌總數(shù)為3.0×103g-1， 500 mg·L-1抑霉唑處理的葡萄中霉菌總數(shù)為3.0×102g-1。說(shuō)明在一定濃度范圍內(nèi)，抑霉唑能有效抑制葡萄表面霉菌的繁殖，降低葡萄貯藏期間的發(fā)病腐爛率。

2.4 葡萄中抑霉唑降解行為及規(guī)律

如圖4所示，隨著貯藏時(shí)間延長(zhǎng)，葡萄中抑霉唑的殘留量緩慢下降。250 mg·L-1抑霉唑浸果后的初始?xì)埩袅繛?.43 mg·kg-1，4 ℃冷藏18 d后，抑霉唑的殘留量為1.32 mg·kg-1；500 mg·L-1抑霉唑浸果后的初始?xì)埩袅孔罡?，?.54 mg·kg-1，4 ℃冷藏18 d后，抑霉唑的最終殘留量為2.14 mg·kg-1。

回歸分析(表1)顯示，葡萄中抑霉唑的降解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程：

圖4 不同濃度處理后葡萄中抑霉唑的降解趨勢(shì)Fig.4 Chromatograms of imazalil degradation in grape

Ct=C0e-kt。

(3)

式(3)中：k為降解速率常數(shù)；Ct和C0分別為農(nóng)藥在t和0時(shí)的濃度。由此計(jì)算出降解試驗(yàn)的降解半衰期(t1/2)：

t1/2=ln2/k。

(4)

如表1所示，250和500 mg·L-1抑霉唑處理?xiàng)l件下，抑霉唑在葡萄中的降解半衰期分別為19.6和26.7 d。初始處理濃度越大，葡萄上抑霉唑殘留的半衰期越長(zhǎng)。

2.5 風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)

表1 抑霉唑在葡萄貯藏期的降解動(dòng)力學(xué)方程

Table 1 Calibration of imazalil degradation during grape storage

抑霉唑處理濃度Imazalilconcentration/(mg·L-1)降解動(dòng)力學(xué)曲線Degradationcurver降解半衰期Degradationhalf?life/d250y=2 4293e-0 0353x0 956219 6500y=4 5364e-0 0260x0 939326 7

GB 2763—2014并未規(guī)定葡萄中抑霉唑的最大殘留限量，根據(jù)發(fā)表在《中國(guó)食品報(bào)》上《中國(guó)居民膳食指南》(第三次修訂)一文對(duì)膳食水果消費(fèi)量的要求(200～400 g)，以及抑霉唑的每日允許攝入量(ADI值，0.03 mg·kg-1)和急性參考劑量(ARfD值，0.05 mg·kg-1)，對(duì)各處理?xiàng)l件下貯藏葡萄中抑霉唑的膳食風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評(píng)估，急性和慢性膳食風(fēng)險(xiǎn)商(30～44歲的成年人)見(jiàn)表2。無(wú)論是250 mg·L-1還是500 mg·L-1濃度處理，急性和慢性膳食風(fēng)險(xiǎn)商均小于100%，屬于低風(fēng)險(xiǎn)范圍，且以250 mg·L-1處理下風(fēng)險(xiǎn)更低。

表2 抑霉唑的急性和慢性膳食風(fēng)險(xiǎn)商

Table 2 Chronic and acute risk of imazalil residues in grape %

3 結(jié)論

本研究對(duì)比了2種濃度(250、500 mg·L-1)抑霉唑處理對(duì)葡萄保鮮效果的影響。結(jié)果顯示，在一定濃度范圍內(nèi)，抑霉唑處理能抑制葡萄的生理代謝水平，減緩葡萄中糖和酸的損失，從而維持葡萄可溶性固形物和可滴定酸含量的穩(wěn)定。此外，抑霉唑處理還能抑制葡萄表面霉菌的繁殖，降低葡萄的發(fā)病腐爛率。這說(shuō)明，抑霉唑處理對(duì)葡萄的貯藏保鮮、保持果實(shí)風(fēng)味有積極作用。對(duì)貯藏后抑霉唑進(jìn)行膳食風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，無(wú)論是250還是500 mg·L-1抑霉唑處理，急性和慢性膳食風(fēng)險(xiǎn)商均小于100%，屬于低風(fēng)險(xiǎn)范圍，顯示抑霉唑用于葡萄保鮮具有應(yīng)用潛力。

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(責(zé)任編輯 高 峻)

Effects and risk assessment of imazalil treatment on grape storage

ZHANG Hao1, ZHANG Yiwen2, LING Shuping1, ZHANG Liang1, CHEN Ruoxia1, WU Yinliang1, ZHU Yong1(1.LaboratoryofQualityandSafetyRiskAssessmentforAgriculturalProducts(Ningbo)，MinistryofAgriculture，NingboAcademyofAgriculturalSciences，Ningbo315040，China; 2.BeijingInstituteofMetrology,Beijing100029,China)

In order to explore the effect of imazalil on grape storage， grapes were treated with varied concentrations of imazalil， and then were stored. It was shown that imazalil was favorable to keep grape quality， as soluble solids content and titratable acidity content were not reduced during storage， and it was able to inhibit the propagation of moulds. Chronic dietary intake risk and acute dietary intake risk of imazalil residues in grape were assessed. For either 250 mg·L-1or 500 mg·L-1imazalil treatment， both chronic and acute dietary intake risks in grape were below 100%， which indicated low pesticide residue risk.

grape; imazalil; dietary intake risk assessment

http://www.zjnyxb.cn

10.3969/j.issn.1004-1524.2017.05.22

2016-11-28

寧波市農(nóng)業(yè)重大專項(xiàng)(2015C110004)；寧波市社會(huì)發(fā)展科技攻關(guān)項(xiàng)目(2014C50012)；寧波市農(nóng)科院甬苗人才培養(yǎng)工程資助項(xiàng)目(2016YYM006)；寧波市農(nóng)科院院長(zhǎng)基金項(xiàng)目(2014NKYP007)；國(guó)家農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重大專項(xiàng)(GJFP201701101，GJFP201701103，GJFP201701104，GJFP201601101，GJFP201501201，GJFP2014011)

章豪(1985—)，男，浙江寧波人，博士，助理研究員，主要從事農(nóng)獸藥及有機(jī)污染物殘留降解分析及風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究。E-mail: xhiaopang@zju.edu.cn

S663.1；TS255.3

A

1004-1524(2017)05-0840-05

浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)ActaAgriculturaeZhejiangensis， 2017，29(5): 840-844

章豪， 張宜文，凌淑萍， 等. 抑霉唑?qū)ζ咸训谋ｕr效果及其風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[J]. 浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017，29(5)： 840-844.