抗熒光假單胞菌Carnobacterium spp. LB1培養(yǎng)發(fā)酵條件的優(yōu)化

董韓博，謝 晶，錢韻芳，楊勝平，茍 怡

（上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術研究中心，上海海洋大學食品學院，上海 201306）

抗熒光假單胞菌Carnobacterium spp. LB1培養(yǎng)發(fā)酵條件的優(yōu)化

董韓博，謝 晶*，錢韻芳，楊勝平，茍 怡

（上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術研究中心，上海海洋大學食品學院，上海 201306）

為了改善和優(yōu)化海產(chǎn)品源肉食桿菌（Carnobacterium）spp. LB1產(chǎn)有效抑菌代謝產(chǎn)物的培養(yǎng)發(fā)酵條件，提高對熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）的抑菌效果。基于單因素試驗，從對Carnobacterium spp. LB1抑菌效果有影響的5 個因素中篩選出3 個顯著影響因素，運用Design-Expert軟件的Box-Behnken試驗設計原則研究3 個顯著影響因素的重要水平和交互作用。結(jié)果表明：Carnobacterium spp. LB1的最佳培養(yǎng)發(fā)酵條件：初始pH 6.22、溫度28.6 ℃、葡萄糖質(zhì)量分數(shù)3%。在最優(yōu)培養(yǎng)條件下，Carnobacterium spp. LB1的濃縮發(fā)酵液在15 h和18 h對P.uorescens的抑菌率分別為80.7%、86.3%，其抑菌機理是Carnobacterium spp. LB1破壞了P.uorescens的細胞壁，導致其通透性增大，堿性磷酸酶大量溢出，使其代謝紊亂，從而抑制了P. fluorescens的生長。同時，最優(yōu)發(fā)酵條件下獲得的實驗結(jié)果平均值與模型預測值基本吻合，進而說明所建立回歸模型是可靠的。

熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）是一種革蘭氏陰性桿狀嗜冷微生物，具有分布范圍廣、營養(yǎng)需求單一、競爭定植力強等特點，在4 ℃條件下能夠快速繁殖；水產(chǎn)品由于捕撈、貯藏和運輸?shù)冗^程中的人為操作不當或者機械損傷，魚體易被該菌侵入引起致腐，它是水產(chǎn)品的主要優(yōu)勢致病菌和腐敗菌[1-4]。

乳酸菌是一種新型的微生物源生物保鮮劑，通過生態(tài)位競爭、營造酸性環(huán)境和產(chǎn)生H2O2、細菌素等抑菌性物質(zhì)抑制食品中銅綠假單胞菌、單增李斯特菌、金黃色葡萄球菌等常見腐敗菌和致病菌的生長和繁殖[5-9]。傅容輝等[10]研究乳酸菌對熒光假單胞菌、金黃色葡萄球菌等水產(chǎn)品常見的腐敗菌和致病菌的抑菌機理時，其中有3 株植物乳桿菌ACCC10171、ACCC11095和ACCC1118，2 株干酪乳桿菌ACCC11052和ACCC11050對熒光假單胞菌抑菌作用顯著，抑菌圈基本上都達到17.95 mm左右。高鵬等[11]從自制酸菜中分離得到的植物乳桿菌HLJ-174，對大腸桿菌、熒光假單胞菌等有明顯抑菌效果。Liu Hui等[12]從奶酪中分離得到一株植物乳桿菌Q7，產(chǎn)生一種新穎的植物乳桿菌素Q7，不僅能夠抑制熒光假單胞菌AS1.1802的生長繁殖，同時對惡臭假單胞菌AS1.1819、銅綠假單胞菌CICC21636等有良好的抑制作用。Vaz-Velho等[13]從水產(chǎn)品腸道中分離得到的Carnobacterium divergens V41使單增李斯特菌降低了1 個對數(shù)值。目前，一些乳酸菌產(chǎn)代謝產(chǎn)物和抑菌制劑已應用于食品防腐和動物飼料[14-17]，但是現(xiàn)已有的乳酸菌產(chǎn)有效抑菌代謝產(chǎn)物的量普遍較低，抑菌效果有限。從海產(chǎn)品腸道中Carnobacterium最適生長溫度相對較低[18-19]，協(xié)同低溫貯藏保鮮水產(chǎn)品，對水產(chǎn)品中的條件優(yōu)勢腐敗菌會有更好的抑菌效果，因此優(yōu)化培養(yǎng)從環(huán)境中所篩選得到的菌株以應用的水產(chǎn)品低溫貯運是相對有效可行的方法。

本研究以從帶魚腸道中篩選得到的抑菌效果最明顯的Carnobacterium spp. LB1作為供試菌，做后續(xù)優(yōu)化實驗，為提升其抑菌效果，以本實驗室保藏的熒光假單胞菌作為指示菌，采用微量法通過單因素試驗初篩顯著影響因素，采用響應面法的Box-Behnken設計對顯著影響因素的重要水平和交互作用進行研究和分析，以確定Carnobacterium spp. LB1抑菌性最優(yōu)的培養(yǎng)發(fā)酵條件和營養(yǎng)成分，提高其抑菌效果，為其在水產(chǎn)品保鮮上的研究和使用提供一定的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 菌株

菌株Carnobacterium spp. LB1為帶魚腸道中獲?。粺晒饧賳伟鸀樯虾：Ｑ蟠髮W上海水產(chǎn)品加工及貯藏工程技術研究中心保存。

1.2 培養(yǎng)基與試劑

胰酪胨大豆瓊脂培養(yǎng)基（soybean-casein digest agar，TSA）、胰酪胨大豆肉湯（trypticase soy broth，TSB）培養(yǎng)基、腦心浸液肉湯（brain heart influsion，BHI）培養(yǎng)基、含0.6%酵母膏的胰酪胨大豆肉湯（trypticase soybrothyeast extract，TSB-YE）培養(yǎng)基青島海博生物技術有限公司；葡萄糖、蔗糖、果糖、尿素、酵母膏、氯化銨 國藥集團化學試劑有限公司；堿性磷酸酶（alkaline phosphomonoestesase，AKP）試劑盒 南京建成生物工程研究所。

1.3 方法

1.3.1 預處理

指示菌的活化：將本實驗室－80 ℃保藏的熒光假單胞菌（P.uorescens）在TSA固體培養(yǎng)基上劃線，37 ℃培養(yǎng)48 h，挑單菌落于液體培養(yǎng)基37 ℃過夜搖床培養(yǎng)，活化傳代培養(yǎng)3～4 次。

供試菌的活化：將－80 ℃保藏菌株Carnobacterium spp. LB1在TSA固體培養(yǎng)基上劃線，挑單菌落接種到BHI液體培養(yǎng)基中，30 ℃靜置培養(yǎng)24 h，反復傳代接種培養(yǎng)3～4 次。

濃縮發(fā)酵液的獲取：將活化的Carnobacterium spp. LB1接種到TSB-YE液體培養(yǎng)基中，靜置培養(yǎng)一定時間，10 000 r/min離心15 min，用0.22 μm的微孔濾膜過濾去除菌體，置于－80 ℃冰箱中冷凍12 h，經(jīng)真空冷凍干燥得10 倍濃縮發(fā)酵液[20]，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 抑菌性物質(zhì)的單因素試驗

微量法測抑菌性物質(zhì)的抑菌率[21]。無菌條件下，在96微孔板上添加100 μL的指示菌菌懸液，取100 μL濃縮發(fā)酵液添加到含有100 μL指示菌菌懸液的96 孔板上，以添加同體積的無菌水的孔作為空白對照，以添加100 μL濃縮發(fā)酵液的100 μL無菌液體培養(yǎng)基為參比溶液，將96微孔板用保鮮膜包好以防止外界污染。包好的96 孔板置于37 ℃搖床培養(yǎng)，每間隔3 h用酶標儀在600 nm波長處測定并記錄菌懸液的吸光度，按照下式計算抑菌率：

式中：A樣品為濃縮發(fā)酵液、指示菌菌懸液混合后的吸光度；A參比為濃縮發(fā)酵液、無菌液體培養(yǎng)基混合后的吸光度；A空白為無菌水、指示菌菌懸液混合后的吸光度。

1.3.2.1 培養(yǎng)溫度對抑菌率的影響

將活化后傳代培養(yǎng)2 次的Carnobacterium spp. LB1接種TSB-YE液體培養(yǎng)基中，在25、30、37 ℃條件下靜置培養(yǎng)36 h，采用微量法以P. fluorescens為指示菌檢測不同培養(yǎng)溫度對抑菌率的影響。

1.3.2.2 初始pH值對抑菌率的影響

調(diào)節(jié)TSB-YE的初始pH值為5.0、5.5、6.0、6.5、7.0，將活化后的肉食桿菌接種到不同pH值液體培養(yǎng)基中，在最適溫度下靜置培養(yǎng)，得到濃縮發(fā)酵液。采用微量法以P.uorescens為指示菌檢測不同初始pH值對抑菌率的影響。

1.3.2.3 接種量對抑菌率的影響

將活化后傳代培養(yǎng)兩次的Carnobacterium spp. LB1以1%、2%、3%、4%、5%的接種量接種TSB-YE液體培養(yǎng)基中，根據(jù)以上試驗結(jié)果，在最佳的初始pH值和溫度下靜置培養(yǎng)，得到濃縮發(fā)酵液，采用微量法以P.uorescens為指示菌檢測不同接種量對抑菌率的影響。

1.3.2.4 碳源對抑菌率的影響

取葡萄糖、果糖、蔗糖添加到TSB-YE液體培養(yǎng)基中，使其終質(zhì)量分數(shù)為2%，采用微量法抑菌實驗以獲取抑菌效果最好的碳源，以P.uorescens為指示菌采用微量法從1%、2%、3%、4%和5%中篩選最佳碳源的最優(yōu)終質(zhì)量分數(shù)。

1.3.2.5 氮源對抑菌率的影響

取尿素、酵母膏、氯化銨添加到TSB-YE液體培養(yǎng)基中，使其終質(zhì)量分數(shù)為2%，采用微量法抑菌實驗以獲取抑菌效果最好的氮源，以P.uorescens為指示菌采用微量法從1%、2%、3%、4%和5%中篩選最佳氮源的最優(yōu)終質(zhì)量分數(shù)。

1.3.3 響應面法和數(shù)據(jù)分析

根據(jù)單因素水平試驗結(jié)果，最終優(yōu)選出3 個主要影響因素，進而確定數(shù)值范圍。按照響應面試驗的Box-Behnken試驗設計方案進行。

1.3.4 最佳抑菌效果優(yōu)化結(jié)果驗證和濃縮發(fā)酵液抑菌特性初步分析

1.3.4.1 對細胞膜通透性的影響

將P. fluorescens于37 ℃條件下?lián)u床培養(yǎng)，取適量菌液，加入一定量的濃縮發(fā)酵液，用蒸餾水代替發(fā)酵液作為對照組，分別于0、2、4、6、8、10、12 h測定培養(yǎng)液的電導率值，從而確定金屬離子的滲出變化趨勢。

1.3.4.2 對細菌菌體內(nèi)AKP酶的影響

活化得到P.uorescens菌懸液，加入濃縮發(fā)酵液。使用搖床將其置于37 ℃條件下培養(yǎng)16～18 h，對照組不添加保鮮劑，空白為未接種的培養(yǎng)液。分別于0、2、4、6、8、10、12 h取上清液，按照ATP酶測試試劑盒中操作說明進行測試。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)發(fā)酵條件對Carnobacterium spp. LB1抑菌活性的影響

由圖1a可知，在溫度為30 ℃時，其所得到的發(fā)酵液在15 h和18 h時的抑菌率相比對照組較高，這與Sip等[19]抑菌研究培養(yǎng)發(fā)酵條件一致。當初始pH值為6.5時，得到的濃縮發(fā)酵液對P. fluorescens的抑菌率達到最大，15 h的抑菌率達到93%，18 h為89%，初始pH值影響了發(fā)酵液中有效抑菌產(chǎn)物的產(chǎn)生[22]，也有一些研究表示pH值對乳酸菌的抑菌能力影響不大，只是和接種量呈現(xiàn)負相關[19]。當接種量小于3%時，抑菌活性隨著接種量的增加而加強，接種量為3%時抑菌活性最強，當接種量大于3%時，抑菌活性隨著接種量的增加而降低，后續(xù)實驗采用接種量3%作為Carnobacterium spp. LB1的培養(yǎng)發(fā)酵條件。

圖 1 溫度（a）、初始pH值（b）、接種量（c）對Carnobacteriumspp. LB1抑菌能力的影響Fig. 1 Effect of temperature (a), initial pH (b), inoculum amount (c) on antimicrobial activity of fermentation broth of Carnobacterium spp. LB1

2.2 不同營養(yǎng)成分對Carnobacterium spp. LB1抑菌活性的影響。

圖 2 碳源（a、b）和氮源（c、d）對Carnobacterium spp. LB1抑菌能力的影響Fig. 2 Effects of carbon sources (a, b) and nitrogen sources (c, d) on antimicrobial activity of fermentation broth of Carnobacterium spp. LB1

如圖2所示，不同的碳源對Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液的抑菌效果有明顯的影響，3 種碳源之間具有明顯差異，在15 h和1 8h時的抑菌活性依次為：葡萄糖＞蔗糖＞果糖，添加葡萄糖為碳源時，得到的濃縮發(fā)酵液對P. fluorescens的抑菌率明顯高于其他碳源，葡萄糖質(zhì)量分數(shù)從1%開始，Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液的抑菌活性隨著葡萄糖質(zhì)量分數(shù)的升高而增大，當葡萄糖質(zhì)量分數(shù)為3%時出現(xiàn)峰值，此時Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液抑菌活性較強，這與楊云喜等[23]研究結(jié)果相似，其從酸菜中篩選出一株對革蘭氏陽性和革蘭氏陰性菌都有明顯抑菌效果的植物乳酸桿菌9-4，結(jié)果表明葡萄糖是植物乳酸桿菌9-4合成抗菌肽的最優(yōu)碳源，當葡萄糖質(zhì)量分數(shù)為2.5%，抑菌效果出現(xiàn)峰值，達到最佳。

選擇氯化銨為氮源，當其質(zhì)量分數(shù)為1%時，其對指示菌的抑菌效果較好。這與吳大華[24]研究結(jié)果相似，1%氯化銨促進了枯草芽孢桿菌CS27的細胞生長，有效地促進了其發(fā)酵過程中代謝產(chǎn)物的產(chǎn)生。Carnobacterium spp. LB1的濃縮發(fā)酵液的抑菌活性隨著氯化銨終質(zhì)量分數(shù)的增長反而降低，可能由于氯化銨質(zhì)量分數(shù)過大，在微生物利用降解過程中產(chǎn)生大量氨類物質(zhì)，導致培養(yǎng)液的pH值升高，不利于Carnobacterium spp. LB1的生長和繁殖，導致Carnobacterium spp. LB1數(shù)量減少，進而影響有效抑菌代謝物的產(chǎn)生。

2.3 響應面試驗

2.3.1 預測模型建立及顯著性檢驗

表 1 中心組合試驗設計方案和結(jié)果Table 1 Central composite design with experimental results

根據(jù)單因素試驗結(jié)果，篩選對Carnobacterium spp. LB1的濃縮發(fā)酵液的抑菌活性有明顯影響效果的初始pH值、溫度、葡萄糖質(zhì)量分數(shù)為3 個顯著影響因素。采用Box-Behnken試驗設計，試驗方案和結(jié)果見表1。通過以不同條件下得到的濃縮發(fā)酵液對P.uorescens的抑菌率為響應值，根據(jù)表1中的試驗數(shù)據(jù)，運用Design Expert 8.0統(tǒng)計軟件進行處理，對Box-Behnken設計試驗結(jié)果進行二次多項回歸擬合，建立抑菌率（Y）與初始pH值（A）、溫度（B）和葡萄糖質(zhì)量分數(shù)（C）3 個因素的多項回歸方程：Y=5.840+0.670A－0.390B－0.005C+0.180AB+ 0.100AC－0.210BC－0.560A2－0.580B2－0.310C2。

表 2 方差分析Table 2 Analysis of variance

對上述回歸方程進行方差分析，結(jié)果表2所示，該模式回歸顯著（F=18.68），回歸方程的失擬性檢驗表示不顯著（P=0.329 6＞0.05）?；貧w方程的R2Adj為0.919 1，說明該方程能夠解釋91.91%響應值的變化，決定系數(shù)R2為0.971 1，說明Carnobacterium spp. LB1的有效代謝產(chǎn)物對P.uorescens的抑菌率的實測值和預測值具有良好的擬合性。回歸方程中3 種顯著影響因素對響應值影響的顯著程度通過檢驗F值來判定，所對應變量的P值和其顯著程度呈負相關，即P值越小，對應變量的顯著程度反而越高。模型一次項A、B極顯著，C不顯著；交互項AB、AC和BC不顯著，二次項A2、B2極顯著，C2顯著。

由上述多項回歸模型得到的立體響應面圖（圖3），分別體現(xiàn)了對Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液的抑菌性有明顯影響效果的3 個顯著因素兩兩之間交互作用。通過回歸方程發(fā)現(xiàn)，二次項系數(shù)均為負值，表示其形成的拋物面開口朝下，具有極大值點。利用Design Expert 6.0軟件對Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液抑菌效果的3 個顯著影響因素進一步優(yōu)化分析，所對應的3 個顯著因素最佳條件分別為初始pH 6.22、溫度28.6 ℃、葡萄糖質(zhì)量分數(shù)3%，此時濃縮發(fā)酵液對指示菌的抑菌率最高，達到85.4%。根據(jù)實驗室實際操作的方便性和方差分析結(jié)果，確定Carnobacterium spp. LB1最佳培養(yǎng)發(fā)酵條件為：初始pH 6.2、溫度28 ℃、葡萄糖質(zhì)量分數(shù)為3%。

2.3.2 驗證實驗結(jié)果

以初始pH 6.2、溫度28 ℃、葡萄糖質(zhì)量分數(shù)3%為Carnobacterium spp. LB1發(fā)酵培養(yǎng)條件，測定Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液對P. fluorescens的抑菌率。濃縮發(fā)酵液對指示菌的抑菌率在15 h和18 h時的平均值分別為80.7%、86.3%。說明上述回歸方程的擬合性良好，能夠很好地反映培養(yǎng)條件和營養(yǎng)成分對Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液抑菌活性的影響。

2.4 Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液對P.uorescens的抑菌機理研究

圖 4 濃縮發(fā)酵液對熒光假單胞菌菌液電導率的影響Fig. 4 Effects of concentrated fermentation broth of Carnobacterium spp. LB1 on electric conductivity of P.uorescens cell suspension

2.4.1 對P.uorescens細胞膜通透性的影響結(jié)果當微生物細胞膜因為外界不利環(huán)境或者抑菌劑而遭到破壞時，其胞內(nèi)電解質(zhì)如Na+、K+等離子會大量漏出，滲入到培養(yǎng)液中，導致培養(yǎng)液的電導率升高。因此，通過監(jiān)測培養(yǎng)液的電導率的變化可以間接反映細胞膜通透性的變化狀況[25-27]。以P. fluorescens為指示菌，由圖4可知，濃縮發(fā)酵液處理的實驗組的電導率明顯高于對照組，說明Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液對熒光假單胞菌的影響作用較大，破壞其細胞膜結(jié)構，使其通透性增大，造成大量電解質(zhì)外滲。6 h時，實驗組達到最大（17.84 mS/cm），之后略有降低，可能由于隨著時間的延長，濃縮發(fā)酵液濃度降低等因素條件，對細胞膜的破壞作用有限，在靜電作用下，使菌液中其他金屬離子和細胞膜結(jié)合，從而導致菌液電導率略有降低[20]。

2.4.2 對P.uorescens菌體內(nèi)AKP的影響

圖 5 濃縮發(fā)酵液對熒光假單胞菌AKP酶活力的影響Fig. 5 Effect of concentrated fermentation broth of Carnobacterium spp. LB1 on AKP activity in P.uorescens

AKP是存在于細菌細胞膜和細胞壁之間的一種非特異性磷酸單酯酶，在細菌代謝過程中起到至關重要的作用[28]。微生物正常生長狀態(tài)下測得細菌內(nèi)AKP難度很大，但當細菌細胞壁由于外界因素破損，胞體通透性增大，AKP大量滲透到胞外，因此，通過測定培養(yǎng)液中AKP的變化可以很好反映菌體細菌壁通透性的變化情況[29]。由圖5可知，經(jīng)Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液處理后的熒光假單胞菌菌液的AKP含量從第2上升速率達最快，之后上升幅度緩慢，6 h后呈現(xiàn)平穩(wěn)趨勢。而對照組從0～12 h始終處于低AKP含量的平穩(wěn)增長趨勢。Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液破環(huán)P. fluorescens的胞體完整性，使大量AKP溢出，導致細胞的代謝循環(huán)受阻，從而抑制P.uorescens的生長。

3 結(jié) 論

單因素試驗初步優(yōu)化培養(yǎng)發(fā)酵條件和營養(yǎng)成分結(jié)果：Carnobac terium spp. LB1的最佳接種量3%、最佳初始pH 6.5，最佳培養(yǎng)溫度30 ℃、最佳碳源為3%葡萄糖、最佳氮源為1%無機氮。

在單因素試驗結(jié)果基礎上，選取對Carnobacterium spp. LB1的抑菌效果有明顯效果的初始pH值、溫度和葡萄糖質(zhì)量分數(shù)作為3 個顯著影響因素。采用微量法以P.uorescens為指示菌利用Design expert 6.0軟件處理Box-Behnken設計試驗結(jié)果，建立了抑菌率同初始pH值、溫度和葡萄糖質(zhì)量分數(shù)3 個顯著因素的二次多項回歸方程，經(jīng)驗證后該模型可靠。

確定Carnobacterium spp. LB1的最佳培養(yǎng)發(fā)酵條件為：初始pH 6.22、溫度28.6 ℃、葡萄糖質(zhì)量分數(shù)3%，此時得到的濃縮發(fā)酵液對指示菌的抑菌率最高，達到85.4%?？紤]到實驗室實際操作的方便性和方差分析結(jié)果，確定Carnobacterium spp. LB1最佳培養(yǎng)發(fā)酵條件為：初始pH 6.2、溫度28 ℃、葡萄糖質(zhì)量分數(shù)為3%。驗證實驗時，Carnobacterium spp. LB1在最佳發(fā)酵條件下獲得的濃縮發(fā)酵液，對指示菌在15 h和18 h時的抑菌率的平均值分別為80.7%、86.3%。

在最佳發(fā)酵培養(yǎng)條件獲得的Carnobacterium spp. LB1濃縮發(fā)酵液，能夠破壞P. fluorescens的細胞膜，菌體內(nèi)AKP大量溢出，濃縮發(fā)酵液剛加入時，增大速率較大，6 h后呈平穩(wěn)趨勢，此時，P.uorescens細胞通透性達到最大，導致胞內(nèi)電解質(zhì)大量漏出，導致其代謝紊亂，抑制P.uorescens的生長和繁殖。

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Optimization of Culture Conditions of Carnobacterium spp. LB1 for Enhanced Production of Anti-Pseudomonasuorescens Metabolites

DONG Hanbo, XIE Jing*, QIAN Yunfang, YANG Shengping, GOU Yi
(Shanghai Engineering Research Center of Aquatic Product Processing and Preservation, College of Food Science and Technology, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China)

This study aimed to optimize the culture conditions for Carnobacterium spp. LB1, isolated from the ribbon sh intestine, to produce anti-Pseudomonas fluorescens metabolites. By using one-factor-at-a-time method, three of the five factors were selected for their significant influences on the antibacterial activity. A Box-Behnken design was applied to evaluate the effects of interaction among the chosen variables and optimize them. The optimum culture conditions obtained were as follows: initial pH, 6.22; temperature, 28.6 ℃; and glucose concentration, 3%, where the percentage inhibition of concentrated fermentation broth harvested after 15 and 18 h against Pseudomonasuorescens were 80.7% and 86.3%, respectively. The antibacterial mechanism was due to increased cell wall permeability and leakage of a large amount of alkaline phosphatase (AKP) after the destruction of the cell wall of Pseudomonasuorescens, leading to metabolic disorders. Finally, the experimental results obtained under the optimized fermentation conditions were in good agreement with the model predictions, indicating that the established model in this study was feasible.

Carnobacterium spp. LB1; Pseudomonasuorescens; antibacterial activity; response surface methodology

10.7506/spkx1002-6630-201710010

Q93-331

A

1002-6630（2017）10-0055-06

董韓博, 謝晶, 錢韻芳, 等. 抗熒光假單胞菌Carnobacterium spp. LB1培養(yǎng)發(fā)酵條件的優(yōu)化[J]. 食品科學, 2017, 38(10): 55-60. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201710010. http://www.spkx.net.cn

DONG Hanbo, XIE Jing, QIAN Yunfang, et al. Optimization of culture conditions of Carnobacterium spp. LB1 for enhanced production of anti-Pseudomonas fluorescens metabolites[J]. Food Science, 2017, 38(10): 55-60. (in Chinese with English abstract)

10.7506/spkx1002-6630-201710010. http://www.spkx.net.cn

2016-09-03

國家自然科學基金面上項目（31571914）；上海市科技興農(nóng)重點攻關項目（滬農(nóng)科攻字（2016）第1-1號）；上海市科委平臺能力提升項目（16DZ2280300）

董韓博（1991—），男，碩士研究生，研究方向為食品科學與工程。E-mail：donghanbo2015@163.com

*通信作者：謝晶（1968—），女，教授，博士，研究方向為食品工程。E-mail：jxie@shou.edu.cn

肉食桿菌；熒光假單胞菌；抑菌；響應面