益腎化濕顆粒對(duì)糖尿病大鼠腎組織的FoxO1表達(dá)的影響及意義

劉 靜

河北唐山開灤總醫(yī)院 河北省唐山市 063000

益腎化濕顆粒對(duì)糖尿病大鼠腎組織的FoxO1表達(dá)的影響及意義

劉 靜

河北唐山開灤總醫(yī)院 河北省唐山市 063000

目的:探討益腎化濕顆粒對(duì)糖尿病大鼠腎組織FoxO1表達(dá)的影響，探討益腎化濕顆粒對(duì)糖尿病腎病模型大鼠腎保護(hù)作用的可能機(jī)制。方法:采用STZ誘導(dǎo)糖尿病腎病大鼠模型，大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、益腎化濕治療組、洛汀新治療組。觀察各組大鼠治療后腎功能（BUN、Scr）、腎臟肥大指數(shù)、血β2微球蛋白含量及Fox01的表達(dá)等指標(biāo)的變化。結(jié)果:與模型組比較，益腎化濕顆粒治療組大鼠血BUN、Scr腎臟肥大指數(shù)顯著改善（P＜0.01），血β2-MG明顯下降（P＜0.01），腎小球Fox01陽(yáng)性表達(dá)率明顯下降（P＜0.01），益腎化濕顆粒組與洛汀新組比較，各項(xiàng)指標(biāo)無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)論:益腎化濕顆?？赡芡ㄟ^(guò)降低腎小球Fox01的表達(dá)，使腎小球細(xì)胞凋亡延緩，從而可以達(dá)到保護(hù)腎臟，改善腎臟功能的目的。

益腎化濕顆粒；糖尿病腎??；Fox01

隨著社會(huì)的發(fā)展，人們生活水平逐漸提高，糖尿?。╠iabetes mellitus, DM）的患病率逐年增加，在發(fā)達(dá)國(guó)家，糖尿病腎病已居終末期腎衰竭病因的首位，糖尿病腎病(DN)是糖尿病慢性微血管并發(fā)癥之一[1]。2015年10月我們觀察了益腎化濕顆粒對(duì)DN模型大鼠腎小球Fox01表達(dá)的影響，探討其對(duì)DN腎小球系膜細(xì)胞凋亡的影響，揭示其腎組織保護(hù)作用的可能機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物

Wistar雄性大鼠，48只，體質(zhì)量(250±50)g，由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 用藥及試劑

益腎化濕顆粒由廣東康臣藥業(yè)提供;洛汀新：北京諾華制藥有限公司生產(chǎn)；鏈脲佐菌素（STZ）：購(gòu)自sigma公司;Fox01試劑盒:購(gòu)自上海研晶生物科技有限公司。

2 方法

2.1 模型制作及分組給藥

大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，稱體重，經(jīng)尿糖、尿蛋白定性檢測(cè)為陰性后，隨機(jī)分為正常組（12只）造模組（36只），造模組按60mg/Kg體重一次性左下腹腔注射STZ，正常對(duì)照組注射同等劑量的檸檬酸鹽緩沖液注射72小時(shí)后取鼠尾微量血測(cè)定血糖(采用羅氏ACCU-CHEK Active血糖儀)，空腹血糖>16.7mmol/L者，確定糖尿病模型建立。1周后，隨機(jī)抽取兩只測(cè)尿微量白蛋白＞15 μg/ml，確定DN模型形成，將造模成功后的18只大鼠隨機(jī)分為模型組6只，益腎化濕顆粒治療組6只，洛汀新治療組6只。正常組 、模型組分別給蒸餾水2 ml灌胃， 益腎化濕顆粒組給予益腎化濕顆粒混懸液150mg/kg灌胃,洛汀新組給洛汀新（1.5mg/kg）蒸餾水混懸液灌胃。以上給藥均1次/d，共持續(xù)8周。

2.2 觀測(cè)指標(biāo)及方法

實(shí)驗(yàn)第8周末，隔夜空腹腹腔麻醉下后采血，，抗凝分離血漿留待檢測(cè)。放射免疫分析方法測(cè)定血β2微球蛋白含量，全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)BUN，Scr；大鼠處死后摘取右腎，腎臟稱重，腎組織常規(guī)石蠟包埋，切片，按Fox01試劑盒操作說(shuō)明，免疫組化法測(cè)定Fox01表達(dá)。

2.3 資料統(tǒng)計(jì)與分析

3 結(jié)果

（1）模型組大鼠BUN、Scr較正常組明顯增高，差異均具有顯著性（P<0.01）；與模型組比較，益腎化濕顆粒組、洛汀新組大鼠BUN、Scr明顯降低，有顯著性差異（P<0.01）。益腎化濕顆粒、洛汀新兩組比較，上述指標(biāo)無(wú)顯著性差異（P>0.05）。說(shuō)明益腎化濕顆粒和洛汀新治療在改善糖尿病大鼠腎功能、腎臟肥大指數(shù)方面均可能有顯著療效，兩者之間無(wú)顯著性差異。

（2）模型組大鼠血β2-MG含量較正常組明顯升高，有顯著性差異（P<0.01）；益腎化濕顆粒組、洛汀新組與模型組比較血β2-MG含量均有明顯降低，有顯著性差異（P<0.01）。益腎化濕顆粒組與洛汀新組比較，兩者無(wú)明顯差異（P>0.05）。

（3）各組大鼠腎小球Fox01的表達(dá)免疫組化陽(yáng)性表達(dá)分析，每例切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，隨后利用光鏡400倍下將圖像捕入病理圖像分析軟件對(duì)每個(gè)視野進(jìn)行分析，可得出陽(yáng)性細(xì)胞的平均光密度值和陽(yáng)性細(xì)胞率，反映了Fox01表達(dá)。模型組大鼠腎小球Fox01的表達(dá)較正常組明顯升高，有顯著性差異（P<0.01）；益腎化濕顆粒組、洛汀新組與模型組比較腎小球Fox01的表達(dá)均有明顯降低，有顯著性差異（P<0.01）。益腎化濕顆粒組與洛汀新組比較，兩者無(wú)明顯差異（P>0.05），見(jiàn)表1。

表1：六組相關(guān)指標(biāo)比較（n=12,）

表1：六組相關(guān)指標(biāo)比較（n=12,）

注：與對(duì)照組比較，*P<0.05；與DN模型組比較，#P<0.05

檢驗(yàn)指標(biāo) 正常組 DN模型組 益腎化濕顆粒治療組 洛汀新治療組KW(g) 5.41±0.85 3.76±0.68* 3.73±0.14* 3.74±0.15*KW/BW(g/Kg) 2.08±0.01 5.03±0.08* 2.79±0.12# 2.67±0.17#β2-MG(mmol/L) 3.51±0.29 10.09±0.08* 8.33±0.66*# 8.63±1.30*#BUN(mmol/L) 7.37±0.37 25.51±1.79* 17.52±1.38*# 14.78±2.65*#Scr(umol/L) 15.31±1.87 32.79±1.33* 23.27±1.93*# 23.02±2.19*#Fox01陽(yáng)性細(xì)胞平均光密度值(OD值) 6.72±0.23 24.01±1.29* 13.81±1.47*# 14.03±1.47*#

4 討論

系膜細(xì)胞是腎小球中的固有細(xì)胞之一，在糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要機(jī)制之一是系膜細(xì)胞的凋亡[2]。有研究顯示糖尿病時(shí)的高糖環(huán)境能夠誘導(dǎo)腎小球系膜細(xì)胞的凋亡增加，抑制系膜細(xì)胞凋亡能夠延緩糖尿病腎病的進(jìn)展[3]，多個(gè)研究證實(shí)，F(xiàn)oxO1參與糖尿病腎病的發(fā)生發(fā)展，其中一重要機(jī)制是FoxO1與高糖誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞凋亡密切相關(guān)[4]。當(dāng)前學(xué)界對(duì)益腎化濕顆粒參與腎小球系膜細(xì)胞Fox01的表達(dá)的研究并不多，本研究顯示，模型組、益腎化濕顆粒組及洛汀新組各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)均顯著高于正常對(duì)照組，益腎化濕顆粒組及洛汀新組顯著低于模型組，且本研究提示益腎化濕顆粒及洛汀新均對(duì)大鼠糖尿病腎組織Fox01的活性予以有效的抑制。這可以證實(shí)STZ造模糖尿病大鼠可以并發(fā)糖尿病腎病，而益腎化濕顆粒及洛汀新都可以抑制STZ造模大鼠糖尿病腎病的進(jìn)展。國(guó)內(nèi)外大量實(shí)驗(yàn)證實(shí)，腎素-血管緊張素系統(tǒng)阻斷劑對(duì)慢性腎臟病具有腎臟保護(hù)作用，而洛汀新作為活性較強(qiáng)的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑之一，可以使外周血管阻力降低，進(jìn)而減輕后負(fù)荷，減輕腎內(nèi)壓，因此起到保護(hù)腎組織作用；而益腎化濕顆粒由人參、黃芪、白術(shù)、茯苓等組成，其中人參能使腎小管管腔的內(nèi)皮反應(yīng)性增強(qiáng)及促使脂質(zhì)去氧化作用；黃芪能補(bǔ)脾氣利尿消腫，同時(shí)能改善體內(nèi)氧自由基的清除，改善蛋白質(zhì)代謝，提高血漿白蛋白水平，茯苓具有利濕化濁之功效，諸藥合用可以達(dá)到延緩糖尿病腎病進(jìn)展的作用。益腎化濕顆粒與具有代表意義的ACEI類藥物洛汀新具有同樣的抑制腎小球系膜細(xì)胞Fox01表達(dá)的作用，有一定的臨床價(jià)值[5]，為糖尿病腎病的藥物選擇提供了更多的可能性。

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