瑞舒伐他汀鈣對(duì)野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動(dòng)脈高壓及對(duì)肺組織mcp-1表達(dá)的影響①

葉金玲，楊光遠(yuǎn)，孫 晶，徐 濤

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

瑞舒伐他汀鈣對(duì)野百合堿誘導(dǎo)大鼠肺動(dòng)脈高壓及對(duì)肺組織mcp-1表達(dá)的影響①

葉金玲，楊光遠(yuǎn)，孫 晶，徐 濤

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：通過(guò)實(shí)驗(yàn)了解瑞舒伐他汀鈣在野百合堿誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈高壓以及肺組織mcp-1表達(dá)中的影響。方法：成年SD大鼠24只，隨機(jī)分為瑞舒伐他汀治療組 (R組)；野百合堿誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓組 (M組 )；正常空白對(duì)照組 (C組)。M組及R組分別給予腹部皮下一次性注射50mg∕kg野百合堿，對(duì)照組給予等量生理鹽水，并從注射之日起給予R組瑞舒伐他汀鈣2mg∕kg·d灌胃。觀察各組大鼠的一般情況，四周后實(shí)驗(yàn)結(jié)束，分別測(cè)量平均右心室壓力(mRVP)、肺動(dòng)脈平均壓(mPAP)，右心室肥厚指數(shù) (RVHI)及MCP-1表達(dá)水平。結(jié)果：M組的肺動(dòng)脈壓及右心室肥厚指數(shù)(RVHI%)較對(duì)照組均明顯升高，R組肺動(dòng)脈壓及右心室肥厚指數(shù)較M組均顯著降低(P<0.05)，但均高于對(duì)照組。與對(duì)照組比較，M組的肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織的MCP-1表達(dá)增加,其中R組比M組肺組織MCP-1表達(dá)減少。結(jié)論：瑞舒伐他汀鈣下調(diào)MCP-1 改善野百合堿誘導(dǎo)的大鼠肺動(dòng)脈高壓。

肺動(dòng)脈高壓；瑞舒伐他汀鈣；單核細(xì)胞趨化因子-1(mcp-1)

肺動(dòng)脈高壓是多種原因?qū)е碌姆蝿?dòng)脈壓力和肺血管阻力升高的一類惡性心血管疾病。是眾多心、肺疾病發(fā)生及發(fā)展的重要病理生理環(huán)節(jié)，其病理學(xué)過(guò)程包括肺血管收縮、原位血栓形成及肺血管重構(gòu)，最終因過(guò)度血管內(nèi)膜增生及血管阻塞導(dǎo)致嚴(yán)重的肺動(dòng)脈高壓[1]。野百合堿是一種吡咯烷類生物堿，生物活性強(qiáng)，經(jīng)肝臟代謝脫氫后可產(chǎn)生細(xì)胞毒性，隨著血流經(jīng)過(guò)肺時(shí)損傷肺血管內(nèi)皮細(xì)胞，血液中蛋白酶外滲，促發(fā)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，平滑肌細(xì)胞過(guò)度增生，血管收縮，最終出現(xiàn)肺動(dòng)脈高壓。他汀類藥物是多種3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶復(fù)合物抑制劑的總稱，此類藥物除降脂作用外，還具有抗炎，抗氧化，改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能，影響血管生成，抑制心室重構(gòu)，抗腫瘤，免疫調(diào)整等作用[2],近幾年國(guó)內(nèi)外一些研究表明他汀類藥物通過(guò)其多效性能有效改善肺動(dòng)脈高壓[4]。

1 材料和方法

1.1 材料

Sprague-Dawley大鼠(清潔級(jí))：上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司 野百合堿(MCT)：Sigma公司 瑞舒伐他汀鈣 阿斯利康制藥有限公司 大鼠mcp-1試劑盒: 上海酶聯(lián)生物有限公司。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)方法：將體重在220～250g，皮毛光滑，精神狀態(tài)良好的24只Sprague-Dawley大鼠隨機(jī)分為正?？瞻讓?duì)照組(C組)、野百合堿誘導(dǎo)肺動(dòng)脈高壓組(M組)和瑞舒伐他汀鈣處理組(R組)，每組 8 只。M組和R組采用野百合堿(50mg/kg) 一次性皮下注射，對(duì)照組以等量生理鹽水代替。并從野百合堿皮 下 注 射之日 起 ， 每 日 一次給 予R組 瑞 舒 伐 他 汀 鈣(2mg/ (kg·d)) 灌胃，C組、M組僅給予生理鹽水灌胃， 直至第 4周。

1.2.2 檢測(cè)方法：實(shí)驗(yàn)結(jié)束當(dāng)日給予大鼠10% 烏拉坦( 1g/kg) 腹腔注射，小心分離右側(cè)頸外靜脈，插入內(nèi)徑為0. 9mm的聚苯乙烯管,經(jīng)右心房、右心室、至肺動(dòng)脈，測(cè)定并記錄肺動(dòng)脈平均壓(mPVP)及平均右心室壓力(mRVP)，處死小鼠后完整取下心臟，,沿室間隔分離出右心室(RV) 和左心室加室間隔(LV+S)，濾紙吸水后分別稱重，通過(guò)RV/(LV+S)計(jì)算出右心室肥厚指數(shù) (RVHI) 。

抽取大鼠1mL血液置于1.5mL離心管中，以3000r/min的速度離心10min，分離血清，置于-70℃冰箱中保存待測(cè)(以上操作需在30min內(nèi)完成)。 對(duì)照組以相同方法抽血待測(cè)。 試劑盒選自上海酶聯(lián)生物有限公司，采用酶聯(lián)免疫吸附法 (ELISA)檢測(cè)血清中MCP-1水平。以上操作均嚴(yán)格按照試劑盒要求進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 瑞舒伐他汀鈣降低大鼠平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)和抑制其右心室肥厚 野百合堿明顯增加大鼠平均肺動(dòng)脈壓并促進(jìn)其右心室肥厚，而瑞舒伐他汀鈣干預(yù)后可以降低大鼠平均肺動(dòng)脈壓并抑制其右心室肥厚。見表 1。

表1 三組mPAP和RVHI的比較

mPAP：肺動(dòng)脈平均壓；RVHI：右心室肥厚指數(shù)；與另外兩組比,*P<0.05，與對(duì)照組比較，#P<0.05。

2．2 野百合堿上調(diào)大鼠肺組織MCP-1的表達(dá)， 瑞舒伐他汀鈣抑制野百合堿誘導(dǎo)肺動(dòng)脈。見表2。

表2 三組大鼠血清MCP-1水平

注：與另外兩組相比，*P<0.01;與正常對(duì)照組相比，#P<0.05。

3 討論

肺動(dòng)脈高壓是一類惡性心血管疾病，嚴(yán)重時(shí)可誘發(fā)右心衰竭和死亡。無(wú)癥狀者平均成活時(shí)間為10～20年，有心力衰竭癥狀者平均成活時(shí)間為3～5年。特發(fā)性肺動(dòng)脈高壓進(jìn)展更快，平均壽命2.5年。目前發(fā)病機(jī)制還不清楚，病理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)主要的病理學(xué)特征為肺動(dòng)脈內(nèi)皮損傷，中膜增生，外膜肥厚，非肌成型動(dòng)脈形成新肌層化，最終導(dǎo)致血管壁增厚，管腔狹窄，肺動(dòng)脈壓力增高。組織學(xué)研究表明肺動(dòng)脈周圍炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，并且炎性細(xì)胞釋放出大量細(xì)胞因子，趨化因子等，繼而出現(xiàn)肺血管內(nèi)皮損傷、平滑肌過(guò)度增生及纖維母細(xì)胞表型改變最終出現(xiàn)血管狹窄，肺血管纖維化，肺動(dòng)脈高壓形成[4～6]。

趨化因子(chemokines)是具有趨化作用的一類小分子蛋 白質(zhì)或多肽，是一類重要的生理與病理生理及免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)因子，參與機(jī)體的多種機(jī)能活動(dòng)。趨化因子的重要成員mcp-1是一種堿性蛋白，為76個(gè)氨基酸殘基構(gòu)成的蛋白單 鏈，鼠mcp-1是人類mcp-1的同源體cc類趨化因子。Mcp-1的受體cc趨化因子受體2是一類含有7個(gè)跨膜區(qū)的G蛋白偶聯(lián)受體，位于3 號(hào)染色體上，在各種細(xì)胞類型上都有發(fā)現(xiàn)[7]。MCP-1與ccr2受體結(jié)合，趨化單核細(xì) 胞，T淋巴細(xì)胞等炎性細(xì)胞在病變處聚集參與破壞肺血管內(nèi)皮，誘導(dǎo)局部血管內(nèi)血栓形成，并通過(guò)自分泌和旁分泌刺激平滑肌細(xì)胞及成纖維細(xì)胞遷移，增殖，轉(zhuǎn)化，啟動(dòng)新生血管，參與肺血管管壁的重建。

他汀類藥物的“多效性”如抗炎，抗氧化，抑制細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，改善內(nèi)皮功能等[8～9]，近些年被廣泛應(yīng)用于臨床，研究表明他汀類藥物在肺動(dòng)脈高壓的治療中起作用，Hemandez等提出他汀能抑制ET-1的表達(dá)，從而擴(kuò)張肺血管，降低血管阻力；Laufs等發(fā)現(xiàn)他汀能誘導(dǎo)細(xì)胞周期抑制因子P27而抑制平滑肌細(xì)胞的增殖；Nishimura等證實(shí)通過(guò)抗炎及抑制細(xì)胞增殖等作用降低肺動(dòng)脈壓力，降低新生內(nèi)膜的生成，阻止肺血管重構(gòu)[10]。綜上所述，他汀類藥物可能通過(guò)多種途徑抑制肺血管重建和改善血管舒縮功能降低肺動(dòng)脈高壓。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)給予大鼠一次性腹部注射野百合堿誘導(dǎo)建立野百合堿肺動(dòng)脈高壓模型，通過(guò)比對(duì)三組小鼠的平均右心室壓力(mRVP)、肺動(dòng)脈平均壓(mPAP)，右心室肥厚指數(shù)(RVHI)及mcp-1的水平不難推出瑞舒伐他汀鈣可以抑制野百合堿對(duì)肺動(dòng)脈壓力的影響，同時(shí)可以下調(diào)mcp-1對(duì)肺動(dòng)脈的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與預(yù)期相符。

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葉金玲(1986～)女，黑龍江牡丹江人，在讀碩士研究生。

楊光遠(yuǎn)(1975～)男，黑龍江佳木斯人，博士，教授，碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:15694548079@126.com。

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1008-0104(2017)02-0116-02

2016-03-04)