mTOR、p70S6K在子宮腺肌病中的異常表達(dá)及其意義①

吳雅冬，李亞君，朱紫薇，馮元元，陳 麗

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

mTOR、p70S6K在子宮腺肌病中的異常表達(dá)及其意義①

吳雅冬，李亞君，朱紫薇，馮元元，陳 麗

(佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院婦產(chǎn)科，黑龍江 佳木斯 154003)

目的：通過(guò)研究哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和p70S6K在子宮腺肌病異位病灶、在位內(nèi)膜組織中及正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)情況，以探索其與子宮腺肌病發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法：采用免疫組化方法檢測(cè)p-mTOR和p-P70S6K在異位病灶組、在位內(nèi)膜組、正常子宮內(nèi)膜組細(xì)胞中的表達(dá)。結(jié)果：p-mTOR和p-P70S6K在子宮腺肌病異位病灶中及在位內(nèi)膜中的表達(dá)高于正常子宮內(nèi)膜組(P<0.05)，異位病灶與在位內(nèi)膜中二者的表達(dá)無(wú)差異(P<0.05)。異位病灶組中p-mTOR和p-P70S6K的表達(dá)具有相關(guān)性(r=0.778,P<0.05)。結(jié)論：mTOR與P70S6K的高表達(dá)促進(jìn)了子宮腺肌病的發(fā)生與發(fā)展。

mTOR；P70S6K；子宮腺肌病

子宮腺肌病是指異位的子宮內(nèi)膜腺體及間質(zhì)向正常的子宮肌層彌漫性或局限性浸潤(rùn)生長(zhǎng)的良性疾病，伴隨異位細(xì)胞的增殖、侵襲、黏附、以及新生血管的形成，具有與惡性腫瘤諸多相似的特征[1]。育齡期女性是本病的高發(fā)人群(8.8%～31.0%)，且近年來(lái)有逐漸年輕化趨勢(shì)[2,3]。其主要臨床癥狀是進(jìn)行性加重的痛經(jīng)、月經(jīng)量增多、經(jīng)期延長(zhǎng)、不孕等。而痛經(jīng)發(fā)病率高達(dá)77%～80%，嚴(yán)重的影響患者的日常工作學(xué)習(xí)與生活[4,5]。到目前為止，子宮腺肌病的詳細(xì)發(fā)病機(jī)制仍不明確。大多認(rèn)為子宮肌瘤、子宮內(nèi)膜息肉、盆腔炎、宮腔操作史、情志異常、嗜肉食和辛辣是其高危因素；而放置宮內(nèi)節(jié)育器、適當(dāng)?shù)倪\(yùn)動(dòng)量、高文化水平等是其保護(hù)性因素[6，7]。隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，子宮腺肌病的早期診斷與治療取得了較大的進(jìn)步，但子宮腺肌病的分子生物學(xué)發(fā)生機(jī)制尚不明確，探索子宮腺肌病的分子生物學(xué)發(fā)病機(jī)制，為子宮腺肌病的診療途徑提供新的思路，是目前醫(yī)學(xué)形式所趨的。

mTOR(mammaliantargetofrapamycin，哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白)是一種進(jìn)化十分保守的絲/蘇氨酸蛋白激酶，屬于磷脂酰肌醇3激酶PI3K相關(guān)激酶蛋白激酶類(lèi)家族，廣泛存在于從酵母到哺乳動(dòng)物的所有的真核生物中[8]。目前發(fā)現(xiàn)mTOR信號(hào)通路為細(xì)胞啟動(dòng)翻譯所必需，不僅在正常細(xì)胞的生長(zhǎng)增殖與分化中起著舉足輕重的作用，并且多數(shù)研究表明mTOR信號(hào)通路的過(guò)度激活能夠加速細(xì)胞周期、促進(jìn)細(xì)胞遷移以及抑制細(xì)胞凋亡等。作為該通路中的重要因子，mTOR在相關(guān)研究中已被證實(shí)其在結(jié)腸癌、乳腺癌、宮頸癌、淋巴瘤等多種腫瘤中表達(dá)異常[9]，但其在子宮腺肌病中的表達(dá)情況在國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)報(bào)道。mTOR主要通過(guò)調(diào)控其下游蛋白P70S6K(40ssmallsubunitribosomalproteinS6kinase，核糖體40S小亞基S6蛋白激酶)來(lái)影響細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞生長(zhǎng)。P70S6K通過(guò)激活S6使核糖體40S小亞基易于結(jié)合翻譯復(fù)合物，從而促進(jìn)蛋白質(zhì)的合成[10]。mTOR信號(hào)通路已成為目前腫瘤生物治療的新靶點(diǎn)和新途徑的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)試圖在子宮腺肌病中找到mTOR和p70S6K在子宮腺肌病中的表達(dá)情況的及二者的關(guān)系，為子宮腺肌病的靶向治療提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料來(lái)源

選取2013-01～2015-07在佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院行全子宮或次全子宮切除術(shù)的手術(shù)標(biāo)本，其中子宮腺肌病并腺肌瘤標(biāo)本20例，取其異位病灶標(biāo)本及在位內(nèi)膜標(biāo)本為異位病灶組和在位內(nèi)膜組；卵巢畸胎瘤患者術(shù)前取的子宮內(nèi)膜標(biāo)本且病理回報(bào)內(nèi)膜無(wú)病變20例為正常子宮內(nèi)膜組，所有患者術(shù)前6個(gè)月內(nèi)均未接受激素治療且月經(jīng)正常來(lái)潮。所有患者年齡41～51(47.35±2.39)歲，各組患者年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

1.2 主要試劑

mTOR兔多克隆抗體為Abcam公司產(chǎn)品；P70S6K鼠單克隆抗體購(gòu)自SantaCruz公司。鏈霉抗生物素-生物素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(SABC)試劑盒購(gòu)自武漢博士德公司，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)公司。結(jié)果判定采用雙盲法，由兩位資深病理醫(yī)生分別對(duì)同一切片進(jìn)行計(jì)數(shù)，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核中明顯出現(xiàn)棕黃色顆粒的細(xì)胞判斷為陽(yáng)性細(xì)胞，隨機(jī)選擇3個(gè)高倍鏡視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)；再按照染色強(qiáng)度計(jì)分，無(wú)染色為1分，淺黃色為2分，棕黃色為3分，黃褐色為4分。每例積分為以上兩種方法結(jié)果的乘積，積分<2分為陰性(-)，≥2分為陽(yáng)性(+)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1p-mTOR在子宮腺肌病異位病灶組、在位內(nèi)膜組及在正常子宮內(nèi)膜中組的表達(dá)

p-mTOR在這三組的陽(yáng)性率分別是90%(18 例)，85%(17 例)，45%(7 例)，通過(guò)卡方檢驗(yàn)，三組間存在顯著差異(P<0.05)；兩兩組間比較發(fā)現(xiàn)異位內(nèi)膜組及在位內(nèi)膜組的細(xì)胞陽(yáng)性率均高于正常子宮內(nèi)膜組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義(P<0.05)；異位內(nèi)膜組與在位內(nèi)膜組兩組間的p-mTOR陽(yáng)性率進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

表1 p-mTOR在三組標(biāo)本中的陽(yáng)性表達(dá)率(n=20)

圖1 p-mTOR在三組標(biāo)本中的表達(dá)

2.2p-P70S6K在子宮腺肌病異位病灶組、在位內(nèi)膜組及在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

p-P70S6K在這三組中的陽(yáng)性率分別是 80%(16 例)，75%(15 例)，55%(11 例)，三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；兩兩比較后，發(fā)現(xiàn)異位內(nèi)膜組和在位內(nèi)膜組陽(yáng)性率均高于正常組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義(P<0.05)；但異位內(nèi)膜組與在位內(nèi)膜組兩者p-P70S6K陽(yáng)性率比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的意義。

圖2 p70S6K在三組標(biāo)本中的表達(dá)

組別陽(yáng)性陰性陽(yáng)性率(%)異位組16480在位組13765正常組51525

2.3p-mTOR、p-P70S6K在子宮腺肌病異位病灶中表達(dá)的相關(guān)性

在異位病灶組中18例p-mTOR呈陽(yáng)性表達(dá)的標(biāo)本中有15例p-P70S6K陽(yáng)性表達(dá),，2例p-mTOR蛋白呈陰性表達(dá)的標(biāo)本中有1例p-P70S6K呈陽(yáng)性表達(dá)。對(duì)各個(gè)標(biāo)本免疫組化得分進(jìn)行相關(guān)分析顯示，子宮腺肌病異位病灶組p-mTOR與p-P70S6K的表達(dá)具有相關(guān)性(r=0.778,P<0.05)。經(jīng)F檢驗(yàn)F=27.622P<0.05，有顯著差異，即建立的p-mTOR與p70S6K間的回歸方程有意義。

表3 p-mTOR、p-P70S6K在子宮腺肌病異位 病灶組織表達(dá)的相關(guān)性

圖3 p-mTOR、p-P70S6K在子宮腺肌病病灶組織表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

子宮腺肌病雖屬良性病變，但它卻有著侵襲、異常增殖、血管新生等類(lèi)似于惡性腫瘤的生物學(xué)行為，因此也被稱(chēng)作 “良性癌”[11]。隨著醫(yī)學(xué)的進(jìn)步，對(duì)腫瘤在分子生物學(xué)水平的研究越發(fā)深入，發(fā)現(xiàn)調(diào)控細(xì)胞增殖與生長(zhǎng)的信號(hào)通路在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起到重要作用，因而細(xì)胞因子、信號(hào)通路逐漸成為診斷以及治療腫瘤的靶點(diǎn)，如VEGFa、TP53、PIK3CA、mTOR/P70S6K等信號(hào)通路，這些信號(hào)通路的傳導(dǎo)大都與mTOR/P70S6K有相當(dāng)?shù)年P(guān)系[12，13]。而在子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、腎癌的相關(guān)研究中已證實(shí)mTOR抑制劑能有效抑制mTOR的表達(dá)。

本研究表明在子宮腺肌病異位病灶中及在位內(nèi)膜組織中，p-mTOR、p-P70S6K的表達(dá)明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織，而在異位病灶組織中及在位內(nèi)膜組織中二者的表達(dá)無(wú)明顯差異。p-mTOR、p-P70S6K在異位病灶組中的表達(dá)呈明顯的正相關(guān)關(guān)系，組織中p-mTOR的表達(dá)水平越高，相應(yīng)的p-P70S6K蛋白的水平也越高。同時(shí)也證實(shí)了P70S6K是mTOR信號(hào)通路中下游的一個(gè)重要因子，mTOR激活后，促使P70S6K磷酸化,從而促進(jìn)參與和調(diào)控各種生理生化活動(dòng)的蛋白的合成，最終實(shí)現(xiàn)調(diào)控細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖的作用。

綜上所述，作為mTOR信號(hào)通路中重要因子的mTOR、P70S6K在子宮腺肌病異位病灶中處于高表達(dá)狀態(tài)，在子宮腺肌病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起到重要作用，同時(shí)也具有一定的診斷價(jià)值以良好的治療前景的靶點(diǎn)，為子宮腺肌病的診斷、靶向治療提供一定的理論基礎(chǔ)。

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The abnormal expression of mTOR and P70S6K in adenomyosis and its clinical significance

WUYa-dong，LIYa-jun，ZHUZi-wei，F(xiàn)ENGYuan-yuan,CHENLi

(Department of Gynecology and Obstetrics, the First Affiliated Hospital of Jiamusi University,Jiamusi 154003, China)

: Objective: To evaluate the expression and function of mammalian target of rapamycin (mTOR) and its substrate kinase P70S6K signal pathway in adenomyosis. Methods: The expression of mTOR and P70S6K in the ectopic endometrium group, in eutopic endometrium group and the normal endometrium group were detected by the immunohistochemistry, respectively. Results: Compared to those in normal endometrium group, protein of mTOR and P70S6K in the ectopic endometrium group and eutopic endometrium group were significantly increased (P<0.05),butwasundifferentiatedbetweentheeutopicendometriumgroupandtheectopicendometriumgroup.TherewasapositivecorrelationbetweenproteinmTORandP70S6Kexpressioninectopicendometrium(r=0.778,P<0.05). Conclusion: High expressions of mTOR and P7OS6K may play an important role in the pathogenesis and the development of adenomyosis.

adenomyosis;mTOR;P70S6K

吳雅冬(1968～)女，黑龍江佳木斯人，碩士，副主任醫(yī)師，碩士研究生導(dǎo)師。

李亞君(1989～)女，河南開(kāi)封人，在讀碩士研究生。E-mail:lyjyimiyangguang@sina.com。

R

B

1008-0104(2017)02-0073-03

2015-11-27)