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    川芎嗪對AD大鼠氧化應(yīng)激影響的初步研究①

    2017-06-05 14:21:38王圣也石俊杰劉福興許夢婷宋慶嬌柳朝陽
    黑龍江醫(yī)藥科學(xué) 2017年2期
    關(guān)鍵詞:川芎嗪海馬氧化應(yīng)激

    王圣也,倫 澤,石俊杰,劉福興,許夢婷,宋慶嬌,張 濤,柳朝陽

    (佳木斯大學(xué),黑龍江 佳木斯 154007 )

    川芎嗪對AD大鼠氧化應(yīng)激影響的初步研究①

    王圣也,倫 澤,石俊杰,劉福興,許夢婷,宋慶嬌,張 濤,柳朝陽

    (佳木斯大學(xué),黑龍江 佳木斯 154007 )

    目的:探討川芎嗪對AD大鼠氧化應(yīng)激的影響。方法:用DCFH-DA(二氯二氫熒光素-乙酰乙酸酯)熒光包被探針法檢測細(xì)胞內(nèi)總ROS;鄰苯三酚自氧化法檢測大鼠血清及海馬組織SOD活性; 硫代巴比妥酸法檢測大鼠血清及海馬MDA含量。結(jié)果:與AD模型組相比,川芎嗪組大鼠海馬細(xì)胞內(nèi)總ROS含量降低(P<0.05)、血清SOD活性升高(P<0.05)和MDA含量降低(P<0.05)、海馬細(xì)胞內(nèi)SOD活性升高(P<0.05)和MDA含量降低(P<0.05)。結(jié)論:川芎嗪可提高AD模型大鼠的抗氧化能力,防止神經(jīng)元細(xì)胞損傷。

    川芎嗪;AD大鼠;氧化應(yīng)激

    阿爾茨海默病(AD)中,β-淀粉樣蛋白斑塊(Aβ)、神經(jīng)炎癥、神經(jīng)纖維纏結(jié)、氧化應(yīng)激反應(yīng)廣泛[1]是主要病理特征。氧化應(yīng)激是AD病理過程的最早應(yīng)激事件[2,3]?;钚匝?ROS)的含量反應(yīng)細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激的水平,本課題中,我們應(yīng)用川芎嗪干預(yù),檢測AD模型大鼠海馬組織細(xì)胞內(nèi)總ROS、SOD和MDA含量,為川芎嗪防治AD提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料和方法

    1.1 動物和材料

    成年雌性SD大鼠 30只,平均240g,由佳木斯大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供。

    川芎嗪和Aβ1-40購于Sigma公司;ROS、SOD、MD檢測試劑盒購于北京中杉金橋生物公司。

    1.2 方法1.2.1 動物模型的建立[4]

    1%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉各組SD大鼠,注射部位是海馬CAI區(qū):根據(jù)Cusmhnao與Pellegrin大鼠腦定位圖譜,制定注射點(diǎn)是中線左側(cè)2.1mm,前囪后3.4mm,硬腦膜下2.9mm,Aβ1-40溶液注射1μL,留針5min,假手術(shù)組生理鹽水等量注射。

    1.2.2 試驗(yàn)分組與給藥

    大鼠隨機(jī)分3組:川芎嗪組:川芎嗪(250mg/kg·d灌胃24d;假手術(shù)組與AD模型組:等量生理鹽水灌胃。

    1.2.3 大鼠海馬組織總ROS測定

    10微摩DCFH-DA加入單細(xì)胞海馬組織懸液。37℃作用20min,DMEM細(xì)胞洗滌。在488納米激發(fā)波長和發(fā)射波長525納米下,ROS的含量用流式儀檢測的熒光強(qiáng)度來表示。

    1.2.4 大鼠血清及海馬組織SOD活性測定

    大鼠心臟血清進(jìn)行分離,在血清中進(jìn)行SOD活性檢測。在分離的大腦海馬組織中加入4℃生理鹽水,研磨后獲取勻漿組織,取上清液按照試劑盒操作檢測SOD活性。

    SOD血清值=(對照管OD值-測定管OD值)/對照管OD值/50%×稀釋倍數(shù)×樣本稀釋倍數(shù)

    SOD組織勻漿值=(對照管OD值-測定管OD值)/對照管O值/50%×反應(yīng)體系的稀釋倍數(shù)/樣本蛋白濃度

    1.2.5 大鼠血清及海馬組織MDA含量測定

    取待測血清及 10%海馬組織勻漿,按試劑盒要求配試劑和操作。

    血清MDA值=(測定管OD值-對照管OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度×樣本稀釋倍數(shù)

    組織勻漿MDA含量=(測定管OD值-對照管OD值)/(標(biāo)準(zhǔn)管OD值-空白管OD值)×標(biāo)準(zhǔn)品濃度(10nmol/mL)/待測樣本蛋白濃度。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    2 結(jié)果

    2.1 川芎嗪對AD大鼠海馬細(xì)胞總ROS生成的影響

    與假手術(shù)組比,AD大鼠海馬細(xì)胞ROS含量增加(P<0.05)。川芎嗪治療后,AD模型大鼠海馬細(xì)胞內(nèi)總ROS含量降低(P<0.05),與假手術(shù)組比無顯著差異(P>0.05) ,見表1。

    2.2 川芎嗪對AD大鼠血清SOD活性和MDA含量的影響

    與假手術(shù)組比,AD大鼠血清SOD活性降低

    (P<0.05)。川芎嗪治療后,與AD模型組相比,大鼠血清SOD活性升高(P<0.05),與假手術(shù)組比無顯著差異(P>0.05)。見表2。與假手術(shù)組比,AD大鼠血清MDA含量升高(P<0.05)。川芎嗪治療后,與AD模型組相比,大鼠血清MDA含量降低(P<0.05),與假手術(shù)組比無顯著差異(P>0.05)。見表2。

    表1 各組大鼠海馬組織細(xì)胞內(nèi)總ROS含量±s,n=10)

    注:與假手術(shù)組相比a)P<0.05,與AD模型組相比b)P<0.05。

    表2 各組大鼠血清SOD活性和MDA含量

    注:與假手術(shù)組相比a)P<0.05,與AD模型組相比b)P<0.05。

    2.3 川芎嗪對AD模型大鼠海馬細(xì)胞內(nèi)SOD活性和MDA含量的影響

    與假手術(shù)組比,AD大鼠海馬細(xì)胞內(nèi)SOD活性降低(P<0.05)。川芎嗪治療后,與AD模型組相比,大鼠海馬細(xì)胞內(nèi)SOD活性升高(P<0.05),與假手術(shù)組比無顯著差異(P>0.05),見表3。與假手術(shù)組比,AD大鼠海馬細(xì)胞內(nèi)MDA含量升高(P<0.05)。川芎嗪治療后,與AD模型組相比,大鼠海馬細(xì)胞內(nèi)MDA含量降低(P<0.05),與假手術(shù)組比無顯著差異(P>0.05),見表3。

    表3 各組大鼠海馬細(xì)胞內(nèi)SOD活性和MDA含量

    注:與假手術(shù)組相比a)P<0.05,與AD模型組相比b)P<0.05。

    3 討論

    氧化應(yīng)激指有害刺激作用機(jī)體時(shí),氧化系統(tǒng)和抗氧化系統(tǒng)失衡,活性氧自由基(ROS)產(chǎn)生過多超出氧化物的清除,導(dǎo)致組織損傷[5,6]。細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激的水平可由ROS的生成多少直接反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)川芎嗪干預(yù)后,AD模型大鼠總ROS含量明顯降低,說明川芎嗪對AD模型大鼠海馬組織細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平有明顯的影響。川芎嗪減輕氧化應(yīng)激對神經(jīng)元損傷可能通過降低過氧化物和氧化自由基的生成。生物體清除自由基通過SOD(超氧化物歧化酶),SOD可阻斷并修復(fù)氧化自由基對組織細(xì)胞的侵害[7, 8]。MDA是是生物細(xì)胞的氧化應(yīng)激導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化的終末代謝產(chǎn)物。AD發(fā)病過程中MDA的毒性可使神經(jīng)元變性壞死凋亡,因此,機(jī)體受ROS攻擊的程度MDA能夠間接反映出來[9,10]。老年斑、神經(jīng)元纖維纏結(jié)常和MDA的高水平同時(shí)出現(xiàn)在AD模型大鼠腦組織。本實(shí)驗(yàn)中AD模型大鼠血清SOD活性下降,MDA含量顯著升高。川芎嗪干預(yù)后,提高了SOD活性,可使脂質(zhì)過氧化減少,氧化自由基被有效的清除,川芎嗪干預(yù)后,降低了MDA含量,減輕了組織脂質(zhì)過氧化損傷,MDA毒性引發(fā)的組織損傷可以避免。綜上,AD大鼠抗氧化能力川芎嗪能夠在整體水平提高。本實(shí)驗(yàn)中,川芎嗪干預(yù)后,明顯升高AD大鼠海馬細(xì)胞SOD活性,降低MDA含量,提示川芎嗪可從整體和病變的關(guān)鍵區(qū)域(海馬組織)兩方面提高AD模型大鼠機(jī)體的抗氧化能力。

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    1.黑龍江省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目,編號:201610222037;2. 佳木斯大學(xué)科基礎(chǔ)研究類(自然類)面上項(xiàng)目,編號:JMSUJCMS2016-023;3.黑龍江省普通高等學(xué)校青年學(xué)術(shù)骨干支持計(jì)劃項(xiàng)目,編號:1252G059。

    王圣也(1996~)男,黑龍江巴彥人,在校本科生。

    柳朝陽(1971~)男,黑龍江嘉蔭人,碩士,副主任醫(yī)師,碩士研究生導(dǎo)師。E-mail:ztlzy888@163.com。

    R285.5;R

    A

    1008-0104(2017)02-0029-02

    2017-02-04)

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