鐵皮石斛當(dāng)歸復(fù)方提取液對(duì)2型糖尿病小鼠降糖作用研究*

戴明珠 王楠楠 徐俞悅 蘇 潔 顏美秋 呂圭源 陳素紅，3#

1 溫州醫(yī)科大學(xué) 浙江 溫州 325035 2 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053 3 浙江工業(yè)大學(xué) 浙江 杭州 310014

鐵皮石斛當(dāng)歸復(fù)方提取液對(duì)2型糖尿病小鼠降糖作用研究*

戴明珠1王楠楠1徐俞悅1蘇 潔2顏美秋2呂圭源2陳素紅1，3#

1 溫州醫(yī)科大學(xué) 浙江 溫州 325035 2 浙江中醫(yī)藥大學(xué) 浙江 杭州 310053 3 浙江工業(yè)大學(xué) 浙江 杭州 310014

鐵皮石斛當(dāng)歸復(fù)方提取液 鏈脲佐菌素 2型糖尿病 小鼠 實(shí)驗(yàn)研究

糖尿?。―M）是一組以高血糖為特征的終身性代謝疾病，易導(dǎo)致腎、眼、心臟、血管、神經(jīng)的慢性損害和功能障礙[1]。中醫(yī)對(duì)糖尿病的認(rèn)識(shí)始于《素問(wèn)·陰陽(yáng)別論》:“二陽(yáng)結(jié)謂之消?！薄督饏T要略》:“病者如熱狀，煩渴，口干燥而渴，其脈反無(wú)熱，此為陰伏，是瘀血也?！奔答隹芍孪??！吨T病源候論·消渴候》則以“消渴”為病證總名?，F(xiàn)代中醫(yī)對(duì)糖尿病的治則為“益氣養(yǎng)陰、活血化瘀”[2]。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局（CFDA）《輔助降血糖功能評(píng)價(jià)方法》，將養(yǎng)陰藥鐵皮石斛與養(yǎng)血活血藥當(dāng)歸聯(lián)用，觀察鐵皮石斛當(dāng)歸復(fù)方提取液對(duì)高糖高脂加鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)的2型糖尿病小鼠降血糖作用。

1 材料與方法

1.1 藥物:鐵皮石斛由浙江金華壽仙谷藥業(yè)有限公司提供，當(dāng)歸由浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片廠提供。鐵皮石斛當(dāng)歸復(fù)方提取液（TDF）即鐵皮石斛、當(dāng)歸經(jīng)水提取后配制成含生藥量0.15、0.3、0.6g/ml藥液。

1.2 動(dòng)物:ICR小鼠，雄性，20～22g，浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)SCXK（浙）2014-0001。

1.3 試劑:鏈脲佐菌素（STZ，批號(hào)S0130，Sigma公司）；高糖高脂飼料（浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）；葡萄糖（GLU）（批號(hào)10010518，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；葡萄糖試劑盒，批號(hào)15110201；甘油三酯（TG）試劑盒，批號(hào)15121501；總膽固醇（TC）試劑盒，批號(hào)15110401，寧波康美生物科技有限公司；胰島素（INS）測(cè)試盒，批號(hào)20160103，上海源葉生物科技有限公司。

1.4 儀器:TBA-40FR全自動(dòng)生化分析儀（東芝醫(yī)療系統(tǒng)株式會(huì)社）；Powerwave 340酶標(biāo)儀（Bio-TEK公司）；雅培安妥超越血糖儀、血糖試紙（Abbott公司）。

1.5 正常小鼠降糖實(shí)驗(yàn)：ICR小鼠分為正常對(duì)照組和TDF（6.0g/kg）組，每組15只。分別灌純化水與提取液，連續(xù)30d，末次給藥后禁食4h，測(cè)空腹血糖（FBG）值。

1.6 2型糖尿病模型小鼠降糖實(shí)驗(yàn)：分述如下。

1.6.1 造模與給藥:雄性ICR小鼠分為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和TDF（1.5、3.0、6.0g/kg）組，每組15只。TDF組灌規(guī)定濃度提取液，模型對(duì)照組灌純化水，連續(xù)30d。各組給予普通飼料，1周后模型對(duì)照組和TDF組更換高糖高脂飼料，喂飼3周后，模型對(duì)照組和3個(gè)劑量禁食24h，給予1%STZ 80mg/kg BW腹腔注射，注射后繼續(xù)給予高糖高脂飼料5天。實(shí)驗(yàn)結(jié)束。

1.6.2 FBG、口服葡萄糖耐量（OGTT）:末次給藥后禁食4h，測(cè)定空腹血糖即給葡萄糖前（0h）血糖值和血糖曲線下面積，各組按規(guī)定給藥，15min后灌予葡萄糖2.5g/kg BW，測(cè)定給葡萄糖后0.5、2h的血糖值及血糖曲線下面積。血糖曲線下面積（AUC）＝（0h血糖值+0.5h血糖值）×0.5/2+（2h血糖值+0.5h血糖值）×1.5/2。

1.6.3 總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）:末次給藥后禁食4h，檢測(cè)血清TC、TG水平。

1.6.4 胰島素（INS）、胰島素抵抗指數(shù)（IR）:末次給藥后禁食4h，檢測(cè)INS水平，并計(jì)算IR。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法:計(jì)量資料數(shù)據(jù)以-x±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)正常小鼠體重及空腹血糖的影響:TDF 6.0g/kg

對(duì)正常小鼠體重及空腹血糖無(wú)明顯影響。見表1。

表1 TDF對(duì)正常小鼠體重、空腹血糖影響（±s）

表1 TDF對(duì)正常小鼠體重、空腹血糖影響（±s）

空腹血糖（mmol/L）7.03±1.27 6.95±1.16組別正常對(duì)照組TDF組劑量（g/kg）--6.0體重（g）38.55±3.54 38.57±3.14

2.2 對(duì)2型糖尿病小鼠FBG、OGTT、AUC的影響:與正常對(duì)照組比較，給予葡萄糖0、0.5、2h，模型對(duì)照組血糖值及AUC均顯著升高（P＜0.01）；與模型對(duì)照組比較，TDF1.5、3.0g/kg組各時(shí)間點(diǎn)血糖值及AUC均呈下降趨勢(shì)，其中1.5g/kg組0、2h血糖值及AUC明顯下降（P＜ 0.05）。提示TDF 1.5g/kg可降低糖尿病小鼠空腹及餐后2h血糖值，并提高糖耐量。見表2。

表2 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠空腹血糖及糖耐量的影響（±s）

表2 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠空腹血糖及糖耐量的影響（±s）

注:與正常對(duì)照組比較，#P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05。

組別血糖（mmol/L）AUC正常對(duì)照組模型對(duì)照組TDF組TDF組TDF組0.5h 9.07±1.24 17.43±3.02#15.93±1.58 17.05±2.53 17.25±2.12劑量（g/kg）----1.5 3.0 6.0 0h 8.63±1.37 12.50±2.39#10.81±2.01*11.94±2.62 12.55±4.59 2h 5.99±1.16 12.11±3.72#10.05±2.22*10.99±2.39 10.87±3.56 15.72±1.79 29.63±5.86#26.17±2.54*28.34±3.71 28.43±4.05

2.3 對(duì)2型糖尿病小鼠TC、TG水平的影響:與正常對(duì)照比較，模型對(duì)照組血清TC、TG水平顯著升高（P＜0.01）；與模型對(duì)照組比較，TDF 1.5g/kg組TC、TG水平均呈下降趨勢(shì)，其中TC水平明顯降低（P＜0.05）。提示TDF 1.5g/kg具有降低糖尿病小鼠血清TC功能。見表3。

表3 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠TC、TG水平影響（±s）

表3 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠TC、TG水平影響（±s）

注:與正常對(duì)照組比較，#P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05。

TG（mmol/L）2.09±0.61 1.24±0.33#1.07±0.27 1.24±0.17 1.18±0.14組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組TDF組TDF組TDF組劑量（g/kg）----1.5 3.0 6.0 TC（mmol/L）3.55±0.62 6.77±1.11#6.11±0.67*6.20±1.03 6.49±1.28

2.4 對(duì)2型糖尿病小鼠INS、IR的影響:與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組IR顯著升高（P＜0.01）；與模型對(duì)照組比較，TDF 1.5g/kg組IR明顯下降（P＜0.05）。提示TDF 1.5g/kg可提高糖尿病小鼠靶組織對(duì)胰島素的敏感性。見表4。

表4 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠INS、IR的影響（±s）

表4 TDF對(duì)2型糖尿病小鼠INS、IR的影響（±s）

注:與正常對(duì)照組比較，#P＜0.01；與模型對(duì)照組比較，*P＜0.05。

IR 16.05±3.22 22.69±4.18#19.81±3.57*21.97±5.01 22.76±8.25組別正常對(duì)照組模型對(duì)照組TDF組TDF組TDF組劑量（g/kg）----1.5 3.0 6.0 INS（mIU/L）41.80±4.76 41.00±2.75 41.38±2.30 41.40±2.55 40.89±1.64

3 討論

鐵皮石斛味甘，性偏寒，具有滋陰、清熱、潤(rùn)燥作用，用于高熱、內(nèi)熱消渴者，脾胃虛寒的糖尿病患者則不宜連續(xù)服用；當(dāng)歸味甘，性溫，為補(bǔ)血活血之要藥。鐵皮石斛佐以當(dāng)歸，一可起到相成作用，發(fā)揮補(bǔ)血活血之作用，直達(dá)病所；二加強(qiáng)或與鐵皮石斛共同發(fā)揮降糖作用，增強(qiáng)藥效；三以消除或減緩石斛的寒性，增加適應(yīng)癥、擴(kuò)大應(yīng)用人群。二藥均為可用于保健食品的中藥材（見衛(wèi)生部2014版《藥食同源目錄》）。

造模前，小鼠精神狀況良好，毛色光澤均勻，飲食飲水及大小便正常；造模后，模型組逐漸出現(xiàn)精神萎靡，掉毛，多飲，小便異味[3]，個(gè)別出現(xiàn)皮膚潰爛等感染現(xiàn)象；TDF組較模型組狀態(tài)佳。模型對(duì)照組0.5h血糖值≥10mmol/L，且較正常對(duì)照組0.5、2h血糖均升高，AUC升高，差異有顯著性，判定模型糖代謝紊亂成立，在此基礎(chǔ)上，模型對(duì)照組IR明顯升高，差異有顯著性，判定胰島素抵抗糖/脂代謝紊亂模型成功。提示STZ可能僅損傷部分胰島β細(xì)胞，剩余部分可代償性分泌胰島素，使其水平不降低，但組織對(duì)INS敏感性和反應(yīng)性降低，不能攝取、儲(chǔ)存和利用葡萄糖，即出現(xiàn)糖尿病癥狀。經(jīng)TDF治療后，糖尿病小鼠對(duì)INS敏感性增加，OGTT提高，餐后血糖值降低，提示TDF對(duì)2型糖尿病小鼠的降糖機(jī)制與改善胰島素抵抗有關(guān)。

中藥對(duì)復(fù)雜疾病的治療一直具有其獨(dú)特的作用和優(yōu)勢(shì):不單改善癥狀，更能全面調(diào)理人體機(jī)能，恢復(fù)血管彈性，增加心、肝、腎、視網(wǎng)膜等組織營(yíng)養(yǎng)性血流量，克服化學(xué)合成藥的副作用和誘發(fā)的并發(fā)癥；中藥復(fù)方多成分、多靶點(diǎn)、多種作用機(jī)制的特征符合復(fù)雜疾病的治療要求。可見，中醫(yī)藥治療糖尿病值得進(jìn)一步研究。

[1]Looker A C，Eberhardt M S，Saydah S H.Diabetes and fracture risk in older US adults[J].Bone，2016（82）:9-15.

[2]楊啟悅，張帥，謝春光，等.參芪復(fù)方防治糖尿病大血管病變機(jī)制研究[J].中草藥，2014，45(8):1179-1183.

[3]潘曉瓊.升清降糖合劑對(duì)糖尿病大鼠胰島β細(xì)胞的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J].浙江中醫(yī)雜志，2016，51(9):639-641.

2017-01-22

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目基于“肝/腎-腸軸”的鐵皮石斛葉黃酮碳苷抗高尿酸血癥伴高血壓的機(jī)制研究，編號(hào)：81673638；國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目課題芡實(shí)等8種大宗中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高及其綜合利用研究，編號(hào)：2011BA104B06

# 通訊作者：陳素紅，E-mail：chensuhong@aliyun.com