MTA1、Ki—67在非小細胞肺癌中的表達及相關(guān)性分析

李浩++閆聰穎+侯殿臣

[摘要]目的 初步探討非小細胞肺癌（NSCLC）組織中轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1（MTA1）和增殖細胞核抗原（Ki-67）的表達并分析其相關(guān)性。方法 采用SP免疫組織化學(xué)方法檢測2011年1月～2017年1月內(nèi)蒙古林業(yè)總醫(yī)院經(jīng)胸外科手術(shù)切除并經(jīng)病理科存檔，符合實驗條件的46例NSCLC組織和20例癌旁正常對照組織中MTA1和Ki-67的表達，分析MTA1和Ki-67之間的相關(guān)性及其與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 NSCLC組織中MTA1和Ki-67的陽性率分別為65.22%和54.35%，均顯著高于癌旁對照組織中的15%和20%（P<0.05）；NSCLC組織中MTA1和Ki-67的表達無相關(guān)性（r=0.064，P>0.05）；NSCLC發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組MTA1表達的陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.05）；Ki-67表達的陽性率在NSCLC低分化組高于高中分化組（P<0.05）。結(jié)論 MTA1和Ki-67可能在NSCLC轉(zhuǎn)移及腫瘤細胞侵襲過程中具有重要作用。

[關(guān)鍵詞]MTA1；Ki-67；非小細胞肺癌

[中圖分類號] R735.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2017）04（b）-0084-03

Expression and correlation of MTA1 and Ki-67 in non small cell lung cancer

LI Hao1 YAN Cong-ying2 HOU Dian-chen3▲

1.Clinical Medical School of Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao 028000，China；2.Department of Cardiology，the First Hospital of Hebei Medical University，Shijiazhuang 050000，China；3.Department of Thoracic Surgery，the Second Clinical Medical School of Inner Mongolia University for Nationalities （Inner Mongolia Forestry General Hospital），Yakeshi 022150，China

[Abstract]Objective To investigate the expressions of metastasis associated protein 1 （MTA1） and proliferating cell nuclear antigen （Ki-67） in non-small cell lung cancer （NSCLC） tissues and their correlation.Methods 46 cases of NSCLC tissues and 20 cases of normal tissues in Inner Mongolia Forestry General Hospital from January 2011 to January 2017 were selected as the research objects，immunohistochemistry of SP was used to detect the expressions of MTA1 and Ki-67 in NSCLC tissues and adjacent paracancerous tissues.The correlation between their expression and pathologic parameters were analyzed by statistics.Results The positive expressions rate of MTA1 and Ki-67 in NSCLC tissues were 65.22% and 54.35%，significantly higher than the positive expressions rate of 15% and 20% in normal tissues （P<0.05）；there was no significant relationship between the expressions of MTA1 and Ki-67 in NSCLC tissues （r=0.064，P>0.05）；the positive expression rate of MTA1 in the group of lymph node metastasis of NSCLC was higher than that without lymph node metastasis （P<0.05）；the positive expression rate of Ki-67 in low differentiation group of NSCLC was higher than that in high differentiation group （P<0.05）.Conclusion The abnormal expressions of MTA1 and Ki-67 may play an important role in the invasion and metastasis of NSCLC.

[Key words]MTA1；Ki-67；Non small cell lung cancer

非小細胞肺癌（NSCLC）是人類最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率仍有上升趨勢，嚴重損害人類健康。以手術(shù)為主的綜合治療在NSCLC治療過程中已經(jīng)取得了突破性進展，靶向生物治療為對抗腫瘤提出新的方向。轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1（MTA1）是高度失調(diào)的癌基因之一[1]，研究發(fā)現(xiàn)MTA1在轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)中具有重要作用，它通過調(diào)節(jié)蛋白泛素化而改變蛋白質(zhì)穩(wěn)態(tài)，并且導(dǎo)致DNA損傷反應(yīng)，進而參與腫瘤生物學(xué)功能的調(diào)節(jié)[2]。增殖細胞核抗原（Ki-67）是與細胞周期密切相關(guān)的核抗原[3]，除靜止期以外，表達于細胞周期的各個階段。Ki-67蛋白表達在預(yù)測腫瘤細胞的增殖狀態(tài)和腫瘤的未來治療過程中起重要作用[4-5]。本研究利用免疫組化方法，結(jié)合臨床意義初步探討MTA1和Ki-67在非小細胞肺癌中的表達，為NSCLC的早期診斷和靶向治療提供理論依據(jù)。

1對象與方法

1.1對象

選取內(nèi)蒙古林業(yè)總醫(yī)院2011年1月～2017年1月經(jīng)胸外科手術(shù)切除并經(jīng)病理科存檔的符合實驗條件的NSCLC癌組織46例，配對切取并篩選出符合實驗條件的距腫瘤邊緣﹥5 cm的癌旁肺組織作為對照20例，所有患者術(shù)前均未行放化療，術(shù)后病理檢查證實為NSCLC。其中男性27例，女性19例；診斷時年齡36～77歲；鱗癌20例，腺癌26例；根據(jù)國際肺癌研究協(xié)會第8版國際肺癌TNM分期標準[6]進行分期，T1期10例，T2期28例，T3期4例，T4期4例；低分化15例，中分化27例，高分化4例；存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18例。

1.2試劑和方法

兔抗人MTA1多克隆抗體購于武漢博士德生物工程有限公司，兔抗人Ki-67單克隆抗體、SP免疫組化試劑盒和DAB顯色試劑盒均購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。所有標本均經(jīng)10%甲醛溶液固定，取石蠟包埋組織4 μm厚度連續(xù)切片，石蠟切片常規(guī)脫蠟、脫水、置入抗原修復(fù)液中修復(fù)。采用SP法免疫組化染色，滴加一抗，具體操作按說明書進行。4℃孵育過夜，二氮基聯(lián)苯胺（DAB）顯色、蘇木精復(fù)染。堿性磷酸鹽（PBS）緩沖液代替一抗作陰性對照。

1.3結(jié)果判斷標準

每張切片的染色結(jié)果需由兩位經(jīng)驗豐富的病理科醫(yī)師審閱。MTA1以細胞質(zhì)和（或）細胞核出現(xiàn)淡黃色、棕黃色或棕褐色顆粒物為陽性。在顯微鏡高倍鏡視野下，根據(jù)陽性染色細胞占所觀察細胞比例記分：0分為≤10%，1分為﹥10%～25%，2分為﹥25%～50%，3分為﹥50%～75%，4分為﹥75%～100%；按細胞顯色強度記分：0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。然后以陽性細胞所占百分比記分與顯色強度記分的兩項乘積進行綜合評分，﹥2分為陽性表達，≤2分為陰性表達。

Ki-67的表達部位主要在細胞核，其結(jié)果判定采用相對定量法：對每張切片隨機選取5個高倍鏡視野，每個視野計數(shù)100個細胞，計算陽性細胞占觀察細胞的百分比。陽性細胞比率﹤20%為陰性表達，≥20%為陽性表達。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MTA1和Ki-67在NSCLC組織中和癌旁對照組織中的表達情況

MTA1和Ki-67在NSCLC組織中表達的陽性率分別為65.22%和54.35%，顯著高于癌旁對照組織中15.00%和20.00%，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），見表1。

2.2 MTA1和Ki-67與NSCLC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

NSCLC組織中MTA1的表達與性別、年齡、病理類型、分化程度無關(guān)（P>0.05），與NSCLC是否發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)（P<0.05）。Ki-67在NSCLC組織中的表達與性別、年齡、病理類型、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P>0.05），與NSCLC的分化程度有關(guān)（P<0.05），見表2。

2.3 MTA1和Ki-67在NSCLC組織中的相關(guān)性

Spearman相關(guān)性分析結(jié)果顯示，MTA1和Ki-67在NSCLC組織中的表達無明顯關(guān)系（P>0.05），見表3。

3討論

上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）在胚胎發(fā)育和癌癥進展過程中起到重要作用，MTA1不僅在多種人類腫瘤中高表達[7]，而且能夠參與EMT過程，從而調(diào)節(jié)腫瘤細胞的生物學(xué)功能[8]。MTA1是多種惡性腫瘤轉(zhuǎn)移過程的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，MTA1通過上調(diào)STAT3轉(zhuǎn)錄活性增強乳腺癌的肺轉(zhuǎn)移，促進細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移，并能夠促使血管生成[9-10]。MTA1可通過直接調(diào)節(jié)E-鈣黏蛋白來增強惡性胸膜間皮瘤（MPM）細胞的轉(zhuǎn)移，而且檢測到MTA1的過表達與MPM患者的不良預(yù)后相關(guān)[11]。研究顯示[12]，MTA1能與Snail或Slug一起抑制食管鱗狀細胞癌細胞中E-鈣黏蛋白的啟動子活性，參與調(diào)節(jié)EMT過程，并改變腫瘤細胞的生物學(xué)活性。Ki-67被確定為許多腫瘤化療敏感性和腫瘤病情評估的重要因素[13]，在乳腺癌研究中，Ki-67與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，并且可通過Ki-67的檢測評估乳腺癌細胞對化療的敏感性[14]。亦有研究發(fā)現(xiàn)，即使利用shRNA沉默Ki-67基因后，該蛋白仍可在癌細胞中被檢測到，可能是因為Ki-67具有良好的穩(wěn)定性，或者其翻譯后降解未在癌細胞中發(fā)生[15]。

本實驗采用免疫組化方法探討MTA1和Ki-67在NSCLC中的表達及相關(guān)性的分析。研究結(jié)果顯示，MTA1和Ki-67在NSCLC組織中的表達顯著高于癌旁對照組織中的表達（P<0.05）；NSCLC發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者MTA1的陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者（P<0.05）；Ki-67在NSCLC低分化組織中的表達高于高中分化者（P<0.05）；在NSCLC組織中MTA1和Ki-67的表達無明顯關(guān)系（P>0.05）；研究結(jié)果顯示，MTA1可能參與NSCLC的轉(zhuǎn)移、擴散，而Ki-67可能參與腫瘤細胞浸潤、侵襲能力的調(diào)節(jié)，其機制的明確仍需大量深入研究。

綜上所述，MTA1、Ki-67可能是腫瘤調(diào)節(jié)過程的新標靶，其早期檢測有助于腫瘤的早期診斷和預(yù)后評估，MTA1、Ki-67作為腫瘤的潛在分子標志物，其調(diào)節(jié)機制的明確，將會成為推動腫瘤研究發(fā)展的動力。

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（收稿日期：2017-03-02 本文編輯：任 念）