奶牛隱性乳房炎研究進(jìn)展

居自遠(yuǎn) 徐小洪 黃炳旭 付守鵬 錢晶

摘要奶牛隱性乳房炎發(fā)病率高，分布范圍廣，病因復(fù)雜，給我國乃至世界乳業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。隨著分子生物學(xué)和計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展與融合，如巢式PCR、宏基因組分析以及免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的普及給該病的診斷帶來了新的方向，能夠更加快速、準(zhǔn)確、便捷地確定病原及病因。另外，在該病的治療方面，中草藥以及新型藥物正在逐步取代傳統(tǒng)抗生素的使用，亦成為該病治療的新趨勢(shì)。從奶牛隱性乳房炎的發(fā)病規(guī)律、病因、診斷和治療方面介紹國內(nèi)外最新研究進(jìn)展。

關(guān)鍵詞奶牛隱性乳房炎；發(fā)病規(guī)律；病因；診斷；治療

中圖分類號(hào)S858.23文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼

A文章編號(hào)0517-6611（2017）32-0091-03

Research Progress on Bovine Subclinical Mastitis

JU Ziyuan1，2，XU Xiaohong2，HUANG Bingxu2，QIAN Jing2，3* et al

（1. Nantong Hao River Tourism Landscape Construction Co.，Ltd.， Nantong， Jiangsu 226001； 2. College of Veterinary Medicine， Jilin University， Changchun， Jilin 130062；3. Institute of Veterinary Medicine， Jiangsu Academy of Agricultural Sciences， Nanjing， Jiangsu 210014）

AbstractBovine subclinical mastitis （SM） causes great loss in China and global diary industry due to its high frequency， wide distribution and complicated etiology.With the development of molecular biology， computer technology， advanced molecular methods have been applied to the diagnose of SM， including nested PCR， metagenome ， and immunological detection technology method which brought the fast， precise， convenient diagnose assays into reality. Moreover， in terms of SE treatment， traditional medicine and new drugs were becoming a tendency， which gradually replaced traditional antibiotics. In this review， the incidence regularity， etiology， diagnose method and treatment of bovine subclinical mastitis were discussed at home and abroad .

Key wordsBovine subclinical mastitis；Incidence regularity；Etiology；Diagnose method；Treatment

奶牛隱性乳房炎是由多種生物及物理因素引起的一種炎癥反應(yīng)，在規(guī)模化牛場(chǎng)的發(fā)病率高達(dá)60%[1]。與臨床型乳腺炎不同，該病不產(chǎn)生明顯的臨床癥狀，病畜常常呈現(xiàn)健康的表象，但奶牛總產(chǎn)乳量會(huì)顯著降低且乳汁會(huì)發(fā)生變化，如導(dǎo)電率增加、pH上升、體細(xì)胞含量增加甚至病原菌數(shù)量超標(biāo)等，進(jìn)而造成乳汁保存期短、營養(yǎng)價(jià)值下降等問題，病牛還會(huì)出現(xiàn)產(chǎn)后發(fā)情推遲的情況，在生產(chǎn)實(shí)踐中常被忽視。病畜如果沒有得到及時(shí)治療，有些病例會(huì)轉(zhuǎn)化為臨床型乳腺炎，造成乳產(chǎn)量的嚴(yán)重下降，乃至奶牛的過早淘汰。另外，病畜極易成為傳染源影響整個(gè)牛群的健康狀況，這也是奶牛隱性乳房炎持續(xù)高發(fā)病率的重要原因。雖然該病對(duì)患病個(gè)體的影響有限，但是由于發(fā)病群體總數(shù)大，持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)奶牛業(yè)的整體影響巨大。據(jù)報(bào)道，荷蘭隱性乳房炎患牛平均每天的產(chǎn)奶量損失約為0.46 kg[2]。我國2016年奶牛存欄量約為1 507萬頭[3]，而隱性乳房炎的經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)3.45億元，嚴(yán)重影響我國奶牛業(yè)的發(fā)展，除此之外病畜來源的奶制品流向市場(chǎng)也給人類公共衛(wèi)生安全造成了極大的隱患。

1奶牛隱性乳房炎的發(fā)病規(guī)律及病因

奶牛隱性乳腺炎的發(fā)生和發(fā)展可歸結(jié)于病原微生物及環(huán)境、動(dòng)物個(gè)體狀態(tài)等多因素的多重作用。與此同時(shí)，產(chǎn)犢次數(shù)、季節(jié)、飼養(yǎng)條件等都會(huì)影響奶牛隱性乳腺炎的發(fā)病率及嚴(yán)重程度，根據(jù)調(diào)查顯示產(chǎn)犢次數(shù)在5～11次，秋季產(chǎn)犢的奶畜隱性乳腺炎的發(fā)病率最高[4]。郭小雅等[5]研究發(fā)現(xiàn)，左乳區(qū)的隱性乳腺炎的發(fā)生率顯著高于右乳區(qū)，且隨年齡的增加，奶畜患隱性乳腺炎的風(fēng)險(xiǎn)也會(huì)上升。營養(yǎng)狀態(tài)也是該病重要的相關(guān)因素，硒作為動(dòng)物機(jī)體的必需微量元素在維持動(dòng)物機(jī)體正常免疫、代謝方面具有重要的作用，缺硒地區(qū)奶牛隱性乳房炎的發(fā)病率高于正常地區(qū)，而在飼料中補(bǔ)充亞硒酸鈉維生素E粉可將該病陽性率由55.71%降低至38.57%，乳區(qū)陽性率也有顯著下降[6]。同其他感染相關(guān)疾病相似，環(huán)境清潔度也與該病的發(fā)病率顯著相關(guān)，伍清林等[7]通過自然沉降法對(duì)規(guī)?；谌槟膛Ｉ醿?nèi)消毒前后空氣細(xì)菌含量進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)未經(jīng)消毒的牛舍空氣細(xì)菌密度高達(dá)77.8×103cfu/m3，而牛乳腺炎的發(fā)病率與牛舍細(xì)菌總數(shù)呈正相關(guān)。

目前，已知可以引起乳房炎的致病菌共有150多種，分為條件致病菌和接觸性傳染性細(xì)菌。其中大腸桿菌（Coliformgroup）、凝固酶陰性葡萄球菌（Loaglase negative staphylococci）以及牛棒狀桿菌（Lorynebacteriumvovis）等條件致病菌多存在于環(huán)境中，僅在飼養(yǎng)管理不當(dāng)如潮濕高溫、通風(fēng)不良、衛(wèi)生條件差的情況下造成感染[8]。Patel等[9]通過宏基因組分析發(fā)現(xiàn)在隱性乳腺炎病畜中葡萄球菌屬和腸球菌屬成員占主導(dǎo)，而在臨床型乳腺炎中鏈球菌則是主要優(yōu)勢(shì)菌群。而引起牛隱性乳房炎主要病原是一類接觸性病原微生物，包括金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、乳房鏈球菌（Streptococcus uberis）、無乳鏈球菌（Streptococcus agalactiae），這些微生物定植于乳腺組織，在消毒不徹底的情況下可通過擠奶工或擠奶機(jī)傳播，進(jìn)而引起慢性感染，如不能得到及時(shí)治療極易發(fā)展為慢性乳房炎[10]。隨著抗生素的廣泛使用，耐藥性金黃色葡萄球菌（Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus，MRSA）等耐藥菌也逐漸暴露在研究人員的視野中。王林等[11]使用七大類9種抗菌藥物對(duì)從臨床分離的15株金黃色葡萄球菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，結(jié)果顯示所有金黃色葡萄球菌株均對(duì)β-內(nèi)酰胺類中的氨芐西林產(chǎn)生耐藥，耐藥率達(dá)100%；對(duì)克林霉素、環(huán)丙沙星、四環(huán)素和呋喃妥因具有一定的耐藥性；對(duì)氧氟沙星、慶大霉素、頭孢噻肟和頭孢曲松的耐藥率低至6.67 %。張玉玲等[1]報(bào)道了奶牛乳腺來源的金黃色葡萄球菌對(duì)青霉素、羧芐青霉素、氨芐青霉素、頭孢唑啉、頭孢噻吩、克林霉素、紅霉素共計(jì)7種藥物耐藥；無乳鏈球菌對(duì)克林霉、四環(huán)素、青霉素耐藥；大腸桿菌對(duì)強(qiáng)力霉素、頭孢噻吩、卡那霉素、羧芐青霉素、四環(huán)素、氨芐西林耐藥。耐藥菌的大量分離意味著常規(guī)的抗生素治療乃至干乳期抗生素預(yù)防很可能無法達(dá)到預(yù)期的效果，這給該病的治療帶來嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。另外，隨著檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展，許多以前并未被報(bào)道的病原如嗜麥芽窄食單胞菌、放射根瘤菌、非脫羧勒克菌、少動(dòng)鞘氨醇桿菌也逐步被發(fā)現(xiàn)存在于隱性乳房炎病畜[12]，使得該病的病因更復(fù)雜。

2奶牛隱性乳房炎的診斷

體細(xì)胞計(jì)數(shù)法是最早、最常用的診斷方法，20世紀(jì)40年代，Little等[13]發(fā)明了直接顯微鏡計(jì)數(shù)法，判定每毫升乳汁體細(xì)胞數(shù)超過50萬個(gè)為乳房炎。乳汁中的體細(xì)胞主要包括乳腺上皮細(xì)胞和炎性細(xì)胞，當(dāng)乳腺發(fā)生炎癥時(shí)，炎性細(xì)胞數(shù)量會(huì)顯著增加，根據(jù)乳汁中體細(xì)胞數(shù)的變化來判斷奶牛是否患有乳房炎是診斷奶牛隱性乳房炎的一種較為簡(jiǎn)便、可靠的辦法。

另一種常見的診斷方法，也是國際通用隱性乳腺炎診斷法，稱為加州乳房炎測(cè)試法（CMT），其原理是牛奶中的體細(xì)胞被破壞后釋放出的DNA可以使乳汁產(chǎn)生沉淀，根據(jù)沉淀量判斷細(xì)胞含量。由此原理還衍生了很多類似的檢測(cè)方法，如美國的威斯康星乳腺炎檢測(cè)法 （WMT），應(yīng)用也非常廣泛。除此之外的診斷方法還包括pH值法、導(dǎo)電率變化、介電常數(shù)法（REP）、紅外熱成像法（IRT）、黏度法、ATP 法、DNA 含量測(cè)定法、乳成分直接檢測(cè)法、生物芯片或微控檢測(cè)方法[14]。也有研究人員不斷嘗試?yán)戏椒ǖ男聭?yīng)用，如伊嵐等[15]通過試驗(yàn)將 MTT 法用于奶牛乳房炎的藥敏試驗(yàn)，有效、準(zhǔn)確、快速地篩選出了抗菌藥物。Sadek等[16]發(fā)現(xiàn)多個(gè)急性期蛋白（acute phase proteins， APPs）、促炎性細(xì)胞因子和一些氧化應(yīng)激細(xì)胞因子也可作為隱性乳腺炎的診斷分子靶標(biāo)。

除了對(duì)乳品性質(zhì)的直接檢測(cè)外，也有研究人員從營養(yǎng)價(jià)值入手。GPx是一種含硒酶，可以通過催化多種過氧化物還原反應(yīng)保護(hù)機(jī)體不受氧化損傷的影響。乳汁中的GPx具有保護(hù)脂類的重要作用，而乳汁中GPx的含量也與奶牛乳腺的炎性水平密切相關(guān)，楊豐利等[17]發(fā)現(xiàn)隱性乳腺炎患畜乳汁中GPx含量顯著低于健康牛乳汁，然而SOD以及AST活性在正常組中與病畜乳汁中并無明顯差異。病牛血清中激素以及一些細(xì)胞因子水平的變化也是潛在的奶牛隱性乳腺炎診斷指標(biāo)，Musal等[18]分析健康母畜和隱性乳腺炎患畜經(jīng)排卵期同步發(fā)情法同步發(fā)情期后進(jìn)行人工授精后的受孕率和血清雌二醇及TNF-alpha水平，發(fā)現(xiàn)患畜不僅受孕率低于對(duì)照組，而且血清中雌二醇及TNF-alpha水平也顯著高于對(duì)照組。

以上檢測(cè)方法需要專業(yè)的檢測(cè)試劑及人員，甚至配套的實(shí)驗(yàn)室設(shè)施，而蔡一欣等[19]構(gòu)建了一種基于計(jì)算機(jī)視覺技術(shù)的快速檢測(cè)系統(tǒng)，通過融合顏色特征與形態(tài)學(xué)處理的分割方法，分割化學(xué)反應(yīng)區(qū)并獲取RGB值，以Foss5000牛乳體細(xì)胞分析儀得到SSC實(shí)測(cè)值為標(biāo)準(zhǔn)，建立RGB值與牛奶體細(xì)胞數(shù)的預(yù)測(cè)模型，結(jié)合Android技術(shù)開發(fā)了可用于手機(jī)終端的便攜式檢測(cè)技術(shù)。臨床檢驗(yàn)中，牛奶體細(xì)胞數(shù)估測(cè)值與實(shí)測(cè)值相關(guān)系數(shù)高達(dá)0.970，為奶牛隱性乳房炎快速檢測(cè)提供了更方便經(jīng)濟(jì)的選擇。

在臨床實(shí)踐上，特定病原的診斷對(duì)指導(dǎo)具體病例的治療具有重要的意義。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展以及相應(yīng)技術(shù)的普及，針對(duì)某些特定病原的檢測(cè)，已經(jīng)發(fā)展出多種PCR檢測(cè)方法，因其快速、準(zhǔn)確、靈敏度高，逐漸被廣大獸醫(yī)臨床工作者接受。早在2006年，我國就有研究人員將PCR應(yīng)用于奶牛隱性乳房炎的病原檢測(cè)[20]。蔣成硯等[21]在此基礎(chǔ)上分別設(shè)計(jì)細(xì)菌16S rRNA通用引物和針對(duì)無乳鏈球菌的特異性引物，建立了無乳鏈球菌巢式PCR檢測(cè)方法，并分別采用傳統(tǒng)分離鑒定方法檢測(cè)了20份臨床疑似乳房炎鮮奶樣品，結(jié)果通過比對(duì)經(jīng)巢式PCR技術(shù)擴(kuò)增的1541bp片段與GeneBank數(shù)據(jù)庫中收錄的鏈球菌序列，快速準(zhǔn)確找出了分離株的親本菌株Streptococcus uberis USC71-LHICA，結(jié)果與生理、生化結(jié)果一致。

3奶牛隱性乳房炎的治療

國內(nèi)現(xiàn)在常見的奶牛隱性乳腺炎治療方法仍然是抗生素治療，具體手段包括乳房注射、乳頭藥浴以及乳房部封閉療法等，這些治療方法在過去起到一定的效果，但隨著耐藥菌的出現(xiàn)及多病原多致病因素對(duì)隱性乳腺炎疊加作用，傳統(tǒng)治療方法的有效性正在持續(xù)減弱，而且長(zhǎng)時(shí)間大劑量造成的乳中抗生素殘留問題也嚴(yán)重影響乳品治療以及人類健康。因此，有效的非抗生素治療策略的發(fā)展對(duì)該病的防治意義重大。新型乳腺炎治療制劑包括乳酸鏈球菌素、Aegis溶菌酶、溶葡萄球菌酶、CpG-DNA、血小板濃縮液、牛至油等，且均已得到證明可用于奶牛乳腺炎臨床治療[22-23]。除此之外，中獸醫(yī)藥物治療因其低成本、無休藥期限制、治愈率高、生態(tài)環(huán)保等優(yōu)勢(shì)逐步發(fā)展為臨床治療的一個(gè)方向。郝景鋒等[24]比較了包括蒲公英、魚腥草在內(nèi)的20味中藥對(duì)分離于隱性乳房炎病畜乳汁中的大腸桿菌、鏈球菌及金黃色葡萄球菌的體外抑菌效果，結(jié)果表明蒲公英、魚腥草、益母草、紅花、金銀花等5味中藥對(duì)這三種病原菌具有較好的綜合抑制效果。除了利用單獨(dú)某種藥物進(jìn)行抑菌之外，臨床上中藥制劑及多種中藥的聯(lián)合應(yīng)用更為常見，如蒲公英、紅花、黃連、黃岑、王不留行、金銀花和當(dāng)歸制成的方劑作為飼料添加劑不僅對(duì)隱性乳腺炎的治療作用良好，也可以在一定程度上提升產(chǎn)奶量[25]。與之相似，陳亞楠等[26]發(fā)現(xiàn)中藥制劑歸芪散治療隱性乳房炎有效率達(dá)100%，治愈率為76%，轉(zhuǎn)化為臨床型乳房炎的為0%。與中藥制劑相比，中藥提取物具有相對(duì)明確藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、穩(wěn)定的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，所以更適用于標(biāo)準(zhǔn)化、大規(guī)模臨床應(yīng)用。孫美涵等[27]發(fā)現(xiàn)杜仲素可以提高健康奶牛泌乳量、乳脂率、乳糖率以及IgG含量等一系列乳品質(zhì)量相關(guān)指標(biāo)，且能夠提高隱性乳房炎病畜產(chǎn)奶量、乳脂率和乳糖率，可極顯著降低WBC、GRA、體細(xì)胞數(shù)以及乳蛋白率等，能對(duì)隱性乳房炎起到一定的防治效果。與郝景鋒等的研究結(jié)果相似的是，蒲公英超微粉及蒲公英針劑在降低奶牛體細(xì)胞數(shù)、防治奶牛隱性乳房炎方面也有著顯著的效果 [28-29]。

綜上所述，作為一種危害嚴(yán)重的奶業(yè)疾病，奶牛隱性乳腺炎逐漸受到重視，其診斷方法受益于分子生物學(xué)技術(shù)、計(jì)算機(jī)技術(shù)的發(fā)展與普及，正在向更快速、準(zhǔn)確、便攜的方向前進(jìn)。耐藥菌的大量出現(xiàn)、藥物殘留等問題極大地限制了傳統(tǒng)抗生素治療的應(yīng)用，新型防治藥物的研制以及傳統(tǒng)中草藥的新應(yīng)用有望替代傳統(tǒng)治療，為高效防控奶牛隱性乳腺炎提供更好的條件。

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