昆蟲中藥五谷蟲的養(yǎng)殖以及抗菌活性研究

薛雪 汪金燕 楊得坡

摘要[目的]研究五谷蟲油脂抗菌活性。[方法]用8種不同類型配比的飼料養(yǎng)殖得到不同五谷蟲并烘干得到其干體，然后用索氏提取法分別提取得到不同種類五谷蟲油脂，并用紙片擴(kuò)散法對(duì)這8種油進(jìn)行抗菌活性研究。[結(jié)果]用餐廚熟食飼養(yǎng)蠅蛆不僅成本低，且最終得到的油脂具有較好的抗菌作用，其對(duì)大腸桿菌有抑菌效果；而其余的油對(duì)大腸桿菌、枯草桿菌及金黃色葡萄球菌均無明顯抑菌效果。[結(jié)論]用餐廚熟食飼養(yǎng)的五谷蟲提取得到的油脂對(duì)大腸桿菌具有抑菌效果，從而為五谷蟲的研究利用展示了新的方向。

關(guān)鍵詞五谷蟲；大頭金蠅；養(yǎng)殖；抗菌活性

中圖分類號(hào)R282.74文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào)0517-6611（2017）35-0119-03

Abstract[Objective] The research aimed to study the antibacterial activity of traditional Chinese medicine Wuguchong grease.[Method]Different kinds of Wuguchong were obtained and dried by 8 different kinds of different kinds of feed，different kinds of grease were extracted by soxhlet extraction， and the antibacterial activity of the eight kinds of grease was studied by disk diffusion method.[Result]The feeding of the cooked food was not only low cost， but also the final grease had good antibacterial effect， it had bacteriostatic effect on Escherichia coli， and the other grease had no obvious antibacterial effect to Escherichia coli， Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus.[Conclusion]The grease which extracted from Wuguchong fed with kitchen waste had inhibitory effect on Escherichia coli.Thus， the research and utilization of Wuguchong showed a new direction.

Key wordsWuguchong；Chrysomya megacephala；Cultivation；Antibacterial activity

在中藥行業(yè)，藥用昆蟲范疇內(nèi)，昆蟲雙翅目大頭金蠅（Chrysomya megacephala，又名大頭麗蠅、東方廁蠅）及其近緣昆蟲（如家蠅Musca domestica）的干燥幼蟲（蠅蛆）是一味傳統(tǒng)中藥，名曰“五谷蟲”，又名水仙子、羅仙子，俗名“蛆”[1]。大頭金蠅屬全變態(tài)昆蟲，包括卵、幼蟲、蛹和成蟲4個(gè)發(fā)育階段[2]，各個(gè)時(shí)期的形態(tài)各不相同[3]?！侗静菥V目》和《本草求源》表明，其具有清熱解毒、消積滯的功能，干燥后研磨，可供搽敷外用，能治療臁瘡、唇疔病癥[4]。蠅蛆的養(yǎng)殖成本低，飼養(yǎng)操作方便，飼養(yǎng)場(chǎng)地要求相對(duì)較低，當(dāng)溫度及相對(duì)濕度在適宜的條件下，其幼蟲的繁殖可以持續(xù)1年[5]，它的生存適應(yīng)能力強(qiáng)，不受季節(jié)影響，從而被國(guó)際上列為新型蛋白質(zhì)源昆蟲之首[6]。大頭金蠅因其巨大的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值、藥用價(jià)值和商用價(jià)值，在國(guó)內(nèi)外都具有廣闊的市場(chǎng)[7]。

早在20世紀(jì)90年代，西方曾有學(xué)者報(bào)道過五谷蟲具有防止創(chuàng)口傷面感染和清創(chuàng)的作用[8]，運(yùn)用五谷蟲活體對(duì)感染的創(chuàng)口傷面進(jìn)行治療，也起到了很好的效果[9]。趙澤旭[10]研究五谷蟲干粉對(duì)大鼠創(chuàng)面愈合及血管生成的影響表明，五谷蟲干粉可以促進(jìn)創(chuàng)面愈合，提高皮膚創(chuàng)面愈合率及質(zhì)量。牛長(zhǎng)纓等[11]用氣相色譜法對(duì)不同蟲態(tài)的家蠅（包括蛹、幼蟲、成蟲）中的脂肪酸成分和含量進(jìn)行了分析，共鑒定出10種脂肪酸。五谷蟲油脂具有抗炎及燙傷治療作用[12]，防止疤痕的形成等功效[13]。有研究表明，五谷蟲體內(nèi)提取出的抗菌肽具有較好的抗菌效果，五谷蟲油中所含成分對(duì)皮膚炎癥及微生物感染也都有一定療效[14]。筆者采用索氏提取法提取了不同飼料養(yǎng)殖的蠅蛆的油脂，對(duì)其進(jìn)行性狀評(píng)價(jià)和油脂提取率測(cè)定，并主要研究了五谷蟲油脂的抗菌作用，以期為五谷蟲的開發(fā)利用提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1

試材。大頭金蠅蠅種（廣東中山火炬開發(fā)區(qū)收集）；奶粉、紅糖、蛋清及各飼料（市售）；枯草桿菌ATCC9372（廣東省微生物檢測(cè)中心）；金黃色葡萄球菌ATCC25923（廣東省微生物檢測(cè)中心）；大腸桿菌ATCC8739（廣東省微生物檢測(cè)中心）。

1.1.2

試劑。正己烷（分析純，天津市大茂化學(xué)試劑廠）；氯化鈉（天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司）；蛋白胨（北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司）；牛肉浸膏（廣州環(huán)凱微生物科技有限公司）；營(yíng)養(yǎng)瓊脂（廣州環(huán)凱微生物科技有限公司）。

1.1.3

儀器。集熱式恒溫加熱磁力攪拌器DF-101S（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）；循環(huán)水式多用真空泵SH2-DCII（上海愛朗儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀N91100（上海愛朗儀器有限公司）；水浴鍋 SB-1100（上海愛朗儀器有限公司）；冷卻水循環(huán)裝置 CA-1111（上海愛朗儀器有限公司）；電子分析天平BL-2200H（瑞士Mettler Toledo公司）；MlX-805恒溫培養(yǎng)箱（上海比朗儀器有限公司）；LDZM-60KCS立式壓力蒸汽滅菌器（上海申安醫(yī)療器械廠）；HZS-HA水浴振蕩器（中國(guó)哈爾濱市東聯(lián)電子技術(shù)開發(fā)有限公司）。

1.2方法

1.2.1

種蠅的培養(yǎng)及蠅卵的收集。將種蠅培養(yǎng)在紗籠中，養(yǎng)殖密度為2.8 cm3/只。每天給予紅糖∶奶粉∶蛋清（2∶2∶1）作為食物，自來水為飲用水。養(yǎng)殖溫度保持在25 ℃，自然光照12∶12（L∶D）培養(yǎng)。用布袋包裹引誘劑作為集卵器，收集蠅卵，稱重，接種到不同配比培養(yǎng)基。

1.2.2

組合培養(yǎng)基的制備。原料組成以及用料百分含量見表1飼料配比，組合培養(yǎng)基的制備其原料組成以及用料百分含量分別為麥麩40%～80%、玉米粉2%～20%、豆粕粉2%～20%、全株青玉米2%～20%。將飼料按比例混合均勻，加水?dāng)嚢瑁瑵穸瓤刂圃?5%，pH控制在6。

1.2.3

蠅蛆的接種與培養(yǎng)。每1 000 g“1.2.2”組合培養(yǎng)基中接種0.5 g蠅卵，將蠅卵在25 ℃下培養(yǎng)，待蠅卵孵化后應(yīng)適當(dāng)攪拌培養(yǎng)基使蠅蛆分布均勻，并給予充分的空氣（每6 h通風(fēng)1次）。蠅蛆培養(yǎng)5 d后，將培養(yǎng)基與蠅蛆一同放入烘箱中60 ℃干燥，得到干燥蠅蛆。

1.2.4主要營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定。新鮮幼蟲放入沸水即時(shí)死亡，在60 ℃烤箱干24 h后評(píng)估含水量；凱氏定氮法測(cè)定蛋白含量；在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器50 ℃真空條件下，正己烷索氏提取，提取油脂8 h；酸堿消化法測(cè)量纖維和總灰分的含量。

1.2.5

五谷蟲油脂提取。將所有批次五谷蟲干體分別用粉碎機(jī)粉碎，精確稱取3.0 g粉末，用濾紙包好烘干，放入索氏提取器中，以100 mL正己烷作為溶劑回流提取3 h，提取液減壓旋蒸后得到五谷蟲油脂，稱重（g），計(jì)算提取率：

提取率=五谷蟲油質(zhì)量五谷粉末質(zhì)量×100%

1.2.6

抗菌活性研究。液體培養(yǎng)基配制：分別稱取蛋白胨1.0 g、牛肉浸膏0.3 g、NaCl 0.5 g，加入100 mL蒸餾水溶解，調(diào)節(jié)pH至7.0后置于高壓蒸汽滅菌，鍋中溫度為121 ℃高壓滅菌0.5 h。固體培養(yǎng)基：稱取瓊脂3.32 g，加入100 mL蒸餾水溶解后置于溫度為121 ℃的滅菌鍋中高壓滅菌0.5 h[15]。

在超凈工作臺(tái)上，分別吸取金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌菌種30 μL于液體培養(yǎng)基錐形瓶，放至振蕩培養(yǎng)箱37 ℃培養(yǎng)過夜。在超凈工作臺(tái)內(nèi)，吸取菌液100 μL涂布于固體培養(yǎng)基上，用無菌鑷子將滅菌后的濾紙片放入五谷蟲油中浸泡后取出，將含樣品的紙片貼于平板上，輕輕按壓，使藥片與培養(yǎng)基密切接觸。完成后將培養(yǎng)皿放在37 ℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24 h。觀察含藥紙片周圍有無抑菌圈[16]。

2結(jié)果與分析

2.1五谷蟲油脂營(yíng)養(yǎng)成分分析

各批次蛆蟲所含營(yíng)養(yǎng)成分沒有顯著性差異，在此選取其中一個(gè)批次蛆蟲研究主要營(yíng)養(yǎng)成分，具體結(jié)果如表2所示。由表2可知，在蠅蛆營(yíng)養(yǎng)成分中，水分占71.40%，是所占比重最大部分，而其中纖維與總灰分的比重最小，該研究后續(xù)試驗(yàn)中所用到的油脂僅占420%。

2.2五谷蟲油脂基本性狀分析

根據(jù)“1.2.5”方法提取得到所有批次五谷蟲油脂的基本性狀及提取率如表3所示。從表1和表3可以看出，用飼料中含有餐廚熟食最終得到的油脂顏色較深，為紅棕色，而其余為金黃色，且2015年9月25日的批次即用麥麩100 g+餐廚熟食1 kg飼養(yǎng)出來的五谷蟲油脂提取率最高，這可能與飼料配比中含有較多餐廚熟食有關(guān)，餐廚熟食所含油脂較多導(dǎo)致蠅蛆養(yǎng)殖過程中蟲體對(duì)其吸收較高所致。

2.3抗菌活性

采用紙片擴(kuò)散法考察8種不同批次五谷蟲油對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草桿菌、大腸桿菌3種常見致病菌的抑制作用，結(jié)果如圖1所示。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，這8種批次的五谷蟲油脂浸漬的圓紙片在金黃色葡萄球菌、枯草桿菌菌種培養(yǎng)基沒有形成明顯抑菌圈；而1、2、3號(hào)批次的油脂在大腸桿菌菌種培養(yǎng)基形成了較明顯抑菌圈。表明這8種五谷蟲油脂對(duì)金黃色葡萄球菌、枯草桿菌無明顯抑制作用，而飼料配比為麥麩∶餐廚熟食（1∶10）、麥麩∶餐廚熟食（3∶7）及小米糠∶餐廚熟食（3∶7）飼養(yǎng)的五谷蟲提取出來的油脂對(duì)大腸桿菌有抑制效果，根據(jù)此推測(cè)這種效果可能與飼料中加入了餐廚熟食有關(guān)，同時(shí)也可能與飼料中成分轉(zhuǎn)化有關(guān)。

目前研究從五谷蟲體內(nèi)提取出多種抗菌肽成分，試驗(yàn)證明其具有較好的抗菌殺菌效果。同時(shí)有研究表明，家蠅蠅蛆油對(duì)常見致病菌具有抑制活性，而且對(duì)動(dòng)物燙傷有顯著療效，對(duì)動(dòng)物皮膚也無刺激性和過敏性[14]。從試驗(yàn)數(shù)據(jù)可以推斷，不同飼料配比所得油脂抑菌活性不同，可能由于某一比例配比時(shí)利于蠅蛆體內(nèi)生物轉(zhuǎn)化所導(dǎo)致。

3結(jié)論

該研究用8種不同類型配比的飼料養(yǎng)殖得到不同五谷蟲并烘干得到其干體，然后用索氏提取法分別提取得到不同種類五谷蟲油脂，其中飼料含有餐廚熟食得到的五谷蟲干體及其提取出的油的顏色較其他批次飼料的深。用紙片擴(kuò)散法對(duì)這8種油進(jìn)行抗菌活性研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用餐廚熟食飼養(yǎng)蠅蛆不僅成本低，且最終得到的油脂具有較好的抗菌作用，其對(duì)大腸桿菌有抑菌效果，而其余的油對(duì)大腸桿菌、枯草桿菌及金黃色葡萄球菌均無明顯抑菌效果。

該研究采用新鮮蛆蟲作為原料，從源頭養(yǎng)殖到成分提取，再到后期的抗菌活性測(cè)試，一方面保證了原料的品質(zhì)，另一方面實(shí)現(xiàn)了餐廚垃圾的廢物利用，使得蠅蛆養(yǎng)殖利用更加合理規(guī)范，蠅蛆作為新的藥用能源具有很高的可行性與適用性，為昆蟲資源的開發(fā)利用展示了新的方向。

參考文獻(xiàn)

[1] 李鋒，姜紅.蒼蠅資源應(yīng)用前景展望[J].寧夏農(nóng)林科技，2001（1）：49-50.

[2] GOFF M L.Encyclopedia of insects[M].Second Edition.Salt Lake City：Academic Press，2009：381-386.

[3] GABRE R M，ADHAM F K，CHI H.Life table of Chrysomya megacephala（Fabricius）（Diptera：Calliphoridae）[J].Acta Oecol，2005，27（3）：179-183.

[4] 王壽宇.中藥五谷蟲對(duì)感染創(chuàng)面抗菌作用的臨床與分子機(jī)制研究[D].大連：大連醫(yī)科大學(xué)，2008.

[5] THEVAN K，AHMAD A H，RAWI C S，et al.Growth of Chrysomya megacephala（Fabricius）maggots in a morgue cooler[J].Journal of forensic sciences，2010，55（6）：1656-1658.

[6] 吳青華，田河，蘇立申，等.家蠅幼蟲及其產(chǎn)品開發(fā)利用研究進(jìn)展[J].飼料工業(yè)，2006，27（16）：63-64.

[7] 楊滿軍，張彩峽.蠅蛆的開發(fā)利用[J].畜牧與飼料科學(xué)，2011，32（4）：77-78.

[8] SHERMAN R A，WYLE F，VULPE M.Maggot therapy for treating pressure ulcers in spinal cord injury patients[J].J Spinal Cord Med，1995，18（2）：71-74.

[9] MUMCUOGLU K Y，INGHER A，GILEAD I，et al.Maggot therapy for the treatment of intractable wounds[J].Int J Dermatol，1999，38（8）：

623-627.

[10] 趙澤旭.五谷蟲干粉對(duì)大鼠皮膚創(chuàng)面愈合及血管生成影響的實(shí)驗(yàn)研究[D].大連：大連醫(yī)科大學(xué)，2010.

[11] 牛長(zhǎng)纓，雷朝亮，宗良炳.家蠅油脂脂肪酸的氣相色譜分析[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，18（3）：222-224.

[12] 顧亞鳳.蠅蛆油對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物皮膚的刺激性、過敏性及燙傷治療藥效研究[J].中國(guó)獸藥雜志，2004，38（10）：16-17，38.

[13] 陳淑媛.蠅蛆油脂化學(xué)成分、理化特性及其對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)性燙傷治療藥效的研究[D].武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2007.

[14] 于學(xué)珍，馬世平，李海濤，等.植物甾醇凝膠促進(jìn)燒傷創(chuàng)面愈合及抗炎作用[J].中國(guó)天然藥物，2007，5（2）：130-133.

[15] 劉如運(yùn).幾種常用抑菌試驗(yàn)方法的評(píng)價(jià)及比較[J].現(xiàn)代企業(yè)教育，2013（14）：341-342.

[16] 宋磊，石治川，張杰，等.“紅七星”大蒜油的抑菌活性研究[J].廣州化學(xué)，2015，40（4）：59-62.