黃超 張博文 汪中兵
摘要:文章介紹了開發(fā)生物太陽能電池的兩項關(guān)鍵技術(shù),即PSI的分離純化和PSI的熱穩(wěn)定性。文章采用蔗糖密度梯度離心的方法對鈍頂螺旋藻光合膜蛋白PSI進行分離純化,并對其光譜學性質(zhì)、熱穩(wěn)定性及光合放氧活性進行分析表征。結(jié)果表明,采用該方法,可以成功分離出4條色素蛋白質(zhì)復合體條帶,其中最下層條帶為完整的PSI三聚體,其光合放氧活性達到420μmol/mg.h。通過使用短肽表面活性劑15K2,成功地提高了PSI的熱穩(wěn)定性,使PSI的變性溫度由48.2℃提高到52.4℃,半衰期也大幅度地提高。文章為藻類PSI基納米捕光器件的開發(fā)提供了重要的方法和物質(zhì)基礎(chǔ)。
關(guān)鍵詞:生物太陽能電池;PSI;膜蛋白;熱穩(wěn)定性
目前,化石能源日漸枯竭,太陽能的利用被認為是解決能源危機的根本途徑。本研究以近來開發(fā)的短肽表面活性劑成功地提高了PSI的熱穩(wěn)定性,為新型短肽表面活性劑的開發(fā)提供參考,并為電池的制作奠定基礎(chǔ)。
1試驗過程
1.1材料預處理
經(jīng)光照培養(yǎng)、離心分離后,得鈍頂螺旋藻;將增溶后的類囊體膜鋪在蔗糖密度梯度的最上層,提純PSI。然后測定不同增溶比下各條帶的Chla含量,通過考馬斯亮藍R250染色,采用SDS-PAGE電泳對樣品進行分析,考察其多肽組成;將純化的PSI溶于緩沖溶液,測定在光照下溶液中的02;通過HANSATECH放氧系統(tǒng)檢測其放氧活性。
選擇幾種具有較好膜蛋白穩(wěn)定性的短肽表面活性劑(即Ac-A6K-NH2,Ac-V6K2-NH2,Ac-V6D2-NH2,Ac-A6D-COOH),將其溶在Milli-Q水中,配成0.1 mol/L的母液,過濾后備用。
1.2探究短肽及其濃度對PSI熱穩(wěn)定性的影響
將上述母液溶于緩沖溶液中,超聲分散,將分裝融化的PSI溶于上述溶液中,使溶液達到動態(tài)平衡。采用圓二色光譜儀,測定短肽對PSI熱穩(wěn)定性的影響。
配制短肽的濃度分別為:0.35,0.45,0.55,0.65,0 75(mmol/L)樣品溶液3 mL,采用圓二色光譜儀,恒溫48.2℃,每5 min掃描一次,掃描范圍625~745 nm,掃描速率0.5 nm/s,檢測總時長120 min。
2結(jié)果與討論
2.1增溶條件的優(yōu)化
經(jīng)增溶后的類囊體膜分離后得到自上而下的a,b,c,d 4條帶,分析c,d帶的Chla含量(見圖1)。可知,增溶比不斷增大,d帶的Chla含量先增大再減小,而c帶稍微有點上升,增溶比在22.5:1時,能得到最大的PSI。
2.2光合放氧活性的測定
試驗測得PSI的光合放氧活性為:Chla耗氧量為420μmol/mg.h,是未分離活性的2倍左右,說明分離得到的PSI具有較高的光合活性。
3結(jié)語
光合作用可以高效轉(zhuǎn)化太陽能為電勢能和化學能,通過光合膜蛋白來制作新型生物太陽能電池具有重大發(fā)展?jié)摿?。本文通過超速離心分離成功從鈍頂螺旋藻中分離出PSI,并發(fā)現(xiàn)當增溶比為30時,可提取最大量的PSI。通過電泳分析和光學活性檢測,可證明得到了純度和活性都非常高的PSI,為PSI穩(wěn)定性的進一步研究和基于PSI的生物太陽能電池開發(fā)奠定了重要基礎(chǔ)。
本研究還考察了不同短肽表面活性劑中對PSI的熱穩(wěn)定性的影響,陽離子型的15K2表現(xiàn)出較好的穩(wěn)定性效果,可以使PSI的Tm值由48.2℃提高到51.5℃,具有明顯的濃度效應。