復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病菌種的鑒定及其耐藥性情況分析

徐怡++王朝甘

[摘要] 目的 探討復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病菌種的鑒定方法及耐藥性情況。 方法 取2015年1月～2016年4月醫(yī)院收治的復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病患者340例，從患者陰道分泌物中提取真菌培養(yǎng)標本，對檢測的標本進行分離、鑒定，并對復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病菌種進行鑒定，分析其耐藥性。 結(jié)果 340例患者中共分離出340株病原菌，排在前三位的分別為白色念珠菌、光滑念珠菌及熱帶念珠菌，分別為245株、35株及29株，分別占72.06%、10.29%及8.53%；不同的病原菌對不同抗生素的耐藥性不同，白色念珠菌最高耐藥藥物為5-氟胞嘧啶（26.53%），光滑念珠菌最高耐藥藥物為伊曲康唑（57.14%），熱帶念珠菌最高耐藥藥物為5-氟胞嘧啶（27.59%）；近平滑念珠菌最高耐藥藥物為伊曲康唑和5-氟胞嘧啶（12.50%）；克柔念珠菌最高耐藥藥物為氟康唑（100.0%）。結(jié)論 對復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病患者病菌進行分離鑒定能了解病原菌的耐藥性，并根據(jù)耐藥性情況選擇合適的抗菌藥物，提高臨床治療效果，促進患者早期恢復。

[關鍵詞] 復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌；鑒定方法；抗菌藥物；耐藥性

[中圖分類號] R446.5；R711.31 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2016）35-0118-03

Identification of recurrent vulvovaginal candidiasis and analysis of drug resistance

XU Yi1 WANG Chaogan2

1.Department of Gynecology and Obstetrics， Leping Maternal and Child Health Hospital in Jiangxi Province， Leping 333300， China； 2.Department of Laboratory， Leping Maternal and Child Health Hospital in Jiangxi Province， Leping 333300， China

[Abstract] Objective To investigate the identification method and antibiotic resistance of recurrent vulvovaginal candidiasis. Methods A total of 340 patients with recurrent vulvovaginal candidiasis admitted in the hospital from January 2015 to April 2016 were collected and the culture samples of the fungus were extracted from the vaginal secretions of the patients， and the testing specimens were separated and identified. The strain of recurrent vulvovaginal candidiasis was identified and drug resistance of candida was analyzed. Results A total of 340 strains of pathogenic bacteria were isolated from 340 patients. Candida albicans， Candida glabrata and Candida tropicalis were the first three strains， with 245， 35 and 29， accounting for 72.06%， 10.29% and 8.53%，respectively.Antibiotic resistance of various pathogens to different antibiotics was different.The highest resistance of Candida albicans to 5-fluorocytosine was 26.53%；the highest resistance of Candida glabrata to Itraconazole was 57.14%； the highest resistance of Candida tropicalis to 5-fluorocytosine was 27.59%； the highest resistance of Candida parapsilosis to Itraconazole and 5-fluorocytosine was 12.50%； and the highest resistance of C. kruseii to Fluconazole was 100.0%. Conclusion Isolating and identifying the pathogens of patients with recurrent vulvovaginal candidiasis can understand the drug resistance， and the right antibiotics are chosen according to the drug resistance situation to improve clinical efficacy and promote early recovery of patients.

[Key words] Vulvovaginal candidiasis； Identification method； Antibacterial drugs； Drug resistance

復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌?。╲ulvovaginal candidiasis，VVC）是臨床上常見的陰道念珠菌病，患者發(fā)病后臨床上表現(xiàn)為外陰瘙癢、灼痛、性交痛、尿急、尿頻等，影響患者健康[1]。相關報道顯示[2]：VVC病原體為假絲酵母菌，且80%～90%患者為白假絲酵母菌，10%～20%患者為非白假絲酵母菌。目前，臨床上對于VVC以抗菌藥物治療為主，但是我國抗菌藥物、激素、免疫抑制劑的不合理使用，導致病原菌耐藥性發(fā)生率較高，部分菌種甚至發(fā)生變遷，難以達到預期的治療效果[3，4]。因此，加強VVC菌種的鑒定方法及耐藥性情況研究對選擇合理的抗菌藥物具有重要的意義。為了探討復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病菌種的鑒定方法及耐藥性情況，本文選取2015年1月～2016年4月本院收治的復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病患者340例，報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料

選取2015年1月～2016年4月本院收治的復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病患者340例，年齡21～58歲，平均（32.51±4.71）歲，病程1～7周，平均（3.1±0.8）周。納入標準：①符合復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病臨床診斷標準[5]；②入院后均伴有不同程度的外陰瘙癢、充血；③均經(jīng)過生化指標、影像學檢查確診。排除標準：①排除不符合復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病臨床診斷標準者；②排除合并有影響效應指標觀測、判斷其他生理或病理者；③排除合并自身免疫力下降疾病及糖尿病者。

1.2 方法

上述患者均進行陰道分泌物提取并對其中真菌進行相應的培養(yǎng)。①標本采集。利用窺陰器擴張陰道，并采用無菌拭子取2份陰道后穹隆分泌物，一份用于培養(yǎng)，一份用于涂片鏡檢查，保溫后送檢。②涂片鏡檢查。向采集的陰道分泌物中滴加濃度為10.0%的氫氧化鉀涂片，在10×40倍顯微鏡下觀察圓形的芽生孢子[6]。③病原菌的鑒定。向陰道分泌物中支架連續(xù)劃線，接種在科瑪嘉假絲酵母菌顯色培養(yǎng)基中，28℃下連續(xù)進行24～48 h培養(yǎng)。根據(jù)培養(yǎng)病原菌的形態(tài)、大小及菌群情況進行鑒定。通常來說，白色念珠菌為翠綠色，熱帶念珠菌為鐵藍色；光滑念珠菌呈紫色等。對于其他酵母菌或不顯色菌群經(jīng)過純化后利用法國生物梅里埃API20CCAX鑒定卡進行病原菌鑒定[7]。④藥敏試驗。將待測菌群濃度調(diào)整為0.5麥氏濁度，克柔念珠菌再稀釋5倍。蘸取少許懸液，輕輕擠壓后，將其均勻涂抹在RPMI-1640平皿中，平皿直徑控制在9 cm，最后沿著平皿周邊圍繞兩圈，平皿放置在35℃開蓋倒扣中進行15 min干燥，待平板上的水分被瓊脂吸收后再次貼片，每個平皿貼4個藥敏，紙片距離控制在24 mm，放置在恒溫箱中進行18～24 h培養(yǎng)。參考廠家說明書對結(jié)果進行判定[8，9]。對于不同病原菌耐藥性以菌落顏色作為參考對菌類進行判定，采取ATN FUNGUS 3鑒定試劑盒進行相關鑒定試驗，并且遵從《酵母菌液基稀釋法抗真菌藥物敏感性參考性方案》使用ATN FUNGUS 3藥敏板進行藥敏試驗。

1.3 統(tǒng)計學方法

采用SPSS18.0軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以[n（%）]表示，行χ2檢驗，計量資料以（x±s）表示，行t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 340例患者病原菌檢測及構(gòu)成比情況

340例患者中共分離出340株病原菌，排在前三位的分別為白色念珠菌、光滑念珠菌及熱帶念珠菌，分別為245株、35株及29株，分別占72.06%、10.29%及8.53%，見表1。

表1 340例患者病原菌檢測及構(gòu)成比情況

2.2 不同病原菌耐藥性情況

不同的病原菌對不同抗生素的耐藥性不同，白色念珠菌最高耐藥藥物為5-氟胞嘧啶（26.53%），光滑念珠菌最高耐藥藥物為伊曲康唑（57.14%），熱帶念珠菌最高耐藥藥物為5-氟胞嘧啶（27.59%）；近平滑念珠菌最高耐藥藥物為伊曲康唑和5-氟胞嘧啶（12.50%）；克柔念珠菌最高耐藥藥物為氟康唑（100.0%），見表2。

2.3 340例患者治療效果及預后

340例患者經(jīng)病原菌鑒定及耐藥性分析后均選擇合適的抗生素進行治療，患者均取得預期治療效果?；颊咧委熀筮M行3個月隨訪，均未見復發(fā)，未見不良反應。

3 討論

假絲酵母菌是臨床上常見的致病菌，多分布在人體口腔、腸道及皮膚中[10]。有報道顯示[11]：在人的一生中，10%～20%非妊娠婦女及超過30.0%妊娠女性含有假絲酵母菌。當人體某一時間段免疫低下后，將會引起病原菌在陰道中增殖，分泌出多種侵襲性酶和毒素，增加陰道組織炎癥發(fā)生率[12]。本課題中，對患者陰道分泌物進行了提取培養(yǎng)并通過藥敏試驗對其耐藥性進行鑒別，結(jié)果顯示：340例患者中共分離出340株病原菌，排在前三位的分別為白色念珠菌、光滑念珠菌及熱帶念珠菌，分別為245株、35株及29株，分別占72.06%、10.29%及8.53%。由此看出：復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病患者中病原菌類型相對較多，且多為白色念珠菌。臨床上應該加強病原菌檢測，選擇敏感抗生素治療，使得患者的治療更具針對性。

目前，臨床上對于白色念珠菌主要以抗生素治療為主，藥物能有效的抑制病原菌增殖，從而能改善機體癥狀。但是，隨著抗生素的大量不合理使用，導致病原菌耐藥性呈現(xiàn)上升趨勢，使得許多抗生素難以達到預期的治療效果[13]。對于復發(fā)型外陰陰道假絲酵母菌病，傳統(tǒng)方法以直接涂片法為主，該方法雖然能滿足診斷需要，但是診斷過程中需要完成病原菌的鑒定，并且該診斷方法所需時間較長，難以滿足醫(yī)院需要。本課題中采用科瑪嘉顯色法在病原菌鑒定中得到應用，該方法對病原菌培養(yǎng)準確率得到進一步提高，尤其是對于混合感染區(qū)別能力更強[14]。本研究中，不同的病原菌對不同抗生素的耐藥性不同，白色念珠菌最高耐藥藥物為5-氟胞嘧啶（26.53%），光滑念珠菌最高耐藥藥物為伊曲康唑（57.14%），熱帶念珠菌最高耐藥藥物為5-氟胞嘧啶（27.59%）；近平滑念珠菌最高耐藥藥物為伊曲康唑和5-氟胞嘧啶（12.50%）；克柔念珠菌最高耐藥藥物為氟康唑（100.0%）。340例患者經(jīng)病原菌鑒定及耐藥性分析后均選擇合適的抗生素進行治療，患者均取得預期治療效果。因此，臨床上患者治療時必須加強患者病原菌監(jiān)測，善于根據(jù)監(jiān)測結(jié)果選擇敏感抗生素治療，提高臨床治療效果，促進患者早期恢復。治療時應該密切觀察患者病情變化情況，動態(tài)了解患者恢復情況，根據(jù)患者情況及時調(diào)整抗菌藥物類型或抗菌藥物級別，達到有效的抗菌效果[15]。同時，患者治療時必須規(guī)范化使用抗真菌藥物，常規(guī)開展真菌培養(yǎng)鑒定及藥敏試驗，必要時可以聯(lián)合用藥。在強化治療達到真菌學治愈后，應該給予鞏固至少半年，降低復發(fā)率。

綜上所述，對復發(fā)性外陰陰道假絲酵母菌病患者病菌進行分離鑒定能了解病原菌的耐藥性，并根據(jù)耐藥性情況選擇合適的抗菌藥物，提高臨床治療效果，促進患者早期恢復。

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（收稿日期：2016-09-16）