普通大薊馬對啶蟲脒室內(nèi)敏感毒力基線的建立及抗性監(jiān)測

孫靖雨+范詠梅+陳思誠+游佳+姜鈺婷

摘要：普通大薊馬[Megalurothrips usitatus （Bagnall）]是海南冬種豇豆[Vigna unguiculata （L.） Walp]的主要害蟲之一，是影響海南豇豆質(zhì)量安全的重要防治對象。旨在篩選敏感種群的基礎(chǔ)上，采用改進(jìn)的葉管藥膜法，多次測定啶蟲脒對室內(nèi)繼代飼養(yǎng)至49代的普通大薊馬種群的毒力，并比較室內(nèi)飼養(yǎng)種群與夏威夷種群、海南不同地區(qū)田間種群對啶蟲脒的敏感性，建立毒力基線并進(jìn)行抗性監(jiān)測，為該害蟲的防治提供理論依據(jù)。結(jié)果表明，夏威夷種群的致死中濃度（LC50）為300.660 mg/L，而室內(nèi)飼養(yǎng)的普通大薊馬種群在繼代飼養(yǎng)的過程中對啶蟲脒的敏感性有明顯提高，LC50從403.822 mg/L（第8代）降至255.678 mg/L（第49代），敏感性高于夏威夷種群，因此建立啶蟲脒對普通大薊馬的敏感毒力基線，LC50為255.678 mg/L，斜率為2.306。海南省三亞市崖城鎮(zhèn)、樂東縣黃流鎮(zhèn)、澄邁縣金江鎮(zhèn)田間種群的LC50分別為658.869、723.708、446.871 mg/L，與敏感毒力基線相比，抗性指數(shù)分別為2.577、2.831、1.748。本研究結(jié)果可為普通大薊馬的有效化學(xué)防治提供技術(shù)支撐。

關(guān)鍵詞：普通大薊馬；啶蟲脒；敏感種群；致死中濃度；敏感毒力基線；抗藥性

中圖分類號： S436.43；S433.89文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2017）07-0098-03

普通大薊馬嚴(yán)重危害豇豆[Vigna unguiculata（L.） Walp]幼苗植株生長，并在果實(shí)上形成黑褐色的斑點(diǎn)，降低豇豆的外觀品質(zhì)和商品價值[2-3]。普通大薊馬在非洲是為害當(dāng)?shù)囟箍浦参铮ㄓ绕涫囚梗┳钪匾霓r(nóng)業(yè)害蟲，據(jù)統(tǒng)計(jì)，普通大薊馬造成豇豆產(chǎn)量損失高達(dá)20%，嚴(yán)重時達(dá)到100%[4]。普通大薊馬在海南豇豆產(chǎn)業(yè)中，也是影響豇豆質(zhì)量安全的重要防治對象[2]。豇豆是海南冬季瓜菜的主要品種之一，由于價格穩(wěn)定、市場前景好，2014年種植面積已達(dá)20萬hm2，年產(chǎn)量達(dá)50萬t，產(chǎn)值近100億元[5]。為保障海南冬季瓜菜產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展，目前針對該害蟲主要的防治方法為化學(xué)防治，其中啶蟲脒是主要農(nóng)藥品種之一。

啶蟲脒（acetamiprid，簡稱ACE）是氯化煙酰亞胺類新型高效殺蟲劑，主要作用于昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)突觸后膜的煙堿型乙酰膽堿受體nAChR[6]，具有觸殺、胃毒和內(nèi)吸作用，被廣泛應(yīng)用防治為害蔬菜、果樹、茶葉的薊馬、蚜蟲、飛虱等[7]，并長期在海南冬季瓜菜生產(chǎn)中使用，同類農(nóng)藥中銷量最高[8]。隨著農(nóng)藥使用年限的延長，抗藥性問題也隨之加劇?？顾幮詥栴}的出現(xiàn)會導(dǎo)致常用殺蟲劑防效下降，用量增加，不僅不能有效防治薊馬，還會引發(fā)農(nóng)藥殘留超標(biāo)，環(huán)境污染等一系列問題[9]。2016年1月，農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測試中心（鄭州）檢測市場銷售的豇豆（進(jìn)貨于海南省）啶蟲脒超標(biāo)（樣品編號為2016C1-030，啶蟲脒實(shí)測值為2.16 mg/kg，限量值為1.0 mg/kg，超標(biāo)率116%），這是防效下降、用量增加的實(shí)例[10]。

針對防效下降的現(xiàn)象，考慮田間害蟲種群是否已產(chǎn)生抗藥性，有必要對害蟲進(jìn)行抗藥性監(jiān)測，抗藥性監(jiān)測的前提是建立敏感種群的毒力基線[11]。本研究對采自田間的普通大薊馬種群進(jìn)行室內(nèi)連續(xù)封閉繁殖與飼養(yǎng)，并在不同的飼養(yǎng)時間（每半年）通過改進(jìn)的葉管藥膜法[12]對其敏感性進(jìn)行測定，建立啶蟲脒對普通大薊馬的敏感毒力基線，并與海南不同地區(qū)的田間種群監(jiān)測結(jié)果進(jìn)行對比，了解海南不同地區(qū)普通大薊馬對啶蟲脒的抗性情況，為該地區(qū)普通大薊馬的防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試?yán)ハx普通大薊馬夏威夷種群由美國夏威夷大學(xué)的李慶孝教授贈予，該種群采自安全無公害的有機(jī)農(nóng)田，從未接觸過任何農(nóng)藥，并在無藥的室內(nèi)環(huán)境中飼養(yǎng)多年，對許多常用藥劑的敏感性都非常高。

普通大薊馬室內(nèi)飼養(yǎng)種群于2014年3月12日采自海南大學(xué)實(shí)驗(yàn)基地未經(jīng)用藥的豇豆田，在本試驗(yàn)室不接觸任何化學(xué)藥劑下連續(xù)封閉飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度為（26±1） ℃。根據(jù)飼養(yǎng)記錄，在2015年12月20日最后一次測定時，室內(nèi)種群已繁殖至49代。

于2015年4月分別從海南省三亞市崖城鎮(zhèn)（18°21.331′ N、109°10.578′ E）、樂東縣黃流鎮(zhèn)（18°33.625′ N、108°45.803′ E）、澄邁縣金江鎮(zhèn)（19°42.975′ N、109°58.389′ E）的豇豆田采集3個田間種群。在田間采集普通大薊馬成蟲在室內(nèi)培養(yǎng)獲得第1代2齡若蟲作為試驗(yàn)用蟲。

1.1.2供試藥劑98.2%啶蟲脒原藥由江蘇省常熟市恒榮商貿(mào)有限公司提供。

1.2方法

1.2.1生物測定方法采用王澤華等報(bào)道的葉管藥膜法[12]，并在此基礎(chǔ)上加以改進(jìn)。將葉片換為豆餅[豆餅厚度為（0.3±0.1） cm，直徑為（0.6±0.1） cm，兩端平整，沒有豆粒孔]，設(shè)800、400、200、100、50 mg/L等5個濃度，并設(shè)蒸餾水和溶劑作為對照，每組設(shè)4個重復(fù)。

將藥液注滿5 mL離心管，蓋上管蓋，靜置處理2 h之后將藥液倒掉，離心管自然晾干，待用。將豆餅浸泡在相應(yīng)處理的藥液中30 s，取出后自然晾干，待用。用細(xì)毛筆輕輕地將薊馬移入藥膜管內(nèi)（每管試蟲數(shù)為30頭），放入處理過的豆餅，蓋上管蓋。將帶蟲藥管置于溫度條件（26±1） ℃、光―暗周期為12 h―12 h的恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)飼養(yǎng)，24 h后檢查死亡率。以小毛筆刷輕觸蟲體無任何反應(yīng)，視為試蟲死亡。試驗(yàn)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)為對照組死亡率小于10%為有效試驗(yàn)。

1.2.2室內(nèi)種群飼養(yǎng)方法將普通大薊馬用300 mL組培瓶分裝。瓶內(nèi)清潔干燥，底部墊上干凈紙巾，放5～6段（5±0.5） cm 的新鮮豇豆（試驗(yàn)基地種植，未經(jīng)農(nóng)藥處理），用350目的紗布封口（防止薊馬逃逸并保證瓶內(nèi)空氣流通）。每1～2 d添加適量新鮮豇豆，發(fā)現(xiàn)瓶內(nèi)豇豆腐壞、干癟或是紙巾過于潮濕發(fā)霉時，及時更換；每5 d定期記錄繁殖情況及代數(shù)，視瓶內(nèi)普通大薊馬的數(shù)量，及時擴(kuò)大培養(yǎng)。

1.2.3敏感毒力基線建立原則當(dāng)種群敏感性基本穩(wěn)定（LC50的數(shù)值上下波動較小），毒力回歸線斜率大于2[13]，即認(rèn)為該回歸線為敏感毒力基線。

1.2.4數(shù)據(jù)處理與分析以溶劑對照組的死亡率對藥劑處理組的死亡率進(jìn)行校正，按照Abbort校正公式：

利用SPSS 17.0軟件處理數(shù)據(jù)，統(tǒng)計(jì)毒力回歸方程中的斜率及其標(biāo)準(zhǔn)差、卡方值χ2、相關(guān)系數(shù)r2，LC50值及95%置信區(qū)間。

2結(jié)果與分析

2.1普通大薊馬對啶蟲脒的敏感毒力基線的建立

2.1.1普通大薊馬室內(nèi)飼養(yǎng)種群的篩選結(jié)果結(jié)果表明，通過長期連續(xù)封閉的室內(nèi)飼養(yǎng)，普通大薊馬對啶蟲脒的敏感性明顯提高，2014年6—12月（時間間隔約為半年），LC50值從403.822 mg/L下降為367.649 mg/L，下降幅度為9.0%；2014年12月至2015年5月，LC50值下降到 268.905 mg/L，下降幅度為26.9%；從2015年5—12月，LC50值下降到255.678 mg/L，下降幅度為4.9%。最后半年，普通大薊馬對啶蟲脒的LC50下降幅度已小于5%，敏感性基本穩(wěn)定（表1）。

2.1.2啶蟲脒對普通大薊馬夏威夷種群的毒力測定結(jié)果普通大薊馬的夏威夷敏感種群引進(jìn)實(shí)驗(yàn)室之后，連續(xù)3次經(jīng)毒力測定試驗(yàn)，LC50值分別為302.132、288.569、311.279 mg/L（表2），均大于2015年12月20日室內(nèi)飼養(yǎng)種群的毒力測定結(jié)果。

根據(jù)表1和表2可知，在斜率都大于2的情況下，分別取其最低LC50值進(jìn)行比較，室內(nèi)飼養(yǎng)種群對啶蟲脒的LC50值明顯低于夏威夷種群，可見室內(nèi)飼養(yǎng)種群要比夏威夷種群更為敏感。按照敏感毒力基線建立原則，本研究確定了啶蟲脒對普通大薊馬的毒力敏感基線，LC50值為255.678 mg/L（斜率為2.306）。

2.2普通大薊馬對啶蟲脒的抗藥性監(jiān)測

結(jié)果表明，采自三亞市崖城鎮(zhèn)、樂東縣黃流鎮(zhèn)和澄邁縣金江鎮(zhèn)的田間種群的LC50值分別為658.869、723.708、446.871 mg/L， 與室內(nèi)敏感種群（LC50值=255.678 mg/L）相比，抗性指數(shù)分別為2.577、2.831、1.748，雖未達(dá)到低水平抗性，但田間種群敏感性已有明顯下降的趨勢。

3結(jié)論與討論

薊馬是重要的農(nóng)業(yè)害蟲，國內(nèi)外對薊馬的研究主要有西花薊馬[Frankliniella occidentalis （Pergande）]、香蕉花薊馬[Thrips hamaiiensis （Morgan）]等[14-15]，關(guān)于普通大薊馬的研究僅我國與非洲有所報(bào)道，但近年來，普通大薊馬在海南豇豆上分布廣泛，有關(guān)普通大薊馬的報(bào)道也逐漸增多，研究主要集中于田間分布、生物學(xué)特性、室內(nèi)外藥劑篩選、預(yù)測方法和綠色防控技術(shù)等方面[2-3，5，16-18]。但是，有關(guān)普通大薊馬敏感毒力基線及其抗藥性發(fā)展情況還未見報(bào)道。本研究對普通大薊馬進(jìn)行了1.5年的室內(nèi)封閉飼養(yǎng)，至49代篩選出普通大薊馬的敏感種群，建立普通大薊馬對啶蟲脒的敏感毒力基線，LC50值為255.678 mg/L（斜率為2.306），并對海南幾個豇豆主產(chǎn)區(qū)的田間種群進(jìn)行抗藥性監(jiān)測。本研究選取的3個田間種群，分別來自海南三大優(yōu)勢區(qū)域的豇豆主要產(chǎn)地（東南部的三亞崖城、西部的樂東黃流、北部的澄邁金江），豇豆產(chǎn)量高、用藥量大[19]，極具代表性。但結(jié)果表明，啶蟲脒在室內(nèi)毒力測定中藥效一般，并且普通大薊馬在田間隱蔽性很強(qiáng)[20]，田間防治比較困難。根據(jù)筆者在海南全島連續(xù)2年的田間調(diào)查結(jié)果分析，由于藥劑價格低廉，各地均有不少農(nóng)戶大量混合使用啶蟲脒與吡蟲啉對薊馬進(jìn)行防治，導(dǎo)致普通大薊馬對啶蟲脒的抗藥性逐漸增加。因此，筆者建議在田間不要持續(xù)大量使用啶蟲脒，應(yīng)選擇其他有效殺蟲劑交替使用，以減緩抗藥性問題，安全用藥。研究普通大薊馬的抗藥性問題對田間施藥、農(nóng)藥殘留以及環(huán)境安全有著重大意義，筆者將繼續(xù)對普通大薊馬對啶蟲脒及其他使用量較大的藥劑的抗藥性進(jìn)行監(jiān)測，以便更好地指導(dǎo)海南豇豆的田間用藥，避免“豇豆事件”的再次發(fā)生。

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