B族鏈球菌核酸檢測在產(chǎn)前篩查中可行性研究

張龍繪+李利+劉睿

[摘要] 目的 探討B(tài)族鏈球菌核酸檢測在產(chǎn)前篩查中的可行性。方法 將2012年4月～2016年8月期間于我院產(chǎn)檢的1000例孕婦作為研究對象，于35～37孕周期間采集孕婦肛周及陰道分泌物后做PCR檢測與細(xì)菌培養(yǎng)，分別比較兩種方法對B族鏈球菌的陽性檢出率，隨后分別抽取B族鏈球菌陽性與陰性各100例孕婦，比較兩組的分娩方式、新生兒并發(fā)癥、產(chǎn)婦并發(fā)癥發(fā)生情況。結(jié)果 PCR檢測方法的陽性檢出率為8%（80/1000），明顯高于細(xì)菌培養(yǎng)檢測方法的陽性檢出率4%（40/1000）；陽性組產(chǎn)婦產(chǎn)后出血、早產(chǎn)、胎膜早破及新生兒窒息、敗血癥、感染等并發(fā)癥發(fā)生率均高于陰性組（P<0.05）。結(jié)論 應(yīng)用PCR檢測方法能夠提高B族鏈球菌的陽性檢出率，盡早對B族鏈球菌為陽性的孕婦采取恰當(dāng)?shù)母深A(yù)措施，可降低母嬰并發(fā)癥發(fā)生率，保證母嬰健康平安。

[關(guān)鍵詞] B族鏈球菌；產(chǎn)前篩查；可行性；研究

[中圖分類號] R715.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 2095-0616（2017）06-64-03

[Abstract] Objective To explore the feasibility of B-streptococcal nucleic acid detection in prenatal screening. Methods 1000 pregnant women tested in our hospital from April 2012 to August 2016 were selected as the subjects. After 35-37 gestational weeks， the perianal and vaginal secretions were collected for PCR and bacterial culture. The positive rate of B-type streptococcus was determined by the two methods. Then， 100 pregnant women with positive and negative B streptococcus were randomly selected. The delivery mode， incidence of neonatal complications and maternal complications were compared between the two groups. Results The positive detection rate of PCR was 8%（80/1000）， which was significantly higher than that of bacterial culture test （4%， 40/1000）. The positive group had postpartum hemorrhage， premature labor（P<0.05）. The incidence of neonatal asphyxia， sepsis and infection is higher than that of negative group（P<0.05）. Conclusion PCR detection method can improve the positive rate of B streptococcus， as soon as possible on the B group of streptococcus positive pregnant women to take appropriate intervention measures. It can reduce the incidence of maternal and child complications， to ensure maternal and child health and safety.

[Key words] Group B Streptococcus； Prenatal screening； Feasibility； Research

分娩過程中，引起產(chǎn)婦與新生兒一并出現(xiàn)感染的病菌主要是B族鏈球菌（GBS）[1]，它屬于革蘭陽性菌，已有研究表明[2]，B族鏈球菌呈陽性和母嬰結(jié)局、胎膜早破等現(xiàn)象有密切相關(guān)，檢測孕婦B族鏈球菌是保證母嬰健康、安全的重要手段[3]。早在20世紀(jì)90年代，CDC便制訂了B族鏈球菌的檢測、篩查及處理指南[4]，AAP、ACOG提倡懷孕35～37周的孕婦進(jìn)行B族鏈球菌的產(chǎn)前篩查[5]，并對陽性者及早干預(yù)，把產(chǎn)婦的產(chǎn)褥病發(fā)病率及新生兒敗血癥感染率控制在最低范圍內(nèi)[6]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本研究對象為2012年4月～2016年8月期間于我院產(chǎn)檢的1000例孕婦，納入標(biāo)準(zhǔn)：單胎妊娠、無流產(chǎn)、死胎病例，對本研究內(nèi)容知曉且自愿參與者。排除兩周內(nèi)有夫妻生活者、使用抗生素者。孕婦孕周35～37周，年齡24～40歲，平均（29.3±3.2）歲；初產(chǎn)婦832例、經(jīng)產(chǎn)婦168例。1000名產(chǎn)婦全部接受B族鏈球菌感染的產(chǎn)前篩查，將檢測出的B族鏈球菌呈陽性的100例孕婦作為陽性組，再隨機(jī)抽取100例B組鏈球菌為陰性的孕婦作為陰性組。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

1.2 方法

標(biāo)本采集：將孕婦外陰分泌物擦拭干凈，在陰道內(nèi)小心插入兩根拭子，旋轉(zhuǎn)一周采集位于陰道1/3處的分泌物，之后在肛門內(nèi)插入拭子，于肛門括約肌上緣2～3cm處旋轉(zhuǎn)一周采取直腸標(biāo)本，標(biāo)本采集完成后分別進(jìn)行PCR檢測與細(xì)菌培養(yǎng)。

PCR檢測：使用Vortex振蕩器將帶有拭子的標(biāo)本運(yùn)輸液管快速震蕩均勻，之后從均勻的運(yùn)輸液中提取懸濁液，將其置于1.5mL的離心管內(nèi)，13000轉(zhuǎn)離心5min，棄上清后在離心管內(nèi)倒入1mL拭子浸泡液，混合均勻后再次13 000轉(zhuǎn)離心5min，棄上清后用50?L的拭子浸泡液重懸。將一管提取固形物置于菌液中，采用95℃干浴2min，之后高速震蕩5min后瞬時離心；加入10?L內(nèi)參照，95℃干浴2min后立刻冰浴備用。

細(xì)菌培養(yǎng)：在5%羊血培養(yǎng)基里放入標(biāo)本，溫度保持在35℃，培養(yǎng)時間為18h～1d，把可疑的圓形、灰白色的細(xì)菌取出后做接種培養(yǎng)，培養(yǎng)時間16h左右，應(yīng)用細(xì)菌鑒定儀鑒別細(xì)菌的種類。

1.3 觀察評定標(biāo)準(zhǔn)

比較PCR檢測與細(xì)菌培養(yǎng)對B族鏈球菌的陽性檢出率[7]；比較陽性組孕婦、陰性組孕婦的母嬰并發(fā)癥、分娩方式[8]。GBS陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：FAM熒光信號有明顯S形擴(kuò)增曲線，CT值<33，Texas Red（內(nèi)參）CT值<40，且本批實(shí)驗(yàn)陽參、陰參的檢測結(jié)果與預(yù)期相符[9]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本研究應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量資料以（）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，組間比較進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PCR檢測、細(xì)菌培養(yǎng)對GBS的陽性檢出率比較

PCR檢測法，檢出GBS陽性80例、GBS陰性920例，檢出率8%；細(xì)菌培養(yǎng)法，檢出GBS陽性40例、GBS陰性960例，檢出率4%（P<0.05），見表1。

2.2 GBS陽性組與陰性組孕婦的分娩方式比較

GBS陰性組剖宮產(chǎn)20例、順產(chǎn)72例、產(chǎn)鉗助產(chǎn)8例；GBS陰性組剖宮產(chǎn)18例、順產(chǎn)73例、產(chǎn)鉗助產(chǎn)80例（P>0.05），見表2。

2.3 GBS陽性組與陰性組母嬰并發(fā)癥發(fā)生率比較

GBS陽性組孕婦產(chǎn)后出血20例、早產(chǎn)17例、胎膜早破15例；GBS陰性組孕婦產(chǎn)后出血7例、早產(chǎn)6例、胎膜早破8例（P<0.05）；GBS陽性組新生兒感染16例、窒息8例、敗血癥4例，GBS陰性組新生兒感染6例、窒息2例、敗血癥1例，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

3 討論

檢測B族鏈球菌通常有兩種方法，第一種是常規(guī)的細(xì)菌培養(yǎng)孕婦的直腸和陰道拭子，但越來越多的學(xué)者發(fā)現(xiàn)細(xì)菌培養(yǎng)極易出現(xiàn)GBS假陰性[10]，通過培養(yǎng)基來培養(yǎng)篩查細(xì)菌是婦產(chǎn)科協(xié)會推薦的方法，也是目前檢測B族鏈球菌感染的常規(guī)手段，但細(xì)菌培養(yǎng)需要的時間比較長，要鑒定出陽性至少需要2d，如果鑒定陰性至少需要3d，而且細(xì)菌培養(yǎng)的免疫學(xué)敏感性會受到細(xì)菌量的影響[11]，如果細(xì)菌量不足就很難檢測出GBS陽性，因此臨床檢測中漏診現(xiàn)象時有發(fā)生。對產(chǎn)婦采取GBS檢測，鑒于對B族鏈球菌攜帶的間歇性、暫時性特點(diǎn)的考慮，妊娠中期即使B族鏈球菌的檢測呈陰性，那么到了妊娠晚期或者分娩期，孕婦仍有15%～20%的幾率是B族鏈球菌呈陽性[12]。所以B族鏈球菌感染的檢測和篩查最好在孕婦懷孕35～37周進(jìn)行，由于常規(guī)的細(xì)菌培養(yǎng)檢測漏診情況較多，孕婦又面臨分娩，所以臨床需要一種方便、準(zhǔn)確、耗時短、靈敏性高的B族鏈球菌檢測方法。歷經(jīng)多年的改進(jìn)，PCR核酸擴(kuò)增檢測技術(shù)已經(jīng)從最初的定性診斷過度到現(xiàn)在的半定量、定量診斷，伴隨核酸熒光標(biāo)記技術(shù)不斷進(jìn)步，如今在B族鏈球菌的臨床診斷中通常都會借助熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行輔助檢測[15]。有研究表明[16]：PCR在懷孕37周后的孕晚期B族鏈球菌的檢測中極為關(guān)鍵，該技術(shù)有安全、高效、準(zhǔn)確等諸多優(yōu)點(diǎn)，核酸提取后僅需要2～4h就能得到檢測結(jié)果，真正意義上實(shí)現(xiàn)了B族鏈球菌感染的高效篩查。本研究中，細(xì)菌培養(yǎng)檢測出的B族鏈球菌陽性率為4%，而應(yīng)用PCR技術(shù)檢測出的B族鏈球菌陽性率則為8%，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

GBS感染極易導(dǎo)致產(chǎn)婦出現(xiàn)早產(chǎn)、羊膜腔感染、產(chǎn)褥感染、胎膜早破等并發(fā)癥，還能讓新生兒出現(xiàn)敗血癥、窒息、感染等問題。GBS對絨毛膜的穿透力和吸入能力非常強(qiáng)，已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)界公認(rèn)的導(dǎo)致羊膜腔感染及胎膜早破的致病菌，孕婦出現(xiàn)這些并發(fā)癥之后，極易引發(fā)子宮腔感染，促進(jìn)子宮收縮，繼而導(dǎo)致晚期流產(chǎn)或早產(chǎn)等問題。GBS感染后，孕婦從下消化道開始、通過泌尿道、陰道和宮頸上行對胎膜造成感染，細(xì)菌產(chǎn)生的蛋白水解酶、炎癥細(xì)胞的吞噬會讓胎膜張力降低，隨之造成胎膜破裂。與此同時，B族鏈球菌感染還會導(dǎo)致絨毛膜羊膜炎，引起胎膜絨毛水腫，最終造成胎膜早破。本研究中，GBS陽性組孕婦早產(chǎn)、產(chǎn)后出血及胎膜早破的發(fā)生率明顯高于GBS陰性組（P<0.05）。綜上所述，應(yīng)用PCR檢測方法能夠提高B族鏈球菌的陽性檢出率，盡早對B族鏈球菌為陽性的孕婦采取恰當(dāng)?shù)母深A(yù)措施，可降低母嬰并發(fā)癥發(fā)生率，保證母嬰健康平安。

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（收稿日期：2017-01-18）