危重癥手足口病患兒108例免疫功能分析*

鄧慧玲，吳曉康，張玉鳳，馬超鋒，余鵬博，陳海龍

1.西安市兒童醫(yī)院感染二科(西安710003)，2.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院(西安710004)， 3.西安市疾病預(yù)防控制中心(西安710054)，4.陜西省疾病預(yù)防控制中心(西安710054)

·臨床研究·

危重癥手足口病患兒108例免疫功能分析*

鄧慧玲1，吳曉康2，張玉鳳1，馬超鋒3，余鵬博4，陳海龍3

1.西安市兒童醫(yī)院感染二科(西安710003)，2.西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院(西安710004)， 3.西安市疾病預(yù)防控制中心(西安710054)，4.陜西省疾病預(yù)防控制中心(西安710054)

目的：探討手足口病危重癥患兒的免疫功能變化及免疫學(xué)發(fā)病機制。方法：將220例經(jīng)臨床和實驗室確診為EV71感染的手足口病患兒根據(jù)病情分為普通型組(112 例)和危重癥組(108例)，以同期門診健康體檢兒50例作為正常對照組，采用流式細胞術(shù)檢測各組患兒血液中T淋巴細胞(CD3+)、B淋巴細胞(CD19+)和NK(CD16+CD56+)細胞百分比的變化。結(jié)果：手足口病患兒尤其危重癥組血液中T淋巴細胞(CD3+)和NK(CD16+CD56+)細胞百分比較正常對照組顯著下降(P<0.05)，B淋巴細胞(CD19+)百分比較正常對照組顯著升高(P<0.05)；普通型和危重癥患兒恢復(fù)期T淋巴細胞(CD3+)較急性期顯著增加(P<0.05)，B淋巴細胞(CD19+)和急性期相比無顯著差異(P>0.05)，而NK(CD16+CD56+)細胞卻顯著降低(P<0.05)。結(jié)論：手足口病患兒存在細胞免疫和體液免疫功能紊亂，對手足口病患兒免疫功能了解有助于判斷病情、指導(dǎo)治療。

手足口病(Hand, Foot and Mouth Disease, HFMD)是由腸道病毒引起的常見傳染病，多發(fā)生于5歲以下兒童，以發(fā)熱，手、足、口腔等部位的皰疹或潰瘍?yōu)橹饕憩F(xiàn)，少數(shù)患兒可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎，急性馳緩性麻痹等并發(fā)癥，個別重癥患兒病情發(fā)展快，可導(dǎo)致死亡。引發(fā)手足口病的腸道病毒有20多種，柯薩奇病毒A組的16、4、5、9、10型，B組的2、5型，以及腸道病毒71型，均為手足口病較常見的病原體，其中以柯薩奇病毒A16型(Coxsackievirus A16, CoxA16)和腸道病毒71型(Enterovirus 71, EV71)最為常見[1]。本研究對不同類型患兒(危重癥、普通型)及不同病程(急性期、恢復(fù)期)的手足口病患兒進行了細胞及體液免疫功能分析，以期能為研究該疾病的發(fā)病機制和治療提供參考。

資料與方法

1 一般資料 選取2014年1月至2015 年12月在西安市兒童醫(yī)院住院的HFMD 患兒220例，均符合衛(wèi)生部公布的《手足口病診療指南(2010年版)》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且經(jīng)西安市疾病預(yù)防控制中心病原核酸PCR檢測結(jié)果均為EV71陽性感染者。220例手足口病患兒均納入病例組，且經(jīng)治療后均臨床治愈出院，其中普通型組患兒112例(男62例，女50例)，平均年齡(2.21±1.46)歲；危重癥組患兒108例(男58例，女50例)，平均年齡(2.15±1.61)歲。正常對照組50例(男27例，女23例)，平均年齡(2.32±1.47)歲，為隨機選取同期健康體檢的正常兒童。本研究得到患者及家屬的知情同意，符合醫(yī)學(xué)倫理標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)，三組患兒在性別、年齡等方面比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2 研究方法 病例組患兒于入院24 h內(nèi)及恢復(fù)期(發(fā)病2～4周內(nèi))采靜脈血2 ml，對照組兒童當(dāng)日體檢時抽取靜脈血2 ml，應(yīng)用Beckman Coulter XL流式細胞儀檢測T淋巴細胞(CD3+)、NK細胞(CD16+CD56+)和B淋巴細胞(CD19+)百分比。新鮮全血100 μl用EDTA-K2抗凝，試管分別加相應(yīng)單克隆抗體(CD3+-FITC/CD16+CD56+-PE/CD19+-PerCP Cy5.5)20μl，室溫暗處放置15～20 min，用OptiLyse C溶解紅細胞10 min，加PBS緩沖液500 μl洗滌，1500 r/min離心5 min，棄上清，加500 μl PBS緩沖液，制成細胞懸液。流式細胞儀分析10000個以上細胞，所用儀器及試劑均購自美國Beckman Coulter公司。

結(jié) 果

1 各組患兒急性期淋巴細胞亞群水平比較 見表1。三組患兒急性期T淋巴細胞(CD3+)、NK細胞(CD16+CD56+)、B淋巴細胞(CD19+)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其中T淋巴細胞(CD3+)、NK細胞(CD16+CD56+)在危重癥組和普通型組均較正常對照組降低(P<0.05)，且危重癥組較普通型組降低更顯著(P<0.05)；B淋巴細胞(CD19+)在危重癥組和普通型組均較正常對照組升高(P<0.05)，且危重癥組較普通型組升高更顯著(P<0.05)。

表1 各組患兒急性期淋巴細胞亞群水平比較

注：與正常對照組比較，*P<0.05；與普通型組比較，△P<0.05

2 不同時期淋巴細胞亞群水平比較 見表2。普通型和危重癥患兒T淋巴細胞(CD3+)、NK細胞(CD16+CD56+)急性期、恢復(fù)期百分比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其中恢復(fù)期T淋巴細胞(CD3+)百分比較急性期顯著增加(P<0.05)，NK細胞(CD16+CD56+)卻顯著降低(P<0.05)，而普通型和危重癥患兒急性期、恢復(fù)期B淋巴細胞(CD19+)百分比無顯著差異(P>0.05)。

表2 急性期與恢復(fù)期淋巴細胞亞群水平比較(%)

注：與急性期比較，*P<0.05

討 論

手足口病是近年來高發(fā)于嬰幼兒的一種常見傳染病，大多數(shù)患兒癥狀輕微，以發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要特征，少數(shù)患兒可并發(fā)無菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、心肌炎等，個別重癥患兒病情進展快，易發(fā)生死亡。引起手足口病的腸道病毒傳染性強，易引起暴發(fā)或流行，其中以EV71感染引起重癥病例的比例較大[2]。

機體的抗感染能力與免疫狀態(tài)密切相關(guān)，免疫功能降低或紊亂是患各種感染性疾病的重要原因[3]。手足口病的發(fā)生、轉(zhuǎn)歸和預(yù)后與機體免疫功能狀態(tài)緊密相關(guān)。本團隊前期研究發(fā)現(xiàn)手足口病尤重型患兒存在較明顯的細胞免疫功能低下，在抗感染治療的同時，應(yīng)注意免疫調(diào)節(jié)治療[4]。在臨床治療中應(yīng)用具有免疫調(diào)節(jié)作用的藥物可有效縮短熱退時間，縮短手足皮疹消退時間及口腔潰瘍愈合時間，提高臨床藥物的療效及患者治愈率，減輕患兒痛苦[5]。有研究報道EV71感染可致細胞免疫功能紊亂及細胞因子過度產(chǎn)生[6]。EV71感染患兒機體免疫功能隨病情程度而變化，輕癥患者處于全身炎癥反應(yīng)狀態(tài)，重癥或危重癥病例處于代償性炎癥反應(yīng)或混合性拮抗反應(yīng)狀態(tài)，外周血T淋巴細胞、NK細胞逐漸降低[6]。張克昌等[7]對手足口病患兒淋巴細胞亞群及細胞因子濃度的研究發(fā)現(xiàn)手足口病患兒細胞免疫和體液免疫功能存在顯著變化，其中重癥患兒外周血T淋巴細胞含量明顯低于輕癥患兒及正常兒童，兩組患兒NK細胞無顯著差異，但重癥患兒治療后NK細胞卻下降，兩組B淋巴細胞無顯著差異。梁小娟等[8]檢測手足口病患兒T淋巴細胞、B淋巴細胞和NK細胞表明，CD3+、CD3+CD4+以及CD3-CD16+CD56+淋巴細胞亞群百分比均較對照組下降，且重癥患兒低于普通患兒，而 CD3-CD19+和CD19+CD23+淋巴細胞亞群百分比均較對照組升高。付建軍等[9]對EV71型手足口病患兒免疫功能分析發(fā)現(xiàn)重癥手足口病患兒細胞免疫功能低于正常兒童，而NK細胞無顯著差異。

本研究結(jié)果與已報道研究有相似之處，HFMD患兒細胞免疫功能降低，而體液免疫水平有增強的趨勢，其中危重癥組患兒細胞免疫降低和體液免疫水平增高更加顯著。文獻報道[8]，對于病毒感染，尤其是腸道病毒感染，參與防御的主要是T淋巴細胞或是NK細胞，在病毒入侵機體時，首先參與應(yīng)答的是NK 細胞，NK 細胞作為固有免疫應(yīng)答細胞，無需抗原致敏，就可以直接殺傷病毒感染的靶細胞，是機體防御病毒感染的第一道防線。NK細胞活化后，通過分泌(γ干擾素)IFN-γ、(白細胞介素-2)IL-2、(腫瘤壞死因子)TNF等細胞因子，誘導(dǎo)Th1型免疫反應(yīng)，上調(diào)Th1/Th2表達，從而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用。而T細胞可以釋放多種細胞因子，參與機體免疫應(yīng)答，在機體抗感染包括抗病毒感染中發(fā)揮重要作用。機體抗病毒能力降低、體液免疫水平增高造成炎癥反應(yīng)，有可能是疾病發(fā)生的重要機制。隨著疾病的恢復(fù)，細胞免疫功能水平有所改善和提高，驗證了手足口病的發(fā)生發(fā)展可能與機體細胞免疫功能具有密切關(guān)系，而恢復(fù)期NK細胞降低有可能免疫過度，造成NK細胞功能的損傷短期內(nèi)無法修復(fù)。

[1] 趙成松,趙順英.手足口病的流行概況和應(yīng)對策略[J].中國實用兒科雜志，2009，24(6):419-421.

[2] 劉永梅,劉 芳,曹 明.手足口病171例病原學(xué)與臨床特點分析[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志，2016,45(3):347-347,373.

[3] 程小麗,陳 葳,楊玉琮,等.支氣管肺炎患兒機體免疫功能變化的分析[J].免疫學(xué)雜志，2012,28(6):506-509.

[4] 鄧慧玲,張玉鳳,符 佳,等.手足口病患兒機體免疫功能變化及細胞因子水平的相關(guān)研究[J].醫(yī)學(xué)臨床研究,2015,32(2):209-211,214.

[5] 張玉鳳,鄧慧玲,符 佳,等.喜炎平與雙金口服液配伍治療小兒手足口病200例對照觀察[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2016,45(5):598-600.

[6] 蔡莉芬,孫梅花,王立靜,等.EV71感染手足口病患兒免疫功能研究及其臨床意義[J].河北醫(yī)藥,2011,33(7):1055-1057.

[7] 張克昌,曹明杰,李維春,等.手足口病患兒體內(nèi)淋巴細胞亞群和細胞因子水平變化及意義[J].山東醫(yī)藥,2013,53(7):19-22.

[8] 梁小娟,王 艷.喜炎平注射液治療小兒手足口病38例[J].陜西中醫(yī)，2014,35(3)：285-286.

[9] 付建軍,王 燁,王巧俠,等.西安地區(qū)腸道病毒71型手足口病患兒細胞免疫功能的臨床研究[J].陜西醫(yī)學(xué)雜志,2014,43(9):1135-1137.

(收稿：2016-05-20)

Analysis on immunologic function of 108 cases of children with critical hand, foot and mouth disease

Deng Huiling, Wu Xiaokang, Zhang Yufeng, et al.

Second Department of Infection, Xi’an Children’s Hospital (Xi’an 710003)

Objective: To investigate immunologic functional status and immunological pathogenesis of patients with critical hand, foot and mouth disease. Methods: 220 children with hand, foot and mouth disease were collected and confirmed as EV71positive through clinical and laboratory diagnosis. According to the patient's condition, samples were divided into normal group (112 cases) and critical group (108 cases). At the same time, another 50 healthy children were recruited as controls. The levels of T cell subgroups(CD3+, CD19+and CD16+CD56+)in the blood of children were detected by flow cytometry. Results: The percentages of T lymphocytes (CD3+) and NK cells (CD16+CD56+) in the blood decreased in HFMD patients versus those in controls(P<0.05), and B lymphocyte (CD19+) was just the opposite (P<0.05), especially in critical cases. In recovery stage, the percentages of T lymphocytes (CD3+) in the blood increased significantly compared to acute stage(P<0.05)，and no significant difference in the percentages of B lymphocytes (CD19+), while the percentages of NK cells (CD16+CD56+) were dramatically decreased(P<0.05). Conclusion: Dysfunction of cellular immunity and humoral immunity occur to the patients with hand, foot and mouth disease. To know more about immunity of children with hand, foot and mouth disease is beneficial to judge the condition of disease and guide the therapy.

Hand, foot and mouth disease/blood T-lymphocytes/metabolism B-lymphocyte/ metabolism Critical disease Children

*陜西省科學(xué)技術(shù)研究發(fā)展項目(2011K12-82)

手足口病/血液 T淋巴細胞/代謝 B淋巴細胞/代謝 危重病 兒童

R725.1

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2017.05.004

陜西省科技統(tǒng)籌重點產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新鏈工程計劃項目(2016KTZDSF02-04)

西安市科學(xué)技術(shù)局醫(yī)療衛(wèi)生研究項目(2016052SF/YX08)