• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    秋水仙素浸泡法對(duì)黑果腺肋花楸多倍體的誘導(dǎo)及初步鑒定

    2017-05-17 06:36:22李建勛吳榮哲
    關(guān)鍵詞:腺肋秋水仙素多倍體

    李建勛, 巴 蕾, 于 歡, 于 敏, 劉 冰, 吳榮哲

    (延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院,吉林 延吉 133002)

    秋水仙素浸泡法對(duì)黑果腺肋花楸多倍體的誘導(dǎo)及初步鑒定

    李建勛, 巴 蕾, 于 歡, 于 敏, 劉 冰, 吳榮哲*

    (延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院,吉林 延吉 133002)

    以黑果腺肋花楸組培苗莖尖、葉片和繼代愈傷組織為材料,探索秋水仙素不同濃度和不同處理時(shí)間對(duì)不同外植體誘導(dǎo)的愈傷組織的存活率、再生芽數(shù)、增殖系數(shù)和多倍體發(fā)生的影響;并對(duì)秋水仙素處理后不同外植體誘導(dǎo)產(chǎn)生的再生植株,經(jīng)3次繼代培養(yǎng)后生長(zhǎng)30 d的植株的染色體倍性進(jìn)行鏡檢。結(jié)果表明:不同外植體的存活率和出芽率隨秋水仙素濃度的增高和處理時(shí)間延長(zhǎng)而降低;其中,黑果腺肋花楸愈傷組織的存活率高于莖尖和葉片。經(jīng)秋水仙素處理后,3種外植體均能誘導(dǎo)多倍體發(fā)生;處理濃度和時(shí)間的增加有利于提高染色體加倍率,但外植體的死亡率隨之增加。當(dāng)愈傷組織在秋水仙素濃度為2 000 mg/L,處理24 h時(shí),葉片愈傷組織增殖系數(shù)為2.4,存活率為52%。以植株矮化和莖稈粗壯為依據(jù)篩選的再生植株中鑒定出47株假定多倍體,但大多為混倍體(嵌合體)。葉片誘導(dǎo)的愈傷組織,經(jīng)1 500 mg/L秋水仙素浸泡處理24 h后,誘導(dǎo)再生的生根植株中獲得1株整株均一加倍的四倍體植株。

    黑果腺肋花楸;多倍體;秋水仙素;浸泡法

    黑果腺肋花楸(AroniamelanocarpaElliot)系薔薇科腺肋花楸屬多年生落葉灌木[1];該樹種在食用、藥用、園林和生態(tài)等領(lǐng)域均有普遍應(yīng)用。其果實(shí)含有1%~2%的花青素、0.25%~0.35%的黃酮類物質(zhì)、1%~2%的多酚,各種功能性物質(zhì)含量豐富,對(duì)人體的各個(gè)器官都有良好的保護(hù)作用,具有多種保健功效[2-3]。近年來(lái),隨著人們對(duì)黑果腺肋花楸認(rèn)識(shí)的增加,需求量也逐年增加。然而,由于黑果腺肋花楸果實(shí)小且有籽,僅依靠常規(guī)栽培手段很難滿足市場(chǎng)需求。

    人工誘導(dǎo)多倍體的研究開始于20世紀(jì)初[4]。開始時(shí),多數(shù)采用物理方法,誘變率低。直到1937年,Blakes和Avery發(fā)現(xiàn)秋水仙素能夠誘導(dǎo)曼佗羅染色體加倍,在技術(shù)上解決了細(xì)胞染色體加倍的問題,大大推動(dòng)了人工誘導(dǎo)多倍體的研究,使之成為植物育種的重要手段[5]。目前,多倍體誘導(dǎo)的難點(diǎn)在于多倍體鑒定,關(guān)于多倍體鑒定主要有染色體鑒定法,包括染色體制片法、流式細(xì)胞儀鑒定、染色中心直徑和異染色質(zhì)數(shù)目鑒定法。其中,染色體制片法是進(jìn)行細(xì)胞倍性鑒定最直接、最可靠的方法,計(jì)數(shù)準(zhǔn)確,而且不需要復(fù)雜的實(shí)驗(yàn)儀器,是目前應(yīng)用最多的鑒定方法[6]。

    由于多倍體不僅使植株器官和細(xì)胞體積增大,而且基因劑量和細(xì)胞內(nèi)代謝活動(dòng)也隨染色體倍性的增加而提高,各種代謝產(chǎn)物的含量也增加。若能育出黑果腺肋花楸多倍體品種,不僅有利于改善其果實(shí)的品質(zhì),而且將有利于大幅度提高其果實(shí)花青素等活性物質(zhì)的含量。本試驗(yàn)采用化學(xué)方法結(jié)合組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行黑果腺肋花楸多倍體誘導(dǎo),以期獲得產(chǎn)量高、藥用活性物質(zhì)增加的多倍體植株,盡而探究誘導(dǎo)過程中黑果腺肋花楸倍性調(diào)控機(jī)制,為我國(guó)培育優(yōu)良品種提供種質(zhì)資源,這對(duì)擴(kuò)大黑果腺肋花楸種植面積、滿足市場(chǎng)需求具有一定的意義和價(jià)值。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    以取自延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院有機(jī)型無(wú)土栽培實(shí)驗(yàn)室的黑果腺肋花楸組培苗莖尖、葉片、愈傷組織為材料,誘導(dǎo)多倍體發(fā)生和植株再生。

    1.2 方法

    1.2.1 黑果腺肋花楸多倍體誘導(dǎo)

    1) 以組培苗莖尖為外植體誘導(dǎo) 無(wú)菌條件下,選取長(zhǎng)勢(shì)相同的幼嫩植株莖尖1 cm,浸泡于不同濃度、經(jīng)高壓滅菌的秋水仙素溶液中;濃度梯度設(shè)置為500、1 000、1 500和2 000 mg/L,并加入二甲基亞砜1 mL/L;浸泡時(shí)間分別為12、24、36和48 h。每個(gè)處理分別編號(hào)。培養(yǎng)30 d后,統(tǒng)計(jì)平均再生芽數(shù)和存活率。

    2) 以組培苗葉片為外植體誘導(dǎo) 選取黑果腺肋花楸組培苗頂端葉片,浸泡于添加有二甲基亞砜1 mL/L的500、1 000、1 500和2 000 mg/L的秋水仙素溶液中;浸泡時(shí)間分別為12、24、36和48 h。處理樣品同1)。培養(yǎng)30 d后,統(tǒng)計(jì)愈傷組織形成率、平均再生芽數(shù)和存活率。

    3) 以愈傷組織為外植體誘導(dǎo) 將材料切成4 mm×4 mm大小,放入不同濃度遮光處理的秋水仙素溶液中;濃度分別為500、1 000、1 500、2 000 mg/L,并添加二甲基亞砜1 mL/L;處理時(shí)間為12、24、36和48 h;在恒速震蕩培養(yǎng)箱中,以100 r/min速度震蕩;處理樣品同1)。30 d后統(tǒng)計(jì)增殖系數(shù)以及存活率。

    1.2.2 黑果腺肋花楸多倍體初步鑒定

    1) 再生植株形態(tài)鑒定法 將黑果腺肋花楸莖尖處理所誘導(dǎo)的再生植株接種于MS + BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂8 g/L[7]的培養(yǎng)基中,經(jīng)過3次繼代生長(zhǎng)30 d后測(cè)量株高、莖粗、節(jié)間長(zhǎng)度,葉長(zhǎng)和葉寬則采用掃描儀LC 2400P掃描,經(jīng)winfolia 2012a for leaf anailsis分析,初步確定變異植株的出現(xiàn)范圍。

    2) 再生植株細(xì)胞學(xué)鑒定法 在顯微鏡16×10(mm)的視野下記錄氣孔數(shù)目并鑒定葉片氣孔的密度;用目鏡測(cè)微尺測(cè)量保衛(wèi)細(xì)胞的大小(包括長(zhǎng)度和寬度);在16×10(mm)的視野下記錄保衛(wèi)細(xì)胞中葉綠體數(shù)目,并計(jì)算變異率。

    變異率(%)=(保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體數(shù)12個(gè)以上的細(xì)胞個(gè)數(shù)/保衛(wèi)細(xì)胞總觀測(cè)個(gè)數(shù))×100%

    3) 根尖染色體計(jì)數(shù)法 將變異體接種于1/2MS+IBA 0.6 mg/L+蔗糖30 g/L+瓊脂8 g/L[8]培養(yǎng)基,待 2 周后生長(zhǎng)到3 cm時(shí),早晨9:30 取根尖、編號(hào),浸泡于冰水中。用劉迎春[9]方法進(jìn)行鏡檢染色體數(shù)目。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    試驗(yàn)采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)法,數(shù)據(jù)采用 Excel 2007和 SPSS 16.0軟件的Duncan檢驗(yàn)和方差分析進(jìn)行差異顯著性分析,顯著水平P≤0.05。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 黑果腺肋花楸多倍體的誘導(dǎo)

    2.1.1 黑果腺肋花楸組培苗莖尖多倍體誘導(dǎo)

    從秋水仙素浸泡濃度和時(shí)間對(duì)黑果腺肋花楸組培苗莖尖生長(zhǎng)的影響來(lái)看,不同的處理濃度和處理時(shí)間對(duì)組培苗的存活率具有一定影響,外植體的存活率隨秋水仙素濃度的增高和處理時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸降低(表1)。

    表1 秋水仙素浸泡濃度和時(shí)間對(duì)黑果腺肋花楸組培苗莖尖生長(zhǎng)的影響

    注:表中數(shù)字后面的小寫字母表示在0.05水平下差異顯著性,下同。

    當(dāng)處理濃度為500 mg/L時(shí),組培苗存活率均大于80%;當(dāng)濃度上升到 2 000 mg/L時(shí),組培苗莖尖有部分變?yōu)楹稚掖婊盥拭黠@降低。秋水仙素處理的時(shí)間超過30 h時(shí),組培苗莖尖長(zhǎng)勢(shì)普遍降低,且當(dāng)時(shí)間達(dá)到48 h時(shí),外植體處于停止生長(zhǎng)狀態(tài)。當(dāng)秋水仙素濃度為1 500 mg/L、處理時(shí)間為36 h時(shí),平均再生芽數(shù)為8.5個(gè),存活率為51.3%,接近于半致死劑量。

    2.1.2 黑果腺肋花楸組培苗幼嫩葉片多倍體誘導(dǎo)

    當(dāng)誘導(dǎo)材料為植株頂端幼嫩葉片時(shí),秋水仙素浸泡對(duì)葉片的生長(zhǎng)有一定影響(表 2)。隨著秋水仙素濃度和處理時(shí)間的增加,黑果腺肋花楸葉片存活率呈現(xiàn)顯著下降趨勢(shì),經(jīng)處理的存活葉片較大一部分會(huì)形成愈傷組織,且能分化出芽。當(dāng)濃度為2 000 mg/L,浸泡48 h時(shí),葉片愈傷組織形成率、存活率均最低。經(jīng)秋水仙素浸泡處理后的葉片誘導(dǎo)的愈傷組織均呈褐化。當(dāng)濃度1 000 mg/L,浸泡36 h時(shí),愈傷組織形成率為53.3%,平均再生芽數(shù)為1.1,存活率為50.4%,達(dá)到了半致死劑量。

    表2 秋水仙素浸泡濃度和時(shí)間對(duì)黑果腺肋花楸組培苗葉片誘導(dǎo)的愈傷組織及再生芽生長(zhǎng)的影響

    2.1.3 黑果腺肋花楸愈傷組織多倍體誘導(dǎo)

    秋水仙素浸泡濃度和時(shí)間對(duì)黑果腺肋花楸愈傷組織生長(zhǎng)的影響見表3。

    表3 秋水仙素浸泡濃度和時(shí)間對(duì)黑果腺肋花楸愈傷組織生長(zhǎng)的影響

    由表3可知,用秋水仙素浸泡誘導(dǎo)愈傷組織,當(dāng)浸泡濃度為500和1 000 mg/L時(shí),愈傷組織的存活率均高于50%。當(dāng)浸泡濃度為1 500 mg/L、處理時(shí)間為48 h和浸泡濃度為2 000 mg/L、處理時(shí)間為36、48 h時(shí),才小于50%。當(dāng)浸泡濃度為2 000 mg/L、時(shí)間24 h時(shí),葉片愈傷組織增殖系數(shù)為2.4,存活率為52%,達(dá)到半致死劑量。

    2.2 黑果腺肋花楸誘導(dǎo)植株初步鑒定

    2.2.1 再生植株的形態(tài)學(xué)鑒定鑒定

    用秋水仙素浸泡處理黑果腺肋花楸莖尖后誘導(dǎo)再生的植株(表4,圖1),株高均低于正常植株。對(duì)于莖粗來(lái)講,處理濃度為500、1 000和1 500 mg/L、處理時(shí)間少于24 h時(shí),莖粗大于正常植株。由表4可以看出,處理時(shí)間越長(zhǎng),株高越矮、莖粗、節(jié)間長(zhǎng)度、葉長(zhǎng)、葉寬越??;且秋水仙素濃度越高,株高越矮,莖粗、節(jié)間長(zhǎng)度、葉長(zhǎng)、葉寬越小。當(dāng)濃度為2 000 mg/L,處理時(shí)間為48 h時(shí),植株處于死亡狀態(tài)。

    表4 秋水仙素浸泡誘導(dǎo)再生植株外部形態(tài)的測(cè)定

    圖1 不同秋水仙素浸泡濃度和時(shí)間對(duì)

    2.2.2 再生植株的細(xì)胞學(xué)鑒定法

    通常經(jīng)染色體加倍后獲得的多倍體植株,株高變矮、節(jié)間長(zhǎng)度變小。故本試驗(yàn)中將株高和節(jié)間長(zhǎng)度顯著低于對(duì)照組的再生植株作為假定的多倍體,再經(jīng)過3次繼代培養(yǎng)之后,對(duì)再生植株葉片的保衛(wèi)細(xì)胞及保衛(wèi)細(xì)胞中的葉綠體數(shù)目進(jìn)行鏡檢。結(jié)果表明,經(jīng)秋水仙素浸泡法處理的再生植株葉片的氣孔密度均顯著低于對(duì)照組,變異植株葉片鏡檢單位視野中氣孔數(shù)量小于對(duì)照植株。變異株葉片保衛(wèi)細(xì)胞長(zhǎng)度和寬度均與對(duì)照植株差異顯著(表5)。為確保能夠獲得真實(shí)的染色體加倍體,試驗(yàn)將保衛(wèi)細(xì)胞中葉綠體數(shù)量大于12的個(gè)體假定為多倍體(圖2),并將葉綠體數(shù)多于12的細(xì)胞個(gè)數(shù)與觀測(cè)的總細(xì)胞數(shù)進(jìn)行比較從而獲得葉綠體變異率。結(jié)果表明,所得再生植株葉片中葉綠體變異率最高的處理為浸泡濃度 1 500 mg/L、處理時(shí)間36 h時(shí),其葉綠體變異率達(dá)到33.3%(表5)。

    表5 秋水仙素浸泡誘導(dǎo)再生植株氣孔保衛(wèi)細(xì)胞和葉綠體數(shù)的測(cè)定

    注:-表示未測(cè)定。

    A:秋水仙素濃度1 000 mg/L,處理36 h;B:秋水仙素濃度1 500 mg/L,處理24 h;C:秋水仙素濃度1500 mg/L,處理36 h。

    圖2 不同秋水仙素浸泡濃度和時(shí)間誘導(dǎo)再生植株葉片氣孔保衛(wèi)細(xì)胞葉綠體(16×40)

    Fig.2 Chloroplasts in leaf stomatal guard cells of regenerated plantlets induced by treatments with different concentrations and soaking time of colchicine(16×40)

    2.2.3 多倍體植株染色體數(shù)目的鑒定

    經(jīng)秋水仙素浸泡法誘導(dǎo)的黑果腺肋花楸多倍體初步鑒定出47株假定多倍體;經(jīng)生根培養(yǎng),成功生根7株,占總數(shù)約14.9%。檢測(cè)生根變異植株的染色體數(shù)目,發(fā)現(xiàn)所得的7株生根變異植株均為二倍體(2n=2x=34±2)與四倍體(2n=4x=68±4)的混倍體,即嵌合體,其四倍體細(xì)胞所占比例最高可達(dá)12.5%(表6,圖3)。將所得嵌合體再進(jìn)行秋水仙素施入處理后,嵌合體細(xì)胞數(shù)量最高達(dá)到45.8%。未成功生根的植株進(jìn)行加大生根激素處理后,再檢測(cè)染色體數(shù)目,發(fā)現(xiàn)在經(jīng)1 500 mg/L秋水仙素浸泡處理24 h后誘導(dǎo)并獲得生根的再生植株中,出現(xiàn)1株為四倍體。試驗(yàn)中,暫時(shí)未發(fā)現(xiàn)六倍體及以上的細(xì)胞。

    表6 不同處理再生植株的染色體倍性

    注:誘變率=多倍體數(shù)/變異數(shù)。

    A:二倍體細(xì)胞;B:四倍體細(xì)胞。

    2.2.4 多倍體植株與對(duì)照植株外觀形態(tài)的比較

    初步鑒定的植株經(jīng)3次繼代培養(yǎng)后,所得再生植株經(jīng)培養(yǎng)30 d后檢測(cè)植株形態(tài)(表7,圖4)。結(jié)果表明,多倍體植株平均株高為3.7 cm,比對(duì)照植株矮1.4 cm;多倍體植株莖粗大于對(duì)照植株、莖段長(zhǎng)度小于對(duì)照植株,而多倍體植株的葉長(zhǎng)和葉寬則明顯大于對(duì)照植株。

    表7 多倍體植株與對(duì)照植株外觀形態(tài)的比較

    3 討論與結(jié)論

    多倍體植物在自然界中普遍存在,多倍化研究已經(jīng)成為當(dāng)前進(jìn)化生物學(xué)、遺傳學(xué)和基因組學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。自然界中存在的多倍體均由自然加倍而來(lái),但自然加倍的頻率低,而且許多自然加倍的多倍體在自然條件下不能正常生長(zhǎng)而死亡。1937年Blakeslee 等用秋水仙堿對(duì)曼陀羅等植物的染色體數(shù)進(jìn)行加倍獲得了成功[10]。之后,秋水仙素被廣泛應(yīng)用于培育植物新品種。

    注:頂端第2片葉

    圖4 多倍體植株與對(duì)照植株的生長(zhǎng)比較

    Fig.4 Comparison of the polyploid plant with the normal diploid plant (CK) ofAroniamelanocarpaElliot

    秋水仙素通過作用于有絲分裂中期使染色體加倍[11];但不同植物品種、外植體類型和植物生長(zhǎng)時(shí)期對(duì)秋水仙素的敏感度不同。一般認(rèn)為,誘變處理濃度為半致死率時(shí),可獲得較高的誘導(dǎo)率;當(dāng)濃度一定時(shí),植株的死亡率隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)而升高[12]。處理時(shí)間過短,分生組織的有絲分裂不能同步進(jìn)行,易得嵌合體[13]。通常,不同植物所選擇的誘導(dǎo)多倍體發(fā)生的外植體材料不同,如種子[14]、莖段[15]、離體組織[16]、叢生芽[17]、愈傷組織[18]等,以及秋水仙素處理濃度的不同,誘導(dǎo)效果均有所差異;一般來(lái)講,分裂越旺盛誘導(dǎo)的成功率越高。本試驗(yàn)中采用黑果腺肋花楸組培苗莖尖、組培苗葉片以及愈傷組織為外植體作為多倍體誘導(dǎo)材料,并通過設(shè)置4個(gè)濃度(500、1 000、1 500和2 000 mg/L)和5個(gè)處理時(shí)間(0、12、24、36和48 h)誘導(dǎo)黑果腺肋花楸多倍體發(fā)生。結(jié)果表明,黑果腺肋花楸多倍體發(fā)生,受限于不同處理下的外植體存活率;在各種處理中,愈傷組織的存活率高于莖尖、葉片。用2 000 mg/L秋水仙素處理愈傷組織24 h時(shí),葉片愈傷組織增殖系數(shù)為2.4,存活率為52 %,接近于半致死劑量。

    前人的研究結(jié)果表明,多倍體植株的株高會(huì)下降,節(jié)間長(zhǎng)度會(huì)變小,可以作為判斷多倍體植株的依據(jù)[19];這一點(diǎn)在本試驗(yàn)中進(jìn)一步得到了驗(yàn)證。在本試驗(yàn)過程中將節(jié)間長(zhǎng)度顯著低于對(duì)照組的作為假定的多倍體,對(duì)其進(jìn)行3次繼代培養(yǎng)后,再對(duì)其染色體倍性檢測(cè)。結(jié)果在各處理中誘導(dǎo)再生的黑果腺肋花楸再生植株中,有7株為多倍體植株。然而,細(xì)胞學(xué)檢測(cè)表明,試驗(yàn)中所獲得的多倍體植株,大多為不同倍性細(xì)胞的混倍體或倍性嵌合體;不同倍性植株中,四倍體細(xì)胞所占比例最高達(dá)到12.5%。僅在1 500 mg/L秋水仙素浸泡處理24 h后誘導(dǎo)產(chǎn)生的生根的再生植株中出現(xiàn)了1株完整的四倍體植株。可見,雖然不同濃度的秋水仙素結(jié)合不同的處理時(shí)間,均可誘導(dǎo)多倍體發(fā)生,但因染色體的多倍性發(fā)生于再生植株的不同的組織器官中,多倍體細(xì)胞混合存在。說明在多倍體的誘導(dǎo)中,還需通過進(jìn)一步繼代培養(yǎng)并通過染色體數(shù)目鏡檢以便分離整株均一加倍的多倍體植株。

    另外,從試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,雖然多倍體發(fā)生和獲得完整的多倍體植株的概率較低,但從假定的多倍體中經(jīng)3次繼代后篩選出的四倍體黑果腺肋花楸植株,呈現(xiàn)出“巨大性”,特征非常明顯;與正常二倍體植株相比較(表7,圖4),多倍體植株矮小、節(jié)間變短、莖干粗壯、葉片長(zhǎng)寬變大(葉片更大),明顯區(qū)別于正常二倍體植株。總之,黑果腺肋花楸多倍體的誘導(dǎo)以愈傷組織為最佳材料;當(dāng)秋水仙素濃度為2 000 mg/L,處理時(shí)間為24 h時(shí),增殖系數(shù)最高,而且成功誘導(dǎo)并獲得了四倍體黑果腺肋花楸植株,這項(xiàng)工作將有利于黑果腺肋花楸倍性化植株的研究,為黑果腺肋花楸多倍體的誘導(dǎo)和鑒定奠定了理論與實(shí)踐基礎(chǔ)。

    [1] 孔繁軾.黑果腺肋花楸的開發(fā)與栽培[J].中國(guó)花卉園藝,2006(10):38-39.

    [2] 尹艷廷.黑果腺肋花楸在太原地區(qū)的引種栽培初探[J].防護(hù)林科技,2008,9(05):133-134.

    [3] 王鵬,姜鎮(zhèn)榮,張平,等.黑果腺肋花楸果實(shí)的經(jīng)濟(jì)價(jià)值及其開發(fā)前景[J].農(nóng)產(chǎn)品加工,2009(09):55-57.

    [4] 陶抵輝,劉明月,肖君澤,等.生物體多倍體誘導(dǎo)方法研究進(jìn)展[J].生命科學(xué)研究, 2007,11(04):6-13.

    [5] 于盱,李維林,梁呈元,等.組織培養(yǎng)中多倍體誘導(dǎo)育種研究進(jìn)展[C].中國(guó)植物學(xué)會(huì)植物結(jié)構(gòu)與生殖生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)、江蘇省植物學(xué)會(huì)2007年學(xué)術(shù)年會(huì)學(xué)術(shù)報(bào)告及研究論文集,2007,198-201.

    [6] 張紅亮,姚先玲,李霞,等.淺談植物多倍體鑒定方法[J].種子科技, 2012(10):25-27.

    [7] 高曄華,郭朋偉,吳榮哲.黑果腺肋花楸組培苗增殖的初步研究[J].北方園藝,2012(17):119-121.

    [8] 高曄華,郭朋偉,高日,等.黑果腺肋花楸組培苗生根培養(yǎng)及馴化的研究[J].北方園藝, 2013(09):105-108.

    [9] 劉迎春,胡勇.3種引進(jìn)禾本科牧草的染色體核型研究[J].四川草原,2002(04): 40-42.

    [10] 蔡旭.植物遺傳育種[M].北京: 科學(xué)出版社,1988.

    [11] 周慧文,馮斗,嚴(yán)華兵.秋水仙素離體誘導(dǎo)多倍體研究進(jìn)展[J].核農(nóng)學(xué)報(bào),2015,29(07):1307-0315.

    [12] 王長(zhǎng)泉,張文勝,李雅志,等.蘋果葉片離體培養(yǎng)中秋水仙素加倍效應(yīng)的研究[J].果樹科學(xué),1999,16(02):104-109.

    [13] 盧炳芝,查堡薟,于向榮,等.誘變葡萄體細(xì)胞胚獲得同質(zhì)四倍體植株的研究[J].果樹科學(xué),1997,14(03):145-148.

    [14] 李步勛,陶抵輝,阮萬(wàn)輝.西瓜離體組織細(xì)胞染色體加倍技術(shù)的研究和應(yīng)用[J].陜西農(nóng)業(yè)科學(xué),1999(03):21-23.

    [15] 楊曉明.組織培養(yǎng)中秋水仙素誘導(dǎo)葡萄多倍體研究[D].蘭州:甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué), 2003.

    [16] 陳緒中,羅正榮.鄂柿1號(hào)離體葉片秋水仙素誘導(dǎo)和再生植株倍性鑒定[J].果樹學(xué)報(bào),2005,22(05):554-556.

    [17] 張興翠,周昌些,殷家明.藥用百合的多倍體誘導(dǎo)及快速繁殖[J].西南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2003,25(01):14-17.

    [18] 王強(qiáng),蘭利瓊,傅華龍.秋水仙素誘導(dǎo)川貝母(FritillariacirrhosaD. Don)愈傷組織多倍體的研究[J].武漢植物學(xué)研究,2002,20(06):449-452.

    [19] 羅耀武,喬子靖,朱子英,等.人工誘變獲得四倍體玫瑰香葡萄的研究[J].園藝學(xué)報(bào),1997,24(02):125-128.

    Polypoid induction ofAroniamelanocarpaElliot by soaking with colchicine and its preliminary identification

    LI Jianxun, BA Lei, YU Huan, YU Min, LIU Bing, WU Rongzhe*

    (AgriculturalCollegeofYanbianUniversity,YanjiJilin133002,China)

    In this experiment, shoot tips, leaves and callus ofAroniamelanocarpaElliot tissue culture as materials, influences of different colchicine concentration and treatment times on callus survival rate, regenerated bud number, regeneration ratio and polypoid occurrence were determined. After 30 days of growth, chromosome ploidy of the plants subcultured 3 times was examined by microscope, which regenerated from different explants treated by colchicine. The results showed that the survival rate and budding rate of different explants decreased with the increase of colchicine concentration and treating time. Among these, the survival rate of Aronia melanocarpa Ellio callus was higher than shoot tip and leaves. After treatment with colchicine, all three explants were able to induce the occurrence of polyploidy. The increase of concentration and treating time was better for increasing of chromosome doubling, but the death rate of explants was increased. When the callus induced from leaves was treated for 24 h by 2 000 mg/L of colchicine, its regeneration index was 2.4, survival rate was 52%. Based on plant dwarfing height and stem stoutness, 47 putative polyploid plants were screened out, but most of the plants were mixoploids (chimeric ploidy). From rooting plants regenerated from the leaf callus soaking in 1 500 mg/L colchicine for 24 h, only one plant was identified as whole plant tetraploid.

    AroniamelanocarpaElliot; polyploid; colchicine; soaking method

    2016-09-27 基金項(xiàng)目:吉林省科技廳自然基金重點(diǎn)項(xiàng)目(20140101218JC)

    李建勛(1992—),男,吉林吉林人,在讀碩士,研究方向?yàn)閳@藝植物生物技術(shù)及生理。吳榮哲為通信作者,E-mail:wurzh@ybu.edu.cn

    1004-7999(2017)01-0001-08

    10.13478/j.cnki.jasyu.2017.01.001

    S663.9

    A

    猜你喜歡
    腺肋秋水仙素多倍體
    不同濃度秋水仙素對(duì)蠶豆根部形態(tài)特征及染色體的影響
    園藝與種苗(2023年1期)2023-03-17 16:33:36
    不同濃度秋水仙素處理下蠶豆發(fā)芽形態(tài)指標(biāo)及氣孔分析
    園藝與種苗(2023年1期)2023-03-17 16:33:34
    “富硒多倍體蒲公英新品系”在太谷區(qū)試種成功
    肝細(xì)胞多倍體發(fā)生機(jī)制及其與肝細(xì)胞癌形成的相關(guān)性研究進(jìn)展
    基于文獻(xiàn)計(jì)量的黑果腺肋花楸國(guó)內(nèi)研究現(xiàn)狀分析
    不同產(chǎn)地的黑果腺肋花楸抗氧化活性比較
    秋水仙素對(duì)紅肉火龍果種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的影響
    超聲波輔助提取黑果腺肋花楸花色苷工藝優(yōu)化及穩(wěn)定性研究
    多倍體巨細(xì)胞產(chǎn)生新的腫瘤細(xì)胞:腫瘤化療拮抗及復(fù)發(fā)的關(guān)鍵因素
    鮮黃花菜如何處理才不會(huì)中毒
    色视频www国产| 性插视频无遮挡在线免费观看| 九色成人免费人妻av| 国产男人的电影天堂91| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 日本wwww免费看| 久久99热这里只有精品18| 亚洲综合色惰| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 国产一区亚洲一区在线观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚洲精品成人久久久久久| 久久精品国产自在天天线| 久久精品国产自在天天线| 精品一区二区免费观看| 97超视频在线观看视频| 久久久久久久久久黄片| 亚洲精品色激情综合| 99在线人妻在线中文字幕| 久久精品综合一区二区三区| 国产精品三级大全| 国产成人福利小说| 国产视频首页在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 青春草亚洲视频在线观看| 激情 狠狠 欧美| 91久久精品国产一区二区三区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 久久99热这里只频精品6学生 | 99热这里只有是精品50| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产亚洲精品av在线| 少妇高潮的动态图| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产精品综合久久久久久久免费| 亚洲真实伦在线观看| 看非洲黑人一级黄片| 久久99热这里只有精品18| 国产av在哪里看| 26uuu在线亚洲综合色| 日本午夜av视频| 色吧在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 欧美性猛交黑人性爽| 久久国产乱子免费精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 国产老妇女一区| 免费黄色在线免费观看| 草草在线视频免费看| 热99在线观看视频| 91久久精品电影网| 永久网站在线| 最近中文字幕2019免费版| 天堂中文最新版在线下载 | 女人十人毛片免费观看3o分钟| 丝袜美腿在线中文| 一级毛片我不卡| 久久久国产成人免费| 日韩一区二区三区影片| 高清毛片免费看| 国产日韩欧美在线精品| 国产伦精品一区二区三区四那| 欧美97在线视频| 天堂网av新在线| 国产精品1区2区在线观看.| 麻豆久久精品国产亚洲av| 我的老师免费观看完整版| 免费无遮挡裸体视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 欧美+日韩+精品| 色网站视频免费| 国产乱人视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 色综合亚洲欧美另类图片| 成人特级av手机在线观看| 日本av手机在线免费观看| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 久久久国产成人免费| 成年免费大片在线观看| 国产精品永久免费网站| 美女被艹到高潮喷水动态| 亚洲精华国产精华液的使用体验| 欧美+日韩+精品| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 观看美女的网站| 一本久久精品| 啦啦啦啦在线视频资源| 一级毛片aaaaaa免费看小| 国语自产精品视频在线第100页| 久久久久久久久中文| 麻豆成人av视频| 亚洲色图av天堂| 大话2 男鬼变身卡| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 看片在线看免费视频| 久久久久久久久久久免费av| av在线蜜桃| 久久国产乱子免费精品| 亚洲av免费在线观看| 久久久久久大精品| 成人漫画全彩无遮挡| 在线免费十八禁| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 亚洲在久久综合| 亚洲精品亚洲一区二区| 黑人高潮一二区| 一级毛片久久久久久久久女| 最近的中文字幕免费完整| 国产91av在线免费观看| 联通29元200g的流量卡| 啦啦啦韩国在线观看视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| av在线蜜桃| av免费观看日本| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 精品不卡国产一区二区三区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 搡女人真爽免费视频火全软件| a级毛片免费高清观看在线播放| 18禁在线播放成人免费| 国产精品,欧美在线| 国产一区亚洲一区在线观看| 草草在线视频免费看| 亚洲精品国产成人久久av| 69av精品久久久久久| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品国产三级国产专区5o | 26uuu在线亚洲综合色| 有码 亚洲区| 毛片一级片免费看久久久久| 99热这里只有精品一区| 欧美区成人在线视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 国产在视频线精品| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 人体艺术视频欧美日本| 国产精品一区二区三区四区久久| 水蜜桃什么品种好| 欧美激情国产日韩精品一区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 一区二区三区免费毛片| 直男gayav资源| 亚洲高清免费不卡视频| 高清毛片免费看| 岛国毛片在线播放| www.色视频.com| 99久久精品国产国产毛片| 免费一级毛片在线播放高清视频| 国产精品av视频在线免费观看| 午夜免费激情av| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲欧美日韩无卡精品| 99久国产av精品国产电影| 麻豆一二三区av精品| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲av成人av| 青春草国产在线视频| 亚洲国产精品合色在线| 色哟哟·www| 国产单亲对白刺激| 国产高潮美女av| 国产精品精品国产色婷婷| 国产视频内射| 99热精品在线国产| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 五月玫瑰六月丁香| 成年免费大片在线观看| 天堂中文最新版在线下载 | 亚洲精品自拍成人| 丰满少妇做爰视频| 尾随美女入室| 黑人高潮一二区| 人妻系列 视频| 少妇高潮的动态图| 男女边吃奶边做爰视频| 国产精品一二三区在线看| 亚洲在久久综合| 最近最新中文字幕免费大全7| 久久韩国三级中文字幕| av线在线观看网站| 天堂影院成人在线观看| 日本免费在线观看一区| 久久综合国产亚洲精品| 成年免费大片在线观看| 欧美+日韩+精品| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产亚洲av嫩草精品影院| 晚上一个人看的免费电影| 国产一区有黄有色的免费视频 | 直男gayav资源| 大香蕉久久网| www.色视频.com| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲不卡免费看| 国产精品久久久久久久电影| 亚洲精品色激情综合| 一区二区三区免费毛片| 夜夜爽夜夜爽视频| 免费av不卡在线播放| 有码 亚洲区| 日本一二三区视频观看| 国产成人精品一,二区| 在线天堂最新版资源| 国产亚洲最大av| 99热全是精品| 亚洲,欧美,日韩| 神马国产精品三级电影在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 久久99热6这里只有精品| 小说图片视频综合网站| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲av不卡在线观看| 国内精品美女久久久久久| 国产av不卡久久| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 国产淫语在线视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 69av精品久久久久久| 欧美成人午夜免费资源| 日本黄色视频三级网站网址| 观看美女的网站| 18禁动态无遮挡网站| 国产精品人妻久久久久久| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产在线一区二区三区精 | 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 熟女人妻精品中文字幕| 欧美日本视频| 精品熟女少妇av免费看| 91av网一区二区| 九色成人免费人妻av| 亚洲成人久久爱视频| 精品久久久噜噜| 黄色日韩在线| 精华霜和精华液先用哪个| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 免费观看精品视频网站| 国产伦精品一区二区三区四那| 中文字幕久久专区| 久久人妻av系列| 麻豆成人av视频| 国产 一区精品| 亚洲美女视频黄频| 一边亲一边摸免费视频| 淫秽高清视频在线观看| 精品久久久久久久久av| 1024手机看黄色片| 男人狂女人下面高潮的视频| 精品久久久久久久久久久久久| 国产毛片a区久久久久| 99久久精品热视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 女人久久www免费人成看片 | 日本三级黄在线观看| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 91久久精品国产一区二区三区| 免费看日本二区| 99久久九九国产精品国产免费| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲av一区综合| 黄色欧美视频在线观看| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 最近视频中文字幕2019在线8| 日韩一区二区三区影片| 全区人妻精品视频| 国产精品久久久久久精品电影| 欧美成人一区二区免费高清观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 天堂中文最新版在线下载 | 成人美女网站在线观看视频| 日韩一本色道免费dvd| 青春草亚洲视频在线观看| 国产乱来视频区| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 精品久久久久久成人av| 国产精品久久久久久久电影| 我要看日韩黄色一级片| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产精品福利在线免费观看| av国产久精品久网站免费入址| 观看免费一级毛片| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 人妻少妇偷人精品九色| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲美女视频黄频| 久久精品夜色国产| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜 | 97人妻精品一区二区三区麻豆| 一级毛片电影观看 | 中文天堂在线官网| 久久久久久大精品| 直男gayav资源| 中文亚洲av片在线观看爽| 99在线人妻在线中文字幕| 最近2019中文字幕mv第一页| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 精品人妻视频免费看| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 全区人妻精品视频| 久久久久久久午夜电影| 中文字幕免费在线视频6| 国产精品国产三级专区第一集| 久久久精品欧美日韩精品| 午夜精品国产一区二区电影 | 欧美一区二区精品小视频在线| 亚洲成人中文字幕在线播放| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 成人毛片60女人毛片免费| 亚洲乱码一区二区免费版| 亚洲最大成人av| 春色校园在线视频观看| 免费看av在线观看网站| 久久久久久久久久久免费av| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 美女国产视频在线观看| 亚洲av熟女| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 干丝袜人妻中文字幕| 精品人妻一区二区三区麻豆| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产精品一及| 国产精品女同一区二区软件| 欧美zozozo另类| 日韩av在线免费看完整版不卡| 久久久久国产网址| av在线观看视频网站免费| 国产精品一区二区三区四区久久| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲av免费高清在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 久久亚洲国产成人精品v| 你懂的网址亚洲精品在线观看 | 精品人妻视频免费看| 国产成人a∨麻豆精品| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 97超碰精品成人国产| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美色视频一区免费| 不卡视频在线观看欧美| 久久久久久久久大av| 亚洲精品一区蜜桃| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲国产精品成人综合色| 联通29元200g的流量卡| 久久久久久久午夜电影| 国产久久久一区二区三区| 中文天堂在线官网| 精品久久久久久久末码| 亚洲精华国产精华液的使用体验| ponron亚洲| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产男人的电影天堂91| 日韩欧美国产在线观看| 看非洲黑人一级黄片| 国产人妻一区二区三区在| 精品一区二区三区人妻视频| 日日摸夜夜添夜夜爱| 内射极品少妇av片p| 少妇的逼好多水| 国产69精品久久久久777片| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 精品久久久久久久久久久久久| 午夜福利在线在线| 男人的好看免费观看在线视频| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 99九九线精品视频在线观看视频| 18+在线观看网站| 日韩三级伦理在线观看| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲真实伦在线观看| 成人无遮挡网站| 插逼视频在线观看| 久久综合国产亚洲精品| 国产色婷婷99| 亚洲欧洲日产国产| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚州av有码| 亚洲欧美精品综合久久99| www日本黄色视频网| 国产精品嫩草影院av在线观看| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久这里只有精品中国| 国产亚洲一区二区精品| 国产一区二区三区av在线| 亚洲av免费高清在线观看| 91狼人影院| 日本爱情动作片www.在线观看| 国产淫语在线视频| 国产一区二区亚洲精品在线观看| av线在线观看网站| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产精品久久久久久久久免| 婷婷六月久久综合丁香| 91av网一区二区| 亚洲一区高清亚洲精品| www日本黄色视频网| 内地一区二区视频在线| 美女国产视频在线观看| videos熟女内射| 美女大奶头视频| 国产精品久久久久久久久免| 国产极品天堂在线| videossex国产| 久久精品91蜜桃| 久久99热这里只频精品6学生 | 精品久久久久久久久亚洲| 久久午夜福利片| 日本熟妇午夜| 久久精品影院6| 美女被艹到高潮喷水动态| 美女国产视频在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 美女国产视频在线观看| 国产日韩欧美在线精品| 精品一区二区免费观看| 亚洲在线自拍视频| 热99在线观看视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 波多野结衣高清无吗| 国产免费视频播放在线视频 | 亚洲真实伦在线观看| 精品久久久久久久末码| 国产极品精品免费视频能看的| 两个人视频免费观看高清| 国产免费又黄又爽又色| 欧美精品国产亚洲| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 日韩大片免费观看网站 | 亚洲最大成人中文| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲国产精品国产精品| 男女下面进入的视频免费午夜| 午夜激情福利司机影院| 日韩一本色道免费dvd| 国产精华一区二区三区| 久久久久国产网址| av在线播放精品| 午夜免费男女啪啪视频观看| 中国国产av一级| 成人欧美大片| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 在线免费观看的www视频| 九九爱精品视频在线观看| 久久久久久久久久黄片| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 亚洲电影在线观看av| or卡值多少钱| 成人一区二区视频在线观看| 久久亚洲精品不卡| 青春草视频在线免费观看| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 精品少妇黑人巨大在线播放 | 欧美3d第一页| 国产精品1区2区在线观看.| 免费观看人在逋| 国产精品.久久久| 搡老妇女老女人老熟妇| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲精品日韩av片在线观看| 亚洲图色成人| 热99在线观看视频| 特大巨黑吊av在线直播| 日韩大片免费观看网站 | 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产成人免费观看mmmm| 午夜激情欧美在线| 在线观看一区二区三区| 美女高潮的动态| 国产爱豆传媒在线观看| 嘟嘟电影网在线观看| 国产精品国产三级专区第一集| 亚洲成人久久爱视频| 免费观看a级毛片全部| 色视频www国产| 2022亚洲国产成人精品| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲成人中文字幕在线播放| 麻豆av噜噜一区二区三区| 日韩精品有码人妻一区| 国产91av在线免费观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| videos熟女内射| 亚洲美女视频黄频| 亚洲国产成人一精品久久久| 只有这里有精品99| 三级毛片av免费| 人妻夜夜爽99麻豆av| 美女内射精品一级片tv| 在线观看av片永久免费下载| 日本一二三区视频观看| 小说图片视频综合网站| 最近的中文字幕免费完整| ponron亚洲| 成人性生交大片免费视频hd| 三级国产精品欧美在线观看| 国产人妻一区二区三区在| 22中文网久久字幕| 午夜福利成人在线免费观看| 日本色播在线视频| 国产免费又黄又爽又色| 欧美一区二区亚洲| 高清视频免费观看一区二区 | 免费看美女性在线毛片视频| 精品久久久噜噜| 免费观看人在逋| 国产精品不卡视频一区二区| 亚洲国产最新在线播放| 午夜福利在线在线| 国产亚洲一区二区精品| 丰满人妻一区二区三区视频av| 别揉我奶头 嗯啊视频| 欧美一区二区国产精品久久精品| 成人一区二区视频在线观看| 69av精品久久久久久| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 男插女下体视频免费在线播放| 高清午夜精品一区二区三区| 国产成人aa在线观看| 看非洲黑人一级黄片| 亚洲美女搞黄在线观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 成人亚洲精品av一区二区| 22中文网久久字幕| 亚洲国产精品久久男人天堂| 精品久久久久久久久亚洲| 中文字幕久久专区| 国产精品福利在线免费观看| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 超碰av人人做人人爽久久| 欧美激情国产日韩精品一区| 男人和女人高潮做爰伦理| 天堂中文最新版在线下载 | 精品人妻视频免费看| 丝袜喷水一区| 亚洲自偷自拍三级| 特级一级黄色大片| 卡戴珊不雅视频在线播放| 边亲边吃奶的免费视频| 99热6这里只有精品| 亚洲av成人精品一二三区| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产精品女同一区二区软件| 日韩国内少妇激情av| 亚洲四区av| 永久网站在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 亚洲美女视频黄频| 欧美高清成人免费视频www| 偷拍熟女少妇极品色| 国产极品精品免费视频能看的| 中文乱码字字幕精品一区二区三区 | 老女人水多毛片| 99热网站在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 狠狠狠狠99中文字幕| 97超碰精品成人国产| 最近手机中文字幕大全| 97超碰精品成人国产| 禁无遮挡网站| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美成人午夜免费资源| 久久久久久大精品| 中文资源天堂在线| 午夜福利视频1000在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲国产成人一精品久久久| 91精品一卡2卡3卡4卡| 免费看美女性在线毛片视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 亚洲综合色惰| 日韩成人伦理影院| 免费观看性生交大片5| 亚洲欧美日韩东京热| 日韩 亚洲 欧美在线| 男人舔奶头视频| 国产在视频线在精品| 免费电影在线观看免费观看| 亚洲最大成人中文| 日韩av在线大香蕉| 蜜臀久久99精品久久宅男| 欧美xxxx性猛交bbbb| 99久久中文字幕三级久久日本| 九九爱精品视频在线观看| 国产精品精品国产色婷婷| 亚洲国产精品合色在线| av女优亚洲男人天堂| 久久精品国产自在天天线| 亚洲国产精品国产精品| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 成人av在线播放网站| 亚洲欧美精品专区久久| 成人一区二区视频在线观看| 最近视频中文字幕2019在线8| 身体一侧抽搐| 国产美女午夜福利| 久久久久久伊人网av| 国产探花在线观看一区二区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日本黄色视频三级网站网址| 国产91av在线免费观看| 美女黄网站色视频| 色综合色国产| 一级毛片我不卡| 3wmmmm亚洲av在线观看| 亚洲图色成人| 日本av手机在线免费观看| 久久久久久久久久久免费av|