毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定黃酒中甜蜜素探究

甜蜜素化學(xué)名：環(huán)已基氨基磺酸鈉，是一種廣泛使用的人工甜味劑。其使用范圍和限制不明確，在黃酒甜蜜素的測(cè)定試驗(yàn)中，氣相色譜在運(yùn)行中存在一些問(wèn)題需要改進(jìn)。

材料和方法

主要儀器和試劑。使用氣相色譜儀，在色譜工作站測(cè)定其成分，使用自動(dòng)進(jìn)樣器，渦攪拌器，離心機(jī)，在50ml的插頭管中進(jìn)行冰浴。使用毛細(xì)管相色譜法來(lái)進(jìn)行正己烷的分析，使用的試劑包括50g/l的亞硝酸鈉（AR，儲(chǔ)存在冰箱內(nèi)），100 g/l的硫酸（AR），氯化鈉（AR），40g/l的氫氧化鈉溶液。環(huán)己基氨基磺酸鈉10ml，15mg/ml的濃度。水是純凈水。

黃酒樣品選取。黃酒樣品選取50ml的加入比色管，使用40 g/l的氫氧化鈉溶液滴，然后再使用水浴加熱，使溫度達(dá)到需求的高度，然后將水冷卻，冷卻后的水中取一小部分，對(duì)于樣品測(cè)定，樣品使用黃酒50ml，顯示顏色，利用40 g/l的氫氧化鈉溶液，加入沸水。在黃酒樣品50ml的樣品比色管加入40g/l的氫氧化鈉溶液滴，水浴加熱，加熱1-2min，用10ml的水冷卻，用1.0μL的正己烷層進(jìn)行色譜工作站采樣。然后自動(dòng)計(jì)算。

自動(dòng)計(jì)算。利用正己烷層色譜法樣品工作站，自動(dòng)計(jì)算。

實(shí)驗(yàn)方法

繪制甜蜜素的分離效率和線性關(guān)系。首先要準(zhǔn)備好環(huán)己醇的酯化反應(yīng)，在反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)候，加入適量的亞硝酸鹽。在色譜中，不同的峰值會(huì)影響時(shí)間的調(diào)整，葡萄酒樣品約保存6.5分鐘，確保消除可能的影響。其他使用混合色譜，甜蜜素保存0～5min。計(jì)算出之間的線性關(guān)系的。檢出的方法要根據(jù)儀器的進(jìn)行計(jì)算，檢出0.0085g/l（10ml樣品）的樣品。

實(shí)驗(yàn)方法的條件。使用溫度檢測(cè)器，再使用氮?dú)庾鳛橥庠诘臈l件，以此來(lái)提高試驗(yàn)的整體的環(huán)境經(jīng)對(duì)于試驗(yàn)的影響，以此同時(shí)控制好溫度。氫氣流量為30ml/min，保持300ml/min的空氣氣泡速度，使用1.0μl的試樣，分比為1/100。在柱箱中溫度保持100℃，保溫4min。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別使用10mg，15mg/ml的甜蜜素，標(biāo)準(zhǔn)為0.1，0.25，0.5，2.5，加入5.00ml水至50ml比色管中，以保證甜蜜素濃度相當(dāng)于0.1、0.25、0.5、2.5、5 g / L，然后進(jìn)行冰浴，把亞硝酸鈉進(jìn)行充分冷卻，使用2.5ml硫酸，攪拌，然后冰浴30min。5-8min進(jìn)行一次精確距離測(cè)量，用正己烷和5.00ml 2.5 g氯化鈉，用螺旋混合儀器混合10s，分層后用10ml正己烷加入比色管內(nèi)，然后分離。1 0μL的正己烷光滑試樣可以測(cè)定在色譜峰面積中的甜蜜素，經(jīng)工作站處理數(shù)據(jù)設(shè)計(jì)自動(dòng)標(biāo)準(zhǔn)回歸曲線和計(jì)算公式。

結(jié)果和討論

根據(jù)分離效率和線性關(guān)系判斷環(huán)己醇的酯化反應(yīng)，在這些條件下，亞硝酸鹽將甜蜜素完全分離，保留時(shí)間3min，所有其他峰的時(shí)間約6.5min，消除其他可能的混雜的影響峰的色譜的物質(zhì)。甜蜜素使用0-5.0g/l，其線性度好。根據(jù)儀器的噪聲進(jìn)行計(jì)算，取三次的平均值，檢驗(yàn)10ml的樣品。樣品分析的準(zhǔn)確度和回收率很有限，只有恢復(fù)了2.6%，精密度和回收率試驗(yàn)具有較低的價(jià)值和標(biāo)記值。質(zhì)量協(xié)會(huì)根據(jù)能力驗(yàn)證的評(píng)價(jià)報(bào)告顯示，結(jié)果表明測(cè)試能力實(shí)現(xiàn)非常滿意的，回收的實(shí)踐試驗(yàn)方法的準(zhǔn)確度和精密度是理想的。影響因素，使用抽樣法，樣品首先用酒精在40g/l的氫氧化鈉溶液中煮沸，加入在堿性的酒精后，采用樣本分析。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方式。樣品首先在酒精中加入硫酸鈉溶液，沸騰的水混合堿性的酒精后，通過(guò)對(duì)樣本進(jìn)行測(cè)量得出結(jié)果。使用標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的提取，然后注射甜蜜素，其質(zhì)量存在以下缺點(diǎn)：（1）如果標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)時(shí)，發(fā)生一定的誤差，將直接影響到整個(gè)結(jié)果，太多的標(biāo)準(zhǔn)方法可以通過(guò)計(jì)算錯(cuò)誤恢復(fù)平衡。（2）隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，目前許多實(shí)驗(yàn)室使用自動(dòng)進(jìn)樣器，配備高端設(shè)備具有更好的效率，但是受到分析柱的容量的限制，在使用這種小型的儀器的時(shí)候會(huì)有一定的困難，所以在試驗(yàn)的時(shí)候我們并不能進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)狀況下的取樣和分離，所以需要思考尋找一個(gè)大容量的進(jìn)樣器，最好可以選擇自動(dòng)控制的取樣器。進(jìn)樣量是常數(shù)，試驗(yàn)方法體積小，不能改變采樣方法。

標(biāo)準(zhǔn)方法。在其他工程項(xiàng)目的實(shí)施中使用渦流混合進(jìn)行，繪制渦的線性關(guān)系，精密度和回收率有保證，還可以防止有機(jī)氣體產(chǎn)生的現(xiàn)象，保證最高效率的一致性。

數(shù)量分析。在這個(gè)實(shí)驗(yàn)中，試劑的體積減少了一半，結(jié)果表明要求得到滿足，只有50毫升比色管可以作為在實(shí)驗(yàn)室中的常用工具，50毫升比100毫升使用更加方便。

分離效率和線性關(guān)系。甜蜜素，環(huán)己醇的酯化反應(yīng)條件下需要硝酸鹽，色譜中其他的峰分離完全，葡萄酒樣品約保持6.5分鐘，確保消除可能的影響，色譜檢驗(yàn)甜蜜素在0～5分鐘之內(nèi)完成，建立之間的線性關(guān)系。

根據(jù)儀器計(jì)算。檢驗(yàn)0.0085g/L的樣品。

精密度及回收率。精密度及回收率的測(cè)定是有限的，只適用于兩個(gè)平行樣品的恢復(fù)，RSD為2.6 %，然后進(jìn)行精密度和回收率試驗(yàn)。

精度測(cè)量。本次驗(yàn)證統(tǒng)計(jì)分析包括Z值的分析，在實(shí)驗(yàn)室中已經(jīng)檢測(cè)出來(lái)。質(zhì)量協(xié)會(huì)的驗(yàn)證報(bào)告指出，對(duì)該中心的檢測(cè)報(bào)告顯示的結(jié)果非常滿意，認(rèn)為審計(jì)實(shí)際的結(jié)果比理想的準(zhǔn)確度和精密度更高。