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    豬肺炎支原體對白細(xì)胞介素(IL-1β)的影響

    2011-09-11 04:30:10劉朋軍
    關(guān)鍵詞:介素稀釋液白細(xì)胞

    劉朋軍

    (石樓縣動物疫病預(yù)防控制中心,山西 石樓032500)

    因此,研究豬肺炎支原體侵染后機(jī)體細(xì)胞免疫系統(tǒng)的變化將有助于對豬支原體肺炎致病性的診斷,有助于在現(xiàn)有基礎(chǔ)上對藥物、疫苗的研制和開發(fā),為臨床治療豬支原體肺炎提供理論依據(jù)。白細(xì)胞介素(IL-1β)是參與細(xì)胞免疫的重要的細(xì)胞因子,通過對豬肺炎支原體感染后機(jī)體血清中白細(xì)胞介素(IL-1β)的測定,可以測定機(jī)體細(xì)胞免疫的情況,從而進(jìn)一步診斷豬支原體肺炎。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)動物

    試驗(yàn)用無支原體肺炎長白豬8只,由山西省太谷縣振興養(yǎng)豬場提供的斷奶仔豬,體重為6.28~8.54kg,健康狀況良好,飼料由實(shí)驗(yàn)中心自配。

    1.2 主要試劑

    JM109型豬肺炎支原體,小鼠重組IL-1β凍干標(biāo)準(zhǔn)品,樣品稀釋液,生物素標(biāo)記抗小鼠IL-1β,抗體稀釋液,親和素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC),ABC稀釋液,TMB顯色液,TMB終止液等試劑由北京博奧深公司提供。0.01mol·L-1PBS,豬肺炎支原體特異性抗體自制。

    在豬60日齡時隨機(jī)分成2組,每組4頭,分別是空白對照組、攻毒組,每頭豬都注射5頭份。

    1.3 試驗(yàn)方法

    1.3.1 樣本的采集與處理

    在攻毒前采集血液,不作抗凝處理,以備血清學(xué)檢測用。分別于攻毒后第7d、14d、21d時,腹腔靜脈采血,編號,血液不作抗凝處理,2000r·min-1離心10min,將血清裝入EP管,置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.3.2 檢測指標(biāo)及方法

    1.3.2.1 攻毒前血清中豬肺炎支原體的檢測

    用定性玻片凝集試驗(yàn)進(jìn)行檢測。取豬肺炎支原體特異性抗體和攻毒前所采血清0.03mL,于載玻片上充分混合,放置3min后判定結(jié)果。

    當(dāng)前本校市場營銷專業(yè)建設(shè)的主要特色表現(xiàn)在下列兩個方面:①醫(yī)藥背景突出。本校市場營銷專業(yè)課程體系主要由藥學(xué)課程、營銷類課程、工商管理類課程等組成,其中藥學(xué)課程占相當(dāng)一部分比例。同時借助醫(yī)藥院校自身的背景,擁有醫(yī)藥方面的師資力量、實(shí)驗(yàn)設(shè)備、圖書資料等,具有先天性優(yōu)勢,這是一般院校難以比擬的。②學(xué)生就業(yè)前景較好。本校醫(yī)藥營銷專業(yè)學(xué)生的就業(yè)率一直以來保持在非常高的水平,就業(yè)率接近100%。

    1.3.2.2 血清中IL-1β含量的測定

    將 500.0ng·L-1,250.0ng·L-1,以 及125.0ng·L-1,62.5ng·L-1,31.3ng·L-1,15.6ng·L-1,7.8ng·L-1的標(biāo)準(zhǔn)品各0.1mL一次加入一排七孔中,最后一孔只加樣品稀釋液的作為零孔。將準(zhǔn)備好的生物素抗小鼠IL-1β抗體工作液按每孔0.1mL依次加入。37℃反應(yīng)60 min。

    將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1mL依次加入。37℃反應(yīng)30min。按每孔90μL依次加入已在37℃平衡30min的TMB顯色液,37℃避光反應(yīng)20min。按每孔加入0.1mL依次加入TMB終止液,用酶標(biāo)儀在450nm測定OD值。

    1.4 數(shù)據(jù)處理

    測定結(jié)果用spass16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 攻毒前血清中豬肺炎支原體的檢測結(jié)果

    攻毒前血清中未發(fā)生凝集,說明攻毒前豬體內(nèi)不含豬肺炎支原體。

    2.2 各組豬血清白細(xì)胞介素(IL-1β)含量測定結(jié)果

    統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,攻毒組在三個時間點(diǎn)血清IL-1β含量都高于對照組,攻毒7d、14d、21d后血清IL-1β含量與對照組血清IL-1β含量相比較,差異顯著(P<0.05)。攻毒組在攻毒14d后血清IL-1β含量高于攻毒7d后血清IL-1β含量,二者差異顯著(P<0.05)。攻毒組在攻毒14d后血清IL-1β含量高于攻毒21d后血清IL-1β含量,二者差異顯著(P<0.05)(見表1)。

    表1 各組豬血清IL-1β含量測定值/ng·L-1Table 1 Contents of IL-1βin serum in pigs/ng·L-1

    3 討論

    白細(xì)胞介素-1(interleukin-1,IL-1)包括三個氨基酸序列高度同源的蛋白質(zhì):IL-1α、IL-1β和IL-1Ra(或IL-1γ)。它是由多種細(xì)胞產(chǎn)生、有多方面生物學(xué)功能的細(xì)胞因子,在調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)中有重要作用。眾多的生物學(xué)效應(yīng)使其在免疫系統(tǒng)中成為一種起中心作用的細(xì)胞因子。最近的研究進(jìn)一步從基因水平上揭示出了IL-1與疾病發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系[4]。

    Mhp感染的一個特征是大量的免疫粒細(xì)胞在肺組織積聚[5]。一些細(xì)胞因子,包括IL-1,TNF-α和IL-6,已經(jīng)在Mhp感染的豬的呼吸道灌洗液中檢測到[6,7]。TNF-α和IL-1能刺激幾乎所有的炎癥反應(yīng)。由其產(chǎn)生的IL-6是致熱原,能誘導(dǎo)急性期反應(yīng)物的產(chǎn)生。在豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)和 Mhp共感染中,IL-1α、IL-1β、IL-8和TNF的增加表明,細(xì)胞因子誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)在支原體肺炎中起重要作用[8,9]。白細(xì)胞介素1與其特異受體結(jié)合后,通過某些調(diào)節(jié)蛋白作用,激活胞膜上或胞漿內(nèi)的多種磷脂酶,產(chǎn)生多種信使類物質(zhì)。此外,近年來還發(fā)現(xiàn)白細(xì)胞介素1可激活多種蛋白激酶和轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子。不同傳導(dǎo)途徑的細(xì)胞信號與白細(xì)胞介素1導(dǎo)致的炎癥效應(yīng)密切相關(guān)[10]。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明豬肺炎支原體感染后機(jī)體的IL-1β的含量在攻毒后第二周左右達(dá)到最大值,攻毒后到第二周之前IL-1β的含量逐漸升高,第二周之后IL-1β的含量逐漸降低。IL-1β是介導(dǎo)細(xì)胞免疫的重要因子,隨著Mhp感染的加劇而增加含量,從而進(jìn)一步可預(yù)測其他細(xì)胞因子的含量也會提高,可預(yù)測在豬肺炎支原體侵染機(jī)體后,細(xì)胞免疫系統(tǒng)激活,與體液免疫、黏膜免疫共同作用,提高機(jī)體的抵抗能力。

    4 結(jié)論

    豬肺炎支原體使白細(xì)胞介素(IL-1β)的含量顯著增強(qiáng),可以通過檢測IL-1β來判斷是否患有豬肺炎支原體,從而為快速地檢測和診斷豬肺炎支原體提供了理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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