母乳中核酸類物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)研究

（內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司，呼和浩特 010110）

母乳中核酸類物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)研究

方芳,李婷，司徒文佑,葉文慧，劉彪，云戰(zhàn)友

（內(nèi)蒙古伊利實(shí)業(yè)集團(tuán)股份有限公司，呼和浩特 010110）

利用核酸檢測技術(shù)，通過對母乳初乳、成熟中核酸類物質(zhì)進(jìn)行檢測，以分析不同泌乳期母乳核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的變化，旨為我國母乳研究積累數(shù)據(jù)，并為開發(fā)接近我國母乳的嬰兒配方粉提供依據(jù)。本研究對母乳中核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行測定，分析了母乳核酸類物質(zhì)在不同泌乳期的質(zhì)量分?jǐn)?shù)及變化情況，以指導(dǎo)我國嬰兒粉產(chǎn)品的開發(fā)。

母乳，核酸類物質(zhì)，質(zhì)量分?jǐn)?shù)

0 引言

核苷酸是嬰兒早期營養(yǎng)成分中非常重要的免疫功能成分，在國內(nèi)外早已引起廣泛關(guān)注。母乳中存在豐富的、配比恰當(dāng)?shù)暮塑账幔瑢雰喊l(fā)育起著非常重要的作用[1-6]，在國外嬰兒配方奶粉中核苷酸早已被應(yīng)用[7-9]，而我國目前對這方面的研究卻很少，2008年，我國衛(wèi)生部已允許將核苷酸作為營養(yǎng)強(qiáng)化劑添加到嬰兒配方粉中，添加量為0.12～0.58 g/kg（以核苷酸總量計），但沒有規(guī)定5種核苷酸分量的添加量，因此只有研究出母乳中5種核苷酸分量的比例，才能真正達(dá)到模擬母乳核苷酸的目的。通過本研究，伊利集團(tuán)針對母乳中的核苷酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行研究，以期實(shí)現(xiàn)嬰兒配方奶粉中核苷酸的添加量接近中國母乳。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1材料與試劑

核苷酸標(biāo)準(zhǔn)混合液，蛋白酶，磷酸鹽緩沖液，磷酸氫二鉀，磷酸二氫鉀，四丁基硫酸氫銨，甲醇等試劑為分析純。

1.2儀器與設(shè)備

Waters 1525高效液相色譜儀，超聲波振蕩器。

1.3方法

1.3.1 母乳樣本的采集及處理

本研究采集母乳初乳45份（產(chǎn)后1～7 d的母乳），母乳成熟乳（產(chǎn)后16～60 d的母乳）40份，每份采集量為30 mL，冷藏運(yùn)送，-80℃冰柜保存待測。

1.3.2 母乳核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定

母乳核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)檢測方法參考Randall L等[10]的高效液相色譜法進(jìn)行檢測。

2 結(jié)果與分析

2.1母乳核酸類物質(zhì)總量的研究

表1為不同泌乳期母乳中核酸類物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化。

表1 母乳中核酸類物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)變化 mg/g

由表1可以看出，母乳初乳與成熟乳的核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)差異不大，成熟乳略高于初乳。母乳初乳核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.441 mg/g,成熟乳為0.494 mg/g。這與Randall L等[10]研究的亞洲母乳，包括菲律賓、香港、新加坡等國家的核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)隨泌乳期的變化趨勢相一致，即隨著泌乳期的延長，核酸類物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)略有升高。James L Leach等[11]將歐洲母乳初乳的核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)與成熟乳進(jìn)行了對比，結(jié)果再次證明了隨著泌乳期的延長，核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)略有上升。

人乳中的核酸由核糖核酸類物質(zhì)和脫氧核糖核酸類物質(zhì)構(gòu)成[12]。無論初乳還是成熟乳，核糖核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)都非常豐富，而脫氧核糖核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)很少，核糖核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)占總核酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)的98%。因此，對于嬰兒核酸類物質(zhì)的補(bǔ)充，重點(diǎn)在于嬰兒配方奶粉中添加核糖核酸類物質(zhì)及其代謝產(chǎn)物。這也與嬰兒配方奶粉的法規(guī)添加要求，即核酸的添加僅可以通過核糖核苷酸鈉鹽來實(shí)現(xiàn)相一致[13]。因此，對嬰兒配方奶粉中添加以脫氧核糖核酸類物質(zhì)為原料的核酸，暫不做考慮。

2.2母乳游離核苷酸和非游離態(tài)核苷酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)

表2為母乳游離核苷酸和非游離核苷酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)。由表2可以看出，母乳初乳中游離（脫氧）核苷酸總量為0.301 mg/g，非游離（脫氧）核苷酸總量為0.14 mg/g；母乳成熟乳中游離（脫氧）核苷酸總量為0.342 mg/g，非游離（脫氧）核苷酸總量為0.153 mg/g。母乳初乳和成熟乳游離與非游離（脫氧）核苷酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)幾乎沒有差別。這與Randall L等[10]研究的結(jié)果相一致，初乳與成熟乳中游離核苷酸含量差異不大，并且初乳與成熟乳中非游離核苷酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)差異也無明顯差異。

表2 母乳游離核苷酸和非游離核苷酸質(zhì)量分?jǐn)?shù) mg/g

從核酸類物質(zhì)游離態(tài)和非游離態(tài)成分比例來看，本次研究母乳初乳游離核苷酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)占總核糖核酸類物質(zhì)質(zhì)量分?jǐn)?shù)的68%，非游離態(tài)占32%；母乳成熟乳游離核苷酸占總RNA的69%，非游離核苷酸占總RNA的31%。Randall L等[10]研究亞洲母乳非游離核苷酸占總TPAN的43.3%，游離核苷酸占總TPAN的39.9%。James L Leach等[11]研究歐洲母乳游離核苷酸占總TPAN的53%，非游離核苷酸占總TPAN的48%。本次結(jié)果游離核苷酸與非游離核苷酸的比例與文獻(xiàn)母乳研究有些差別。文獻(xiàn)母乳游離與非游離的比例接近1∶1，但本研究母乳中仍然以游離核苷酸為主。

2.3各種核苷及核苷酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)

表3為母乳游離和非游離態(tài)中各種核苷及核苷酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)。由表3可以看出，初乳游離核苷酸中CMP為0.22 mg/g，UMP為0.053 mg/g，AMP為0.016 mg/g，GMP為0.001 mg/g；非游離核苷酸中CMP為0.038 mg/g，UMP為0.016 mg/g，AMP為0.021 mg/g，GMP為 0.061 mg/g。成熟乳中游離核苷酸中CMP為0.259 mg/g，UMP為0.05 mg/g，AMP為0.018 mg/g，GMP為0.007 mg/g；非游離核苷酸中CMP為0.054 mg/g，UMP為0.0.17 mg/g，AMP為0.03 mg/g，GMP為0.05 mg/g?？梢钥闯觯怯坞x核苷酸中，GMP質(zhì)量分?jǐn)?shù)較高，可能由于母乳中多聚核苷酸鏈中，除以胞嘧啶核苷為主外，鳥嘌呤核苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)也較高。

表3 母乳中各種核苷酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù) mg/g

人乳中除含有游離核苷酸和核苷外，核苷酸的合成物（如NAD和UDP葡萄糖），寡聚和多聚核糖核酸（如RNA）也可通過消化和代謝作為人乳中核苷和核苷酸的潛在來源，我們將這些核苷、核苷酸、寡聚和多聚核糖核酸及其衍生物的總量稱之為潛在可利用核苷總量（TPAN）[14]。Randall L等[10]對香港人乳中TPAN進(jìn)行了檢測，質(zhì)量濃度為59～76.1 mg/L，并分析了不同泌乳期TPAN中每種成分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，發(fā)現(xiàn)多聚（或寡聚）核糖核酸（占TPAN的43.3%）和游離核苷酸（占TPAN的39.9%）是人乳中TPAN的主要來源,核苷和核苷酸的合成物均占總TPAN的8%～9%左右。Leach JL[11]同樣也驗(yàn)證了這樣的觀點(diǎn)，美國人乳中TPAN質(zhì)量濃度為68 mg/L，歐洲人乳為72 mg/L。TPAN中各組分所占比例也與Randall L報道的數(shù)據(jù)相近。Thorell[15]等對瑞士母乳中除了核苷酸的合成物的TPAN進(jìn)行了檢測，質(zhì)量濃度為54 mg/L，若按照核苷酸加合物占9%考慮，人乳中的TPAN也與上述報道一致。因此，人乳中總的核苷酸質(zhì)量濃度為60～72 mg/L。

3 結(jié)論

本研究對母乳初乳和母乳成熟乳中核酸類物質(zhì)的總量及每種核苷酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)進(jìn)行了研究，得出了母乳中潛在可被利用的核苷酸總量及各種核苷酸的比例分布，母乳初乳和成熟乳核酸類物質(zhì)的總量分別為0.44 mg/g粉和0.495 mg/g粉，其中初乳中CMP占總核酸類物質(zhì)的60.56%，UMP占16.20%，GMP占14.79%，AMP占8.45%，成熟乳中CMP占總核酸類物質(zhì)的64.54%，UMP占13.81%，GMP占11.96%，AMP占9.69%。將母乳中核酸類物質(zhì)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)及比例與國外母乳及市售嬰兒粉進(jìn)行對比后發(fā)現(xiàn)了一些明顯的差異，因此今后我們將持續(xù)研究，按照中國母乳核苷酸比例進(jìn)行功能效果研究，實(shí)現(xiàn)在嬰兒配方奶粉中添加中國母乳比例的核苷酸，達(dá)到預(yù)期核苷酸所帶給嬰兒的提高免疫[16-19]，維護(hù)腸道健康[20-22]等作用。

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Study on nucleic acid concentration in human milk

FANG Fang，LITing，SITU Wenyou，YE Wenhui，LIU Biao，YUN Zhanyou
（Inner Mongolia Yili Industrial Group Co.,Ltd,Hohhot 010110，China）

Using nucleic acid detection technology，by expressing colostrum and mature milk,we detected nucleic acid,nucleotides and nu?cleosides level of breast milk,and analysed nucleic acid level at different lactation.The aim of the study was to accumulate data for research on Chinese breast milk,and to provide reference for manufacturing infant formula suitable for Chinese infants.The concentration of nucleic acid in breast milk was measured.Then analysed the disparity of nucleic acid at different stages was analysed，to guide the development of in?fant formula.

human milk；nucleic acid；concentration

Q936

A

1001-2230（2017）04-0011-03

2016-07-22

“十二五”國家科技支撐計劃項目(2013BAD18B03)。

方芳（1981-），女，工程師，研究方向?yàn)槿槠窢I養(yǎng)。