中藥補陽還五湯熏蒸治療腦梗死機制的研究

王有科+覃興樂+唐漢慶+農(nóng)峰+藍(lán)嬌娜+黃岑漢

【摘要】目的探討中藥補陽還五湯熏蒸對腦梗死治療作用的分子機制。

方法選擇41例腦梗死患者，在中藥補陽還五湯熏蒸治療前后分別采集血清進(jìn)行雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，比較治療前后患者血清血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的表達(dá)水平，分析VEGF、BDNF表達(dá)水平之間的線性關(guān)系。

結(jié)果治療前后患者血清VEGF、BDNF表達(dá)水平差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），治療后血清VEGF、BDNF表達(dá)水平顯著高于治療前。血清VEGF、BDNF表達(dá)水平相關(guān)不顯著（P>0.05）。

結(jié)論中藥補陽還五湯熏蒸治療可顯著升高腦梗死患者血清VEGF、BDNF表達(dá)水平，提示其可能對腦梗死具有較好的治療作用。

【關(guān)鍵詞】中藥熏蒸；補陽還五湯；腦梗死

中圖分類號：R743.33文獻(xiàn)標(biāo)識碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2017.02.007

【Abstract】ObjectiveTo explore the molecular mechanism of treatment effect of Buyang Huanwu Decoction on cerebral infarction.

Methods41 patients with cerebral infarction were selected，and double antibody sandwich enzymelinked immunosorbant assay（ELISA） was used to detect serums which were respectively collected before and after treatment.In addition，expression levels of vascular endothelial growth factor（VEGF） and brain derived neurotrophic factor（BDNF） were compared before and after treatment，and linear relationship between the expression levels of the VEGF and BDNF was analyzed.

ResultsBefore and after treatment，difference of the expression levels of VEGF and BDNF was statistically significant（P<0.01），and after treatment，the expression levels of them were significantly higher than those before treatment.There was no significant correlation between the expression levels of serum VEGF and BDNF（P>0.05）.

ConclusionTraditional Chinese medicine Buyang Huanwu Decoction can significantly increase the expression levels of serum VEGF and BDNF in patients with cerebral infarction，which suggests that it may have a better therapeutic effect on cerebral infarction.

【Key words】traditional Chinese medicine fumigation；Buyang Huanwu Decoction；cerebral infarction

腦卒中主要分出血性和缺血性。我國現(xiàn)有腦卒中患者約700萬例，其中缺血性腦卒中（即腦梗死）占比最高，約為80%[1]，僅腦卒中治療費用即約400億元/年[2]。國內(nèi)外對腦梗死進(jìn)行了大量的研究，但治療上仍未獲得重大突破，目前仍沒有確切的治療方法來減輕神經(jīng)損傷，多年來唯一被美國FDA 批準(zhǔn)用于腦卒中的藥物只有組織纖溶酶原激活劑（tPA）[3]。從我國傳統(tǒng)中藥材或復(fù)方中篩選多靶點藥物是一個較好的研究方向，對于傳統(tǒng)醫(yī)藥資源保護和攻克腦卒中均具有重要意義[4]。在使用西藥的基礎(chǔ)上聯(lián)合口服或鼻飼中藥補陽還五湯，能顯著促進(jìn)腦梗死患者的神經(jīng)功能恢復(fù)[5]。近年來，采用中藥熏蒸治療腦卒中取得了良好的效果，但研究主要是對其療效做局部機理的探討，認(rèn)識停留在宏觀甚至僅僅限于推理。本研究使用中藥補陽還五湯熏蒸法對腦梗死患者進(jìn)行治療研究，采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測41例桂西地區(qū)缺血性腦卒中患者血液血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子（BDNF）的表達(dá)水平，初步探討中藥熏蒸對腦卒中康復(fù)患者腦功能重組的影響情況及其康復(fù)機理。

1對象與方法

1.1研究對象

選擇2016年1月至10月在右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院康復(fù)醫(yī)學(xué)科與神經(jīng)內(nèi)科住院患者41例，均符合全國第四屆腦血管病學(xué)術(shù)會議制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)，并經(jīng)頭顱CT或MRI檢查確診為缺血性腦卒中（腦梗死）。其中男23例，女18例，平均年齡（67.56±7.68）歲。

1.2病例納入與排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）初次發(fā)病，年齡30～80歲，經(jīng)頭顱CT或MRI證實，一側(cè)偏癱，病程<6個月；（2）無認(rèn)知功能障礙；（3）日常生活活動能力量表Barthel（BI）指數(shù)>40分的病人；血壓<170/95 mmHg；（4）無嚴(yán)重心肺等全身性疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）嚴(yán)重言語、注意力、聽覺、視覺、智力、精神或認(rèn)知障礙（簡明精神狀態(tài)檢查表MMSE<27分）；（2）嚴(yán)重痙攣或疼痛；（3）骨關(guān)節(jié)肌肉疾患、其他嚴(yán)重神經(jīng)系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤和嚴(yán)重心肺肝腎損害等；（4）外地?zé)o法隨訪；（5）體內(nèi)有金屬異物；（6）酒精或藥物成癮等；（7）復(fù)發(fā)型腦卒中患者。

1.3方法

1.3.1樣本收集

治療前后24 h內(nèi)于受試者肘正中靜脈抽取3 ml空腹血置于促凝管中，促凝血分離血清后用于檢測VEGF和BDNF水平。

1.3.2熏蒸方法

采用大連鵬達(dá)醫(yī)療器械有限公司SZ88II型多功能熏蒸治療儀給予中藥熏蒸患側(cè)。水溫控制在40℃，每日熏蒸1次，每次30 min。10次為1個療程，共2個療程。

1.3.3中藥熏蒸藥方

采用腦中風(fēng)后遺癥治療方補陽還五湯，以黃芪益氣，當(dāng)歸養(yǎng)血，合赤芍、川芎、紅花、地龍活血化瘀通經(jīng)通絡(luò)。具體為：黃芪60 g，當(dāng)歸30 g，赤芍30 g， 紅花30 g，川芎30 g，地龍30 g，桃仁30 g。

1.3.4檢測方法

VEGF、BDNF的表達(dá)水平由ELISA法檢測，ELISA試劑盒由武漢博士德生物工程有限公司提供，并嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作。

1.4統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行分析，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（〖AKx-D〗±s）表示，治療前后變量的比較采用配對樣本t檢驗，相關(guān)性運用Pearson相關(guān)分析法，檢驗水準(zhǔn)：α=0.05，雙側(cè)檢驗。

2結(jié)果

2.1血清VEGF、BDNF標(biāo)準(zhǔn)品的OD值

不同濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品的OD值，如表1所示。

2.2治療前后VEGF、BDNF的表達(dá)水平

治療后VEGF、BDNF的表達(dá)含量均明顯高于治療前的表達(dá)含量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），提示中藥補陽還五湯熏蒸法可能對腦梗死具有較好治療作用。見表2。

2.3患者血清VEGF、BDNF表達(dá)水平的相關(guān)性

經(jīng)Pearson線性相關(guān)分析，患者血清VEGF、BDNF表達(dá)水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義（r=0.171，P=0.286>0.05），提示患者血清VEGF、BDNF表達(dá)水平相關(guān)不顯著。

3討論

腦梗死是常見的腦血管病變，因其具有高發(fā)病率、高死亡率、高致殘率的“三高”特點，一直以來都是臨床治療與研究的難點與熱點[6]。國內(nèi)外進(jìn)行了大量的基礎(chǔ)研究，發(fā)現(xiàn)血清VEGF、BDNF含量與大腦神經(jīng)功能恢復(fù)關(guān)系密切，Jiang等[7]對腦梗死大鼠進(jìn)行重復(fù)耳迷走神經(jīng)刺激治療，檢測其BDNF和VEGF的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)BDNF和VEGF含量顯著升高，認(rèn)為腦梗死后可能通過上調(diào)大鼠腦的BDNF和VEGF含量以實現(xiàn)神經(jīng)保護作用。Atif等[8]研究黃體激素對小鼠腦梗死急性發(fā)作期BDNF、VEGF含量的影響，也發(fā)現(xiàn)黃體激素治療后通過升高小鼠BDNF、VEGF含量，對梗死的小鼠大腦具有治療作用。Alhusban等[9]研究發(fā)現(xiàn)坎地沙坦也是通過增加腦梗死大鼠血清VEGF、BDNF含量，從而促進(jìn)大腦神經(jīng)功能的恢復(fù)。此外，多項人體研究也均發(fā)現(xiàn)[10～11]，在原治療基礎(chǔ)上加用補陽還五湯口服后可有效改善患者的神經(jīng)功能及預(yù)后，病例組治療效果顯著優(yōu)于對照組，但血清VEGF、BDNF含量改變情況有待進(jìn)一步研究。

然而，當(dāng)前鮮見國內(nèi)外采用中藥補陽還五湯熏蒸治療腦卒中的相關(guān)研究。因此，本研究以41例腦梗死患者作為研究對象，采用中藥補陽還五湯熏蒸治療，治療前后采集患者血液樣本，采用ELISA技術(shù)對血清VEGF、BDNF表達(dá)水平進(jìn)行檢測，初步探討中藥補陽還五湯熏蒸治療腦梗死的分子機制。我們發(fā)現(xiàn)，腦梗死患者血清VEGF、BDNF表達(dá)水平在中藥補陽還五湯熏蒸治療后顯著升高，提示中藥補陽還五湯熏蒸法對腦梗死具有較好的治療作用。同時，我們還分析了患者血清VEGF、BDNF表達(dá)水平的相關(guān)性，結(jié)果顯示兩者相關(guān)無顯著性，可能因影響VEGF、BDNF表達(dá)水平的因素較多，機制較為復(fù)雜，也可能因樣本量較小，有待進(jìn)一步深入研究。此外，在臨床操作過程中，因熏蒸療程較長，患者每次均需脫掉衣服，偶有受涼感冒，且熏蒸過程中偏癱患者偶有燙傷情況出現(xiàn)，考慮此可能為患者對中藥熏蒸療法的依從性偏低的主要原因。

綜上，中藥補陽還五湯熏蒸治療腦梗死，可明顯升高VEGF、BDNF表達(dá)水平，對腦梗死具有治療作用，但其具體機制有待進(jìn)一步研究。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，相信中藥補陽還五湯熏蒸治療腦梗死的機理將會得到更深入的發(fā)現(xiàn)，綜合考慮腦梗死患者的各種危險因素[12]，并借助先進(jìn)的技術(shù)對此進(jìn)行深入研究，為臨床應(yīng)用中藥熏蒸治療腦卒中偏癱的機理提供循證依據(jù)，對推廣中醫(yī)藥治療腦卒中的康復(fù)技術(shù)具有重要意義。

參考文獻(xiàn)

[1]中華醫(yī)學(xué)會神經(jīng)病學(xué)分會腦血管病學(xué)組急性缺血性腦卒中診治指南撰寫組.中國急性缺血性腦卒中診治指南2010[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2011，14（35）：40134017.

[2]謝青.腦卒中的康復(fù)治療現(xiàn)狀[J].內(nèi)科理論與實踐，2012，7（2）：8690.

[3]李旭，劉慶山.抗腦卒中藥物的研究進(jìn)展[J].中央民族大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2013，22（1）：5659.

[4]劉慶山，方亮，王維群，等.基于神經(jīng)血管單元和網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)理論的抗腦卒中神經(jīng)病變靶點分析[J].中國中藥雜志，2012，37（2）：138141.

[5]吳向梅，寧智飛，葉虹，等.補陽還五湯結(jié)合rtPA靜脈溶栓治療急性腦梗死患者近、遠(yuǎn)期療效[J].廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2016，33（6）：778781.

[6]楊湘英，徐雯.腦卒中康復(fù)期患者下尿路癥狀發(fā)生情況及危險因素分析[J].中國康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志，2012，27（11）：10461048.

[7]Jiang Y，Li L，Ma J，et al.Auricular vagus nerve stimulation promotes functional recovery and enhances thepostischemic angiogenic response in an ischemia/reperfusion rat model[J].Neurochem Int，2016，97：7382.

[8]Atif F，Yousuf S，Stein DG.Progesterone in the treatment of neonatal arterial ischemic stroke and acute seizures：Role of BDNF/TrkB signaling[J].Neuropharmacology，2016，107：317328.

[9]Alhusban A，Kozak A，Eldahshan W，et al.Artery reopening is required for the neurorestorative effects of angiotensin modulation after experimental stroke[J].Experimental & Translational Stroke Medicine，2016，8（1）：17.

[10]趙素娟，董永書.補陽還五湯治療氣虛血瘀型腦梗死的臨床效果觀察[J].河南醫(yī)學(xué)研究，2016，25（11）：19721973.

[11]李棟山.補陽還五湯合并納洛酮、銀杏達(dá)莫治療急性腦梗死50例療效觀察[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志，2016，3（28）：55545555.

[12]王有科，覃興樂，唐漢慶，等.桂西地區(qū)腦卒中危險因素Logistic回歸分析[J].右江醫(yī)學(xué)，2016，44（4）：384387.

（收稿日期：2016-12-22 修回日期：2016-3-24）

（編輯：梁明佩）

基金項目：廣西醫(yī)藥衛(wèi)生自籌經(jīng)費計劃課題（Z2014513）；2014年廣西高校重點實驗室開放課題（右醫(yī)科字〔2014〕2號）

作者簡介：王有科，男，在讀碩士研究生，研究方向：腦血管意外后遺癥的中西醫(yī)結(jié)合康復(fù)。Email：1324139292@qq.com

▲通信作者：黃岑漢。Email：h1975@qq.com