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    AEG—1、P16、KI—67蛋白在宮頸癌前病變中的表達(dá)與臨床意義

    2017-05-12 07:55:36趙娟馬唯吳林林陳隈陟劉鳳閣
    中國性科學(xué) 2016年10期
    關(guān)鍵詞:宮頸癌宮頸病理

    趙娟 馬唯 吳林林 陳隈陟 劉鳳閣

    [摘要]目的:探討AEG-1、P16、KT-67蛋白在宮頸癌前病變中的表達(dá)與臨床意義。方法:2008年2月至2015年9月選擇在我院診治的宮頸癌前病變患者98例作為癌前病變組,同期選擇宮頸癌患者98例作為宮頸癌組和98例健康體檢人作為對照組,取三組的宮頸樣本都進(jìn)行AEG-1、P16、KT-67蛋白表達(dá)的免疫組化分析,并調(diào)查了臨床資料進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果:AEG-1、P16、KT-67蛋白在宮頸癌組的陽性表達(dá)率分別為80.0%、93.9%和92.9%,而癌前病變組為57.1%、50.0%和57.1%,在對照組為3.1%、2.0%和4.1%,三組間對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。AEG-1、P16、KT-67蛋白的陽性表達(dá)與宮頸癌前病變的年齡、疾病類型、HPV感染等病理參數(shù)對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。直線相關(guān)性顯示AEG-1、P16、KT-67蛋白表達(dá)都呈現(xiàn)兩兩正向相關(guān)性(P<0.05)。結(jié)論:AEG-1、P16、KT-67蛋白在宮頸癌前病變中都呈現(xiàn)高表達(dá)狀況,且與臨床病理特征存在相關(guān)性,三者可互相作用影響宮頸癌前病變的發(fā)展?fàn)顩r。

    [關(guān)鍵詞]AEG-1;P16;KI-67;宮頸癌前病變;相關(guān)性

    宮頸癌是女性最為常見惡性腫瘤之一,我國當(dāng)前宮頸癌的發(fā)生率逐漸增高,且呈現(xiàn)年輕化趨勢。宮頸上皮內(nèi)瘤變(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)為常見的宮頸癌前病變,不過發(fā)展為宮頸癌的時間比較長,一般在15年左右,在這個時間段可以對宮頸上皮內(nèi)瘤變進(jìn)行有效診斷,從而預(yù)防宮頸癌的發(fā)生。星型膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因-1(Astrocyte elevated gene-1,AEG-1)與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移,血管生成及化療耐藥密切相關(guān),可能是多種腫瘤的一個重要的潛在預(yù)后指標(biāo)。原發(fā)腫瘤因子-16(premature tumor-16,P16)基因為一種細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶的抑制劑,可直接參與細(xì)胞周期調(diào)控,在宮頸癌及癌前病變中p16基因主要表現(xiàn)為過表達(dá)。細(xì)胞增殖核抗原一67(nuclcar-associated antigen KT-67)可能是為DNA復(fù)制提供場所的核基質(zhì)及染色體支架的一種組分,可以用來識別生長期的正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞,可參不驅(qū)動細(xì)胞周期的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。腫瘤惡性程度越高,KT-67蛋白表達(dá)水平越高,腫瘤細(xì)胞增殖越快。本文具體探討了AEG-1、P16、KT-67蛋白在宮頸癌前病變中的表達(dá)與臨床意義,現(xiàn)報道如下。

    1.資料與方法

    1.1研究對象

    2008年2月至2015年9月選擇在我院診治的宮頸癌前病變患者98例作為癌前病變組,同期選擇宮頸癌患者98例作為宮頸癌組和98例健康體檢人作為對照組,納入標(biāo)準(zhǔn):年齡20~70歲;癌前病變與宮頸癌都得到病理證實;均未行放療、化療及免疫治療;知情同意本研究且得到醫(yī)院倫理委員會的批準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn):有免疫缺陷疾?。患韧袑m頸病變史。癌前病變組中年齡最小35歲,最大68歲,平均年齡(61.34±4.52)歲;平均體重指數(shù)為(21.47±2.44)kg/m2;疾病類型:CIN I型40例,CINⅡ型40例,CINⅢ型18例。宮頸癌組中年齡最小42歲,最大69歲,平均年齡(60.67±3.18)歲;平均體重指數(shù)(21.22±3.19)kg/m2;病理類型:鱗癌58例,腺癌40例;臨床分期:Ⅰ期44例,Ⅱ期30例,Ⅲ期24例。而對照組中年齡最小22歲,最大68歲,平均年齡(45.67±4.19)歲;平均體重指數(shù)為(21.89±2.22)kg/m2。

    1.2免疫組化方法

    鼠抗人AEG-1單克隆抗體(即用型抗體,批號TA803710)購自R&D公司,鼠抗人P16單克隆抗體(即用型抗體,批號ZM-0205)購自博士得生物有限公司,鼠抗人KT-67單克隆抗體(即用型抗體,批號ST-0910)購自福建邁新生物技術(shù)有限公司。

    DAB顯色試劑盒購自福建邁新生物技術(shù)有限公司(生產(chǎn)批號為20942244),免疫組化染色試劑盒購自于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司(生產(chǎn)批號為20134461)。采用Envision二步法檢測AEG-1、P16、KT-67蛋白的表達(dá)情況,在免疫組化過程中,選擇經(jīng)HE染色證實的宮頸組織石蠟塊,3um石蠟切片,放置于載玻片,60℃烤片4h;切片經(jīng)二甲苯脫蠟2次,依次梯度酒精后充分水洗;進(jìn)行微波處理修復(fù)抗原,蒸餾水沖洗,5min×3次;滴加50uL 3%H2O2溶液處理15min,以阻斷內(nèi)源性迪氧化物酶,PBS沖洗,5min×3次;滴加50uL第一抗體(AEG-1、P16、KT-67)工作液,4℃孵育12h,PBS沖洗,5min×3次;滴加50txL第二抗體工作液,25℃孵育30min,PBS沖洗,5min×3次;DAB(3,3-二氨基聯(lián)苯胺Tris緩沖液)室溫下3~5min顯色,自來水沖洗終止顯色;蘇木素復(fù)染細(xì)胞核1~2min,梯度酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片、顯微鏡下觀察。以已知的陽性對照染色片為陽性對照,PBS代替一抗為陰性對照。

    1.3觀察指標(biāo)

    以細(xì)胞核內(nèi)呈現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性,每張切片在400倍光學(xué)顯微鏡計數(shù)癌細(xì)胞,陽性率≥20%定為陽性,每張切片由兩位病理專家獨立閱片共同協(xié)商出判斷結(jié)果。

    1.4統(tǒng)計方法

    選擇SPSS17.00軟件進(jìn)行分析,而計數(shù)數(shù)據(jù)對比采用卡方分析;計量數(shù)據(jù)選擇(x±s)表示,對比采用單因素方差分析或者t檢驗;相關(guān)性分析采用直線相關(guān)分析,P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2.結(jié)果

    2.1AEG-1、P16、KT-67蛋白的表達(dá)情況對比

    AEG-1、P16、KT-67蛋白在宮頸癌組中主要在細(xì)胞的核周和細(xì)胞質(zhì)中表達(dá),在癌前病變組主要表達(dá)在異型細(xì)胞的核周和細(xì)胞質(zhì)。見圖1、圖2、圖3。經(jīng)過判定,AEG-1、P16、KT-67蛋白在宮頸癌組的陽性表達(dá)率分別為80.0%、93.9%和92.9%,而癌前病變組為57.1%、50.0%和57.1%,在對照組為3.1%、2.0%和4.1%,三組間對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

    2.2AEG-1、P16、KT-67蛋白表達(dá)與宮頸癌前病變病理參數(shù)的相關(guān)性

    經(jīng)過資料調(diào)查與對比分析,AEG-1、P16、KT-67蛋白的陽性表達(dá)與宮頸癌前病變的年齡、疾病類型、HPV感染等病理參數(shù)對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),表現(xiàn)為年齡越大,CINⅢ型和HPV感染的AEG-1、P16、KT-67蛋白陽性表達(dá)率都比較高。見表2。

    2.3AEG-1、P16、KT-67蛋白在癌前病變中表達(dá)的相關(guān)性

    直線相關(guān)性顯示,AEG-1、P16、KT-67蛋白表達(dá)都呈現(xiàn)兩兩正向相關(guān)性(P<0.05)。見表3。

    3.討論

    宮頸癌是最常見婦科惡性腫瘤之一,其中多數(shù)為鱗狀細(xì)胞癌與腺癌,一般認(rèn)為宮頸癌的發(fā)生與性生活過早、多產(chǎn)、多個性伴侶及HPV感染等因素有關(guān)。不過宮頸癌的發(fā)病過程持續(xù)比較久,長期的慢性子宮頸炎-子宮頸上皮內(nèi)瘤發(fā)-原位癌-浸潤癌是一個逐漸發(fā)展的過程,特別是癌前病變按照異型增殖細(xì)胞累及宮頸黏膜上皮的層次,分為CIN Ⅰ、CINⅡ、CINⅢ,針對癌前病變進(jìn)行分析,有利于預(yù)防與控制宮頸癌的發(fā)生。

    AEG-1最先發(fā)現(xiàn)在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中,隨后的研究發(fā)現(xiàn)AEG-1在腺癌、食管鱗癌、原發(fā)性肝細(xì)胞癌等多種腫瘤中異常表達(dá),并與腫瘤的發(fā)生發(fā)展和預(yù)后密切相關(guān)。有學(xué)者采用多組織核酸印跡法證實AEG-1的mRNA在脊椎動物的腦、腎、膀胱、前列腺、胸腺、心臟、肝、脾、肺等組織器官中均有不同水平的表達(dá)。P16基因是直接參與細(xì)胞周期調(diào)控的抑癌基因,P16基因失活可使得宮頸上皮細(xì)胞的細(xì)胞周期發(fā)生紊亂,從而啟動一系列癌變過程。KT-67蛋白被公認(rèn)為是能準(zhǔn)確可靠反映細(xì)胞群增殖活性的客觀指標(biāo)。本研究顯示AEG-1、P16、KT-67蛋白在宮頸癌組的陽性表達(dá)率分別為80.0%、93.9%和92.9%,而癌前病變組為57.1%、50.0%和57.1%,在對照組為3.1%、2.0%和4.1%,三組間對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),表明AEG-1、P16、KT-67蛋白都在宮頸癌前病變中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況。

    AEG-1是一個敏感的診斷癌前病變的指標(biāo),有研究發(fā)現(xiàn)AEG-1在正常宮頸上皮組織、癌前病變組織和宮頸癌組織中的過表達(dá)率是逐步升高的,且AEG-1蛋白在宮頸癌中多為強(qiáng)陽性表達(dá),并發(fā)現(xiàn)其升高程度與患者的預(yù)后成正相關(guān)。有研究發(fā)現(xiàn)胃癌患者AEG-1高表達(dá)組的中位生存時間明顯低于AEG-1低表達(dá)組,AEG-1表達(dá)水平與胃癌的預(yù)后密切相關(guān)。而HPV感染后,病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行整合需要E1和E2蛋白的缺失,二者的缺失可導(dǎo)致癌蛋白水平升高,也引起細(xì)胞內(nèi)pRb蛋白功能失調(diào),誘導(dǎo)P16蛋白過表達(dá)。而Ki-67表達(dá)不只限于基底層細(xì)胞,陽性細(xì)胞比例增加,與宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展及惡性程度有關(guān)。本研究顯示AEG-1、P16、KT-67蛋白的陽性表達(dá)與宮頸癌前病變的年齡、疾病類型、HPV感染等病理參數(shù)對比差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),說明AEG-1、P16、KT-67蛋白可能參與宮頸癌的惡性表型的進(jìn)展過程。

    細(xì)胞增殖是機(jī)體的基本生物學(xué)特征,當(dāng)發(fā)生致癌因素時,細(xì)胞增殖失控和分化受阻,導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。本研究直線相關(guān)性顯示AEG-1、P16、KT-67蛋白表達(dá)都呈現(xiàn)兩兩正向相關(guān)性(P<0.05),其中P16蛋白的過表達(dá)與HPV感染有關(guān);而Ki-67表達(dá)與CIN級別顯著相關(guān),且不同Ki-67陽性表達(dá)級別組的HR-HPV負(fù)荷有顯著差異;AEG-1蛋白的陽性過表達(dá)率與宮頸癌的組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期、肌層浸潤深度之間密切相關(guān)。

    總之,AEG-1、P16、KT-67蛋白在宮頸癌前病變中都呈現(xiàn)高表達(dá)狀況,且與臨床病理特征存在相關(guān)性,三者可互相作用影響宮頸癌前病變的發(fā)展?fàn)顩r。

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