豬流行性腹瀉病的臨床癥狀和檢測技術(shù)的研究

李清暉

一、豬流行性腹瀉病的臨床癥狀

1.豬流行性腹瀉主要臨床癥狀

PED最明顯的癥狀是水樣腹瀉，在PED廣泛流行和母豬群大多有免疫力的國家或地區(qū)的種豬場中，新生仔豬很少暴發(fā)PED。易感種豬群暴發(fā)本病時，發(fā)病率和死亡率差異很大，在有的種豬場，所有年齡的豬只均感染發(fā)病，發(fā)病率高達(dá)100%，此時該病與豬傳染性胃腸炎（TGE）極為相似，只是傳播速度較慢和哺乳仔豬病死率稍低。1周齡內(nèi)仔豬常常腹瀉3d—4d后因脫水而死，病死率平均為50%，但有時高達(dá)80%，日齡較大的仔豬約一周后康復(fù)。暴發(fā)過急性腹瀉的豬場，在斷奶后2周—3周可能出現(xiàn)持續(xù)性腹瀉，新引進(jìn)的豬只也可能相繼發(fā)病。近幾年來，在日本和韓國均有新生仔豬急性PED的暴發(fā)并出現(xiàn)高的致死率（Sueyoshi eta1，1995）。在歐洲一些豬場，斷奶豬和成年豬經(jīng)常發(fā)生嚴(yán)重的腹瀉，而哺乳仔豬，尤其是無母源抗體的哺乳仔豬不發(fā)生或僅發(fā)生輕微腹瀉，發(fā)病率很低，對于這種現(xiàn)象至今仍未能做出很好的解釋。有人曾對幾株P(guān)EDV分離株對仔豬的毒力差異進(jìn)行了測定，但未能發(fā)現(xiàn)異常。多渠道來源的混養(yǎng)架子豬或育肥期間豬只暴發(fā)急性PED時，臨床表現(xiàn)幾乎一樣，所有的豬只在一周內(nèi)均表現(xiàn)腹瀉，食欲稍減退，精神沉郁，糞便呈現(xiàn)水樣。在育肥后期，PEDV感染引起的腹瀉比豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）引起的腹瀉豬只的腹瀉要嚴(yán)重，但大多數(shù)豬只在7d～10d后康復(fù)，病死率僅為1%---3%，且這種死亡常見于腹瀉早期或發(fā)生腹瀉之前，剖檢病死豬常見背部肌肉壞死。應(yīng)激敏感的豬只發(fā)生PED時死亡率很高。一般來說，PEDV在架子豬和育肥豬的腸道內(nèi)比在新生仔豬的腸道內(nèi)更易增殖，因此，育肥豬對該病毒易感性更高，一旦發(fā)病，發(fā)病率常高達(dá)100%。與TGEV相比，PEDV在封閉的種豬場內(nèi)以及同一育肥豬群內(nèi)或不同的育肥豬群間的傳播較慢，在幾個獨(dú)立豬舍的種豬場和育肥豬場中，通常需要4周～6周病毒才能感染不同豬舍的豬群，甚至有的豬舍的豬群不出現(xiàn)感染（Carvajaleta1.，1995b）。

2.豬流行性腹瀉的病理變化

PEDV在自然感染和實(shí)驗(yàn)感染的仔豬中均能引起肉眼可見的病變（Pospischil eta1，1981；Hwang eta1，1994），主要表現(xiàn)為：小腸膨脹，內(nèi)充滿大量黃色液體。在接毒后24h，仔豬的小腸絨毛出現(xiàn)組織學(xué)變化，主要表現(xiàn)為：小腸絨毛上皮細(xì)胞空泡化、脫落，絨毛變短，這個組織學(xué)變化恰恰與仔豬腹瀉發(fā)生的時間相吻合。Ducatelle等（1981）從組織化學(xué)角度進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)PEDV感染豬小腸中酶的活性明顯下降。Pospischil等（1981）和Sueyochi等（1995）認(rèn)為PEDV的病理變化與豬傳染性胃腸炎（TGE）的極為相似，在結(jié)腸，未能觀察到組織病理學(xué)變化。超微結(jié)構(gòu)變化主要發(fā)生于小腸細(xì)胞細(xì)胞漿中（Horvathet a1.，1981），可見細(xì)胞器減少，出現(xiàn)電子半透明區(qū)，接著微絨毛和末端網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)消失，部分胞漿突入腸腔內(nèi)，腸細(xì)胞變平，緊密連接消失，脫落進(jìn)入腸腔，可見腸細(xì)胞內(nèi)的病毒是通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜以出芽方式形成的（Ducatelleetal.，1981b）。在結(jié)腸，含病毒的腸細(xì)胞出現(xiàn)一些細(xì)胞病變，但末見細(xì)胞脫落。

二、豬流行性腹瀉檢測技術(shù)研究進(jìn)展

目前，與傳統(tǒng)的病毒分離鑒定，免疫熒光、電鏡檢測、免疫組化法、中和試驗(yàn)等臨床檢測方法相比較，ELISA技術(shù)、RT-PCR、免疫膠體金快速診斷技術(shù)等具有易操作、快速、可同時檢測大量樣品的優(yōu)點(diǎn)，在臨床檢測中被廣泛推廣。上世紀(jì)90年代初，Knuchel等從PEDV感染的Vero細(xì)胞的胞漿中提取S蛋白和N蛋白，并利用這兩種蛋白建立了檢測PEDV抗體的ELISA檢測方法。Hou等利用大腸桿菌重組表達(dá)的N蛋白作為抗原建立的ELISA檢測方法，與血清中和試驗(yàn)（SN）的重復(fù)率為88.3%，具有較高的特異性和敏感性。Oh等利用從PEDV感染的Vero細(xì)胞中提抽的病毒蛋白建立了ELISA檢測方法，與血清中和試驗(yàn)（SN）比較，兩者的符合率84.2%。Sozzi等利用單克隆抗體建立的檢測PEDV的雙抗體夾心ELISA與RT-PCR檢測方法比較，腹瀉糞樣及腸道檢測結(jié)果的符合率均為95%。Song等建立定量RT-PCR來測定感染PEDV豬只的排毒量。Jtmg等基于斑點(diǎn)雜交建立的鑒別診斷PEDV和TGEV的多重RT-PCR，比基于瓊脂糖凝膠電泳的多重RT-PCR敏感高100--1000倍。韓國的Jtmg等建立的TGEV和PEDV多重巢式RT-PCR檢測福爾馬林固定的腸組織，與原位雜交試驗(yàn)結(jié)果一致，同時也對免疫組化、原位雜交、多重巢式RT-PCR這三種方法進(jìn)行了比較，結(jié)果顯示多重巢式RT-PCR的重復(fù)性最好。楊群等利用自己建立的TGEV和PEDV的多重RT-PCR檢測方法，與韓國的TGEV和PEDV病毒抗原快速診斷試劑盒檢測結(jié)果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)該方法的特異性和敏感性更好。劉鄧等建立了PEDV TaqMan熒光定量RT-PCR檢測方法，能檢測到10拷貝/ul的陽性質(zhì)粒，比常規(guī)RT-PCR的敏感性高10倍。Park等發(fā)現(xiàn)PEDV經(jīng)胰蛋白酶處理后有紅細(xì)胞凝集反應(yīng)，將成為快速檢測PED的新方法。