• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于特征圖譜的黃芩黃酮類(lèi)成分固相萃取研究

    2017-05-10 06:06:46郭威王亮周倩聶穎蘭崔寧于宗淵
    山東科學(xué) 2017年2期
    關(guān)鍵詞:小柱黃酮類(lèi)甲酸

    郭威,王亮,周倩, 聶穎蘭, 崔寧 ,于宗淵*

    (1. 山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,山東 濟(jì)南 250355;2.山東省中醫(yī)藥研究院,山東 濟(jì)南250014;3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心, 北京 100700)

    【中藥與天然活性產(chǎn)物】

    基于特征圖譜的黃芩黃酮類(lèi)成分固相萃取研究

    郭威1,2,王亮1,2,周倩1,2, 聶穎蘭3, 崔寧2,于宗淵2*

    (1. 山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,山東 濟(jì)南 250355;2.山東省中醫(yī)藥研究院,山東 濟(jì)南250014;3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心, 北京 100700)

    采用HPLC法建立黃芩中黃酮類(lèi)成分的特征圖譜,以6個(gè)主要特征峰的回收率和特征圖譜相似度為指標(biāo),優(yōu)選固相萃取小柱填料、淋洗液和洗脫條件。最終確定C18固相萃取小柱對(duì)6個(gè)成分的回收率最高,淋洗液為甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V),洗脫液為甲醇(含0.3%甲酸),純化后6個(gè)主要特征峰的回收率均在89%以上,HPLC特征圖譜相似度大于0.98。采用HPLC特征圖譜指導(dǎo)優(yōu)化黃芩黃酮類(lèi)成分的固相萃取純化方法,可保持純化前后黃芩有效組分中化學(xué)成分的一致性。

    黃芩;HPLC特征圖譜;固相萃??;黃酮類(lèi)成分

    由于中藥具有成分復(fù)雜多樣且極性差異較大的特點(diǎn),因此其有效組分的分離純化一直是中藥樣品前處理過(guò)程中亟待解決的重要問(wèn)題。固相萃取作為一種試樣預(yù)處理技術(shù),能有效地將分析物與干擾組分分離,具有高選擇性、高回收率、低溶劑消耗、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)[1-2],近年來(lái)將其應(yīng)用于中藥有效組分的富集和純化中的研究日益增多。但在純化條件的研究中,多以一種或幾種有效成分的含量為考察指標(biāo),不符合中藥多成分的特點(diǎn)。特征圖譜作為一種綜合評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的手段,將其作為指標(biāo)優(yōu)化純化條件,能夠準(zhǔn)確地保證有效組分分離前后的一致性。

    黃芩為唇形科植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根,有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎等功效[3]。主要有效成分為黃酮類(lèi)化合物,還含有少量油脂類(lèi)、蠟質(zhì)等弱極性物質(zhì)以及氨基酸、糖等強(qiáng)極性物質(zhì),其理化性質(zhì)有較大差異。本文采用固相萃取小柱來(lái)分離純化黃芩中的黃酮類(lèi)成分,除去弱極性及強(qiáng)極性的干擾物質(zhì),快速分離和富集目標(biāo)成分,提高分析檢測(cè)時(shí)的靈敏度,降低樣品對(duì)分析柱的污染,并以特征圖譜作為固相萃取分離純化黃芩中黃酮類(lèi)有效組分的評(píng)價(jià)手段,以特征圖譜的相似度和幾種主要有效成分的回收率為指標(biāo),綜合探討純化條件,保證黃酮類(lèi)成分的最大保留。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器

    1200系列高效液相色譜系統(tǒng)(美國(guó)安捷倫公司);6320離子阱質(zhì)譜檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫公司),配備電噴霧離子源;Rotavapor R-3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琪公司);BP211D型電子天平(德國(guó)賽多利斯集團(tuán));Simplicity純水儀(美國(guó)密理博公司);KDM型控溫電熱套(鄄城華魯電熱儀器有限公司)。

    1.2 試藥

    AccuBondII SPE ODS-C18Cartridges固相萃取柱(美國(guó)安捷倫公司,產(chǎn)品編號(hào)188-1320);Cleanert PA 聚酰胺固相萃取小柱(天津博納艾杰爾科技有限公司);高效液相色譜用甲醇為色譜純,水為超純水,甲酸等其他試劑均為分析純。

    黃芩為市售中藥飲片,經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院中藥資源研究室林慧彬研究員鑒定,均為唇形科植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 黃芩提取液的制備

    稱(chēng)取黃芩粉末(過(guò)三號(hào)篩)0.3 g,置具塞錐形瓶中,加60 mL水,稱(chēng)定重量,加熱回流1 h,放冷,用水補(bǔ)足減失的重量,搖勻,過(guò)濾,即得供試品溶液1。

    2.2 黃芩HPLC特征圖譜的建立

    2.2.1 色譜條件

    色譜柱:Thermo Syncronis C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱;流動(dòng)相:乙腈(A)-0.3%磷酸(B),梯度洗脫(0~30 min,85%~75%B;30~45 min,75%~70%B;45~50 min,70%~60%B;50~55 min,60%B;55~60 min,60%~40%B;60~65 min,40%~30%B;65~75min,30%~0%B);柱溫:30 ℃;流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;進(jìn)樣量:10 μL。色譜圖見(jiàn)圖1。

    圖1 黃芩提取液的HPLC特征圖譜Fig.1 HPLC characteristic chromatogram of Radix Scutellariae extract

    2.2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

    取同一批黃芩提取液,重復(fù)進(jìn)樣6次,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定,記錄特征圖譜,6次測(cè)定圖譜10個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于1%,相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3%,儀器精密度良好。

    2.2.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

    取同一批黃芩按2. 1項(xiàng)下方法制備6份樣品,分別測(cè)定,6份樣品的10個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1%,相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3%,表明方法的重復(fù)性良好。

    2.2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

    取新制備的黃芩提取液,分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣,測(cè)定圖譜的10個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07%~0.58%,相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.54%~2.91%,表明該方法處理的黃芩提取液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.2.5 黃芩HPLC特征圖譜中特征峰的結(jié)構(gòu)解析

    根據(jù)DAD在線(xiàn)紫外光譜信息,初步判斷1~10號(hào)峰為黃酮類(lèi)化合物,結(jié)合文獻(xiàn),通過(guò)HPLC-MSn質(zhì)譜信息對(duì)黃芩特征峰進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析,結(jié)果見(jiàn)表1。

    表1 黃芩HPLC特征圖譜中特征峰的質(zhì)譜解析

    1號(hào)峰和2號(hào)峰的分子量相同,為同分異構(gòu)體,推斷可能為白楊素-葡萄糖-阿拉伯糖苷,且1、2號(hào)峰二級(jí)質(zhì)譜碎片相同但碎片豐度不同,見(jiàn)圖2。推測(cè)是由于阿拉伯糖存在呋喃型和吡喃型兩種結(jié)構(gòu),六元環(huán)椅式構(gòu)象比五元環(huán)折疊式穩(wěn)定。因此,在相同質(zhì)譜條件下,呋喃型阿拉伯糖基易于開(kāi)環(huán),消耗的碰撞能量少,從而易于產(chǎn)生較大的中性丟失;吡喃型阿拉伯糖基相對(duì)穩(wěn)定,開(kāi)環(huán)消耗的能量大,較小的中性丟失較多。由于六元環(huán)氧孤對(duì)電子易被分散,原子之間的電負(fù)性小,因此極性小,而五元呋喃糖的電子分散程度及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定程度低于六元吡喃糖,各原子之間的電負(fù)性較大,所以呋喃糖極性大于吡喃糖,在反相柱中先流出。故推斷1號(hào)峰為白楊素-葡萄糖-呋喃阿拉伯糖苷,2號(hào)為白楊素-葡萄糖-吡喃阿拉伯糖苷。

    A 1號(hào)峰; B 2號(hào)峰。圖2 1號(hào)峰和2號(hào)峰的二級(jí)質(zhì)譜圖Fig.2 Second-stage mass spectrum diagrams of peak 1 and peak 2

    2.3 黃芩中黃酮類(lèi)成分固相萃取純化條件的優(yōu)化

    2.3.1 在不同洗脫劑下固相萃取小柱填料的影響

    取不同類(lèi)型的SPE小柱,分別用8 mL甲醇和8 mL水預(yù)淋洗。

    精密量取按2.1項(xiàng)下方法制備的黃芩提取液1 mL,上樣,用3 mL甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)分3次淋洗SPE小柱,每次1 mL,棄去淋洗液,吹出殘留溶劑,用表2中的洗脫劑進(jìn)行洗脫,收集洗脫液至50 mL梨形瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,加1 mL甲醇,振蕩溶解,經(jīng)0.45 μm濾膜濾過(guò),即得供試品溶液2。

    以供試液2的HPLC圖譜中峰面積較大的6個(gè)特征成分(3,4,6,7,8,9號(hào)峰)為指標(biāo),與未經(jīng)固相萃取處理的供試液1比較,計(jì)算各主峰的回收率[9]。

    回收率(%)=(供試品溶液1主峰峰面積/供試品溶液2主峰峰面積)×100% 。

    采用國(guó)家藥典委員會(huì)出版的《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版》軟件計(jì)算各洗脫液特征圖譜與黃芩提取液指紋圖譜相似度。

    表2 填料類(lèi)型對(duì)主峰回收率和特征圖譜相似度的影響

    表2的結(jié)果表明,在其他工藝條件都相同的情況下,不同填料類(lèi)型的固相萃取小柱對(duì)黃芩提取液中各成分的保留率不同,當(dāng)洗脫溶劑為甲醇時(shí),聚酰胺小柱與C18小柱相比,各主峰保留率遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于C18小柱;當(dāng)洗脫溶劑為甲醇(含0.3%氨水)、甲醇(含0.3%甲酸)時(shí),主峰保留率有所提高,但仍低于C18小柱,并且洗脫液的特征圖譜與黃芩提取液特征圖譜的相似度也均低于C18小柱,因此選擇C18小柱。

    2.3.2 淋洗液種類(lèi)及洗脫液種類(lèi)的考察

    取1 mL黃芩提取液,上樣,分別用水、甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)、甲醇-0.3%甲酸(40∶60,V/V)、甲醇-0.3%甲酸(60∶40,V/V)、甲醇-0.3%甲酸(80∶20,V/V)、甲醇、甲醇(含0.3%甲酸)分三次淋洗C18SPE小柱,每次1 mL,收集每個(gè)淋洗梯度的洗脫液至50 mL梨形瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,加1 mL甲醇,振蕩溶解,按2.2.1中色譜條件測(cè)定3,4,6,7,8,9號(hào)峰面積。結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 淋洗液及洗脫液種類(lèi)對(duì)主峰回收率和特征圖譜相似度的影響

    水和甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)洗脫液中無(wú)特征成分出現(xiàn),故選擇甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)為淋洗液,既可將氨基酸、糖等強(qiáng)極性物質(zhì)洗脫下來(lái),又不影響特征成分的回收率。由表3結(jié)果可見(jiàn),甲醇-0.3%甲酸(40∶60,V/V)洗脫液中開(kāi)始出現(xiàn)特征成分,黃芩苷、黃芩素-6-O-葡萄糖酸苷、木蝴蝶素-7-O-葡萄糖酸苷、漢黃芩苷、黃芩素主要集中在甲醇-0.3%甲酸(60∶40,V/V)和甲醇-0.3%甲酸(80∶20,V/V)洗脫液中,甲醇-0.3%甲酸(60∶40,V/V)洗脫液與原提取液的相似度最高,但洗脫不完全。漢黃芩素主要集中于甲醇-0.3%甲酸(80∶20,V/V)洗脫液中,甲醇洗脫液中基本無(wú)特征成分,但當(dāng)洗脫液換為甲醇(含0.3%甲酸)時(shí),又可將部分特征成分洗脫下來(lái),故確定以甲醇(含0.3%甲酸)為洗脫液。

    2.3.2 洗脫液用量的考察

    精密量取按2.1項(xiàng)下方法制備的黃芩提取液1 mL,上樣,用3 mL甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)分3次淋洗C18SPE小柱,每次1 mL,棄去淋洗液,吹出殘留溶劑,采用甲醇(含0.3%甲酸)洗脫,每次1 mL,共洗脫4次,收集洗脫液至50 mL梨形瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,加1 mL甲醇,振蕩溶解,經(jīng)0.45 μm濾膜濾過(guò),按2.2.1中色譜條件測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果表明,第三次洗脫后仍有特征成分出現(xiàn),第四次洗脫后無(wú)特征峰,即3 mL 的甲醇(含0.3%甲酸)可將吸附的黃酮類(lèi)成分基本洗脫完全,因此確定洗脫液的用量為3 mL。

    A第一次洗脫; B第二次洗脫; C第三次洗脫; D第四次洗脫。圖3 不同體積甲醇洗脫液的色譜圖Fig.3 Chromatograms of methanol eluent at different volume

    2.3.6 方法專(zhuān)屬性

    精密吸取蒸餾水1 mL上樣,用3 mL甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)分3次淋洗SPE小柱,每次1 mL,棄去淋洗液,吹出殘留溶劑,用3 mL甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)洗脫,收集洗脫液至50 mL梨形瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,加1 mL甲醇,振蕩溶解,經(jīng)0.45 μm濾膜濾過(guò),按2.2.1項(xiàng)下方法測(cè)定,得空白溶液的色譜圖(見(jiàn)圖4)。由空白與黃芩提取液的色譜圖(圖1)比較可知,用本實(shí)驗(yàn)擬定固相萃取方法處理黃芩提取液后,在70 min色譜記錄時(shí)間內(nèi)無(wú)干擾成分流出。

    圖4 空白溶液的色譜圖Fig.4 Chromatogram of blank solution

    2.3.7 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

    稱(chēng)取黃芩粉末(過(guò)三號(hào)篩)0.3 g,置具塞錐形瓶中,加60 mL 水,稱(chēng)定重量,加熱回流1 h,放冷,用水補(bǔ)足減失的重量,搖勻,過(guò)濾,得黃芩提取液。取C18固相萃取小柱,分別用8 mL甲醇和8 mL水預(yù)淋洗SPE小柱。精密量取黃芩提取液1 mL,上樣,用3 mL甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)分3次淋洗SPE小柱,每次1 mL,棄去淋洗液,吹出殘留溶劑,用3 mL甲醇(含0.3%甲酸)洗脫,收集洗脫液至50 mL梨形瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,加1 mL甲醇,振蕩溶解,經(jīng)0.45 μm濾膜濾過(guò),按2.2.1中色譜條件測(cè)定,計(jì)算各主峰的回收率(見(jiàn)表4)。結(jié)果表明,黃芩提取液經(jīng)固相萃取處理后黃芩苷、黃芩素-6-O-葡萄糖酸苷、木蝴蝶素-7-O-葡萄糖酸苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素的回收率均在89%以上,重現(xiàn)性較好,說(shuō)明確定的固相萃取小柱填料類(lèi)型、淋洗液種類(lèi)、洗脫液種類(lèi)及用量等條件較為合理,重復(fù)性好且主成分保留率較高。黃芩中黃酮類(lèi)成分的HPLC特征圖譜與黃芩水提液的HPLC特征圖譜相似度均大于0.98,實(shí)現(xiàn)了成分的均衡回收[9]。

    表4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)

    3 討論

    本實(shí)驗(yàn)采用HPLC特征圖譜,對(duì)黃芩水提液中黃酮類(lèi)成分的固相萃取條件進(jìn)行了考察,結(jié)果表明用甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)淋洗,甲醇(含0.3%甲酸)洗脫,可以特異性地獲取黃酮類(lèi)成分,6個(gè)特征成分的回收率均在89%以上。在考察固相萃取淋洗和洗脫條件中發(fā)現(xiàn),甲醇(含0.3%甲酸)洗脫能力強(qiáng)于純甲醇,可能由于黃酮類(lèi)成分多呈酸性,加酸后可抑制其電離,控制其呈分子狀態(tài),減少了洗脫時(shí)間,故加入甲酸后使甲醇的洗脫能力增強(qiáng)。

    與固相萃取前相比,黃芩水提取物經(jīng)固相萃取后浸膏重量減少了10%,故本實(shí)驗(yàn)建立的固相萃取方法可除去多糖等雜質(zhì),有利于減少非特征成分干擾、縮短分析時(shí)間和保護(hù)分析柱。

    本實(shí)驗(yàn)以黃芩中6個(gè)特征成分(黃芩苷、黃芩素-6-O-葡萄糖酸苷、木蝴蝶素-7-O-葡萄糖酸苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素)的回收率和特征圖譜的相似度作為評(píng)價(jià)指標(biāo),跟蹤評(píng)價(jià)固相萃取的處理效果,與傳統(tǒng)的以單一成分保留率為指標(biāo)的評(píng)價(jià)方法相比更為精細(xì),可較全面地反映固相萃取前處理中藥樣品時(shí)其藥效物質(zhì)的回收率,更好地體現(xiàn)了中藥多成分的特征,可為中藥中目標(biāo)成分的分離與富集方法提供參考。

    [1]賴(lài)宇紅,陳浩桉.固相萃取法在中藥分析中的應(yīng)用前景及其建立優(yōu)化新方法的策略與步驟[J].廣東藥學(xué),2002,12(2):12-16.

    [2]湯道權(quán),高媛媛,魏雅芹,等.銀杏葉提取物中四種黃酮類(lèi)成分固相萃取技術(shù)優(yōu)化[J].中藥材,2008,31(6): 918-920.

    [3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2015年版一部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出社,2015:301.

    [4] OHKOSHI E,NAGASHIMA T,SATO H,et al. Simple preparation of baicalin from Scutellariae Radix[J]. J Chromatogr A, 2009, 1216(11): 2192-2194.

    [5]SHANG X F,HE X R,HE X Y,et al.The genus Scutellaria an ethnopharmacological and phytochemical review[J]. J Ethnopharmacol,2010,128(2):279-313.

    [6]HAN J,YE M,XU M,et al. Characterization of flavonoids in the traditional Chinese herbal medicine-Huangqin by liquid chromatography coupled with electrospray ionization mass spectrometry[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,2007, 848(2):355-362.

    [7] 趙勝男,李守拙.黃芩藥材中黃酮類(lèi)成分的HPLC-MS研究[J].承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012, 29 (4):355-347.

    [8] 楊思敏,陳瑞戰(zhàn),董航,等.高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用快速篩選并鑒定黃芩甲醇提取物中抗氧化活性成分[J].分析化學(xué),2012,40(6):888-892.

    [9] 楊紅美,曾建國(guó),陳波,等.具有指紋特征的黃芩提取物質(zhì)量可控性研究[J].中草藥,2006,37(6):846-851.

    [10] 李守信,展金祥,劉武占,等.基于指紋圖譜的金銀花物質(zhì)組純化工藝研究[J].中草藥,2015,46(1):55-60.

    Solid phase extraction of flavonoids from Radix Scutellariae based on specific chromatogram

    GUO Wei1,2, WANG Liang1,2, ZHOU Qian1,2,NIE Ying-lan3,CUI Ning2,YU Zong-yuan2*

    (1. School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China;2. Shandong Academy of Chinese Medicine, Jinan 250014, China; 3. Experimental Research Center, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China)

    ∶The specific chromatogram of flavonoids in Radix Scutellariae was established by HPLC in this paper. The column filling, eluent and the elution condition of solid phase extraction were optimized using the recovery rates and specific spectral similarity of six main characteristic peaks in HPLC specific chromatogram as indexes. Experimental results confirmed that C18solid phase extraction (SPE) possessed the highest recovery rates of six components. The SPE column was rinsed with methanol-0.3% formic acid(20∶80,V/V), and then was eluted finally with methanol (containing 0.3% formic acid). After being purified, the recovery rates of six components were all over 89%, and the similarity of characteristic chromatogram was higher than 0.98. Based on HPLC characteristic chromatogram, the optimized purification process of flavonoids in Radix Scutellariae with solid phase extraction can ensure that the main effective components remain consistent before and after purification of Radix Scutellariae.

    ∶Radix Scutellariae; HPLC specific chromatogram; solid phase extraction; flavonoids

    10.3976/j.issn.1002-4026.2017.02.003

    2016-07-27

    山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃(2015-164)

    郭威(1982—),女,碩士,助理研究員,研究方向?yàn)橹兴幏治雠c質(zhì)量控制。E-mail:331527800@qq.com

    *通信作者,于宗淵,博士,研究員,研究方向?yàn)橹兴幏治雠c質(zhì)量控制。E-mail:yuzys@sohu.com

    R284.2

    A

    1002-4026(2017)02-0013-07

    猜你喜歡
    小柱黃酮類(lèi)甲酸
    志向
    少年文藝(2022年8期)2022-07-08 10:02:47
    MS-DAIL聯(lián)合MS-FINDER鑒定中藥黃酮類(lèi)化合物
    HPLC法同時(shí)測(cè)定白梅花中6種黃酮類(lèi)成分
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:18:46
    甲酸治螨好處多
    新鄉(xiāng):小城失敗者
    體積之爭(zhēng)
    甲酸鹽鉆井液完井液及其應(yīng)用之研究
    耳后游離皮片在修復(fù)鼻小柱與上唇粘連外翻畸形中的臨床應(yīng)用
    黃酮類(lèi)化合物抗心肌缺血再灌注損傷研究進(jìn)展
    中成藥(2014年10期)2014-02-28 22:29:33
    牛大力中黃酮類(lèi)成分
    中成藥(2014年10期)2014-02-28 22:29:25
    国产精品美女特级片免费视频播放器| 亚洲成av人片在线播放无| 日本熟妇午夜| 国产成人精品久久久久久| 久久亚洲国产成人精品v| 久久鲁丝午夜福利片| 欧美最新免费一区二区三区| 身体一侧抽搐| 精品人妻视频免费看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 蜜臀久久99精品久久宅男| av.在线天堂| 熟女电影av网| 波野结衣二区三区在线| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 亚洲精品粉嫩美女一区| 深夜a级毛片| 亚洲精品一区av在线观看| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲av二区三区四区| 国产成人a∨麻豆精品| 少妇的逼好多水| 无遮挡黄片免费观看| 黄色日韩在线| 亚洲国产精品合色在线| 色av中文字幕| 成人鲁丝片一二三区免费| 毛片女人毛片| 亚州av有码| 国产男人的电影天堂91| 国产精品久久久久久精品电影| 精华霜和精华液先用哪个| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 99久久精品一区二区三区| 日韩欧美国产在线观看| 午夜精品国产一区二区电影 | 国产精品伦人一区二区| 精品一区二区三区视频在线| 久久午夜福利片| 波多野结衣高清作品| 村上凉子中文字幕在线| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 亚洲精品亚洲一区二区| 波野结衣二区三区在线| 黄色一级大片看看| 亚洲,欧美,日韩| 亚洲欧美精品自产自拍| 插逼视频在线观看| av中文乱码字幕在线| 精品一区二区免费观看| 天堂√8在线中文| 一区二区三区四区激情视频 | 69人妻影院| 亚洲成人精品中文字幕电影| 99久久无色码亚洲精品果冻| 18禁在线播放成人免费| 国产人妻一区二区三区在| 亚洲精品影视一区二区三区av| a级毛片a级免费在线| 久久久精品欧美日韩精品| 亚洲综合色惰| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 日本 av在线| 久久亚洲精品不卡| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 免费人成在线观看视频色| 国产成人a区在线观看| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 欧美成人免费av一区二区三区| 婷婷精品国产亚洲av| 欧美+亚洲+日韩+国产| 秋霞在线观看毛片| 日韩欧美 国产精品| 性色avwww在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 网址你懂的国产日韩在线| 国产精品精品国产色婷婷| av在线亚洲专区| 欧美成人一区二区免费高清观看| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日本a在线网址| 大香蕉久久网| 久久午夜福利片| 熟女电影av网| 日韩亚洲欧美综合| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲精品国产av成人精品 | av在线蜜桃| 日本欧美国产在线视频| 色在线成人网| 晚上一个人看的免费电影| 色综合亚洲欧美另类图片| 一级av片app| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产69精品久久久久777片| 亚洲精品日韩在线中文字幕 | 看黄色毛片网站| 嫩草影院精品99| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 亚洲七黄色美女视频| 国产成人freesex在线 | 免费人成在线观看视频色| 国产精品人妻久久久影院| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 精品人妻熟女av久视频| 99久久中文字幕三级久久日本| 久久久久久久久中文| 日本欧美国产在线视频| 精品人妻视频免费看| 99热精品在线国产| 男人的好看免费观看在线视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 成人综合一区亚洲| 一本久久中文字幕| 国产高清激情床上av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲在线自拍视频| 18禁在线播放成人免费| 波多野结衣高清无吗| 亚洲图色成人| 99九九线精品视频在线观看视频| av.在线天堂| 日韩欧美国产在线观看| 日韩av在线大香蕉| 欧美区成人在线视频| 欧美极品一区二区三区四区| 日本爱情动作片www.在线观看 | 精品久久久久久久久av| 精品一区二区三区人妻视频| 内地一区二区视频在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 1000部很黄的大片| 美女被艹到高潮喷水动态| 日本欧美国产在线视频| 成年女人永久免费观看视频| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲av成人精品一区久久| 日韩欧美精品免费久久| 综合色av麻豆| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产亚洲精品av在线| 秋霞在线观看毛片| 长腿黑丝高跟| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 午夜久久久久精精品| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲自偷自拍三级| 色哟哟哟哟哟哟| 天堂网av新在线| 乱系列少妇在线播放| 久久久精品欧美日韩精品| 2021天堂中文幕一二区在线观| 国产亚洲精品av在线| 99热这里只有是精品在线观看| 观看美女的网站| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 精品福利观看| 天堂影院成人在线观看| 日韩 亚洲 欧美在线| av在线天堂中文字幕| 国产男靠女视频免费网站| 成人精品一区二区免费| 久久99热6这里只有精品| 日本a在线网址| av免费在线看不卡| av在线蜜桃| 欧美人与善性xxx| 亚洲国产精品久久男人天堂| 麻豆国产av国片精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 一进一出抽搐gif免费好疼| a级一级毛片免费在线观看| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产一区二区在线观看日韩| 国产免费一级a男人的天堂| 国产精品野战在线观看| 久久久国产成人精品二区| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲无线在线观看| 美女黄网站色视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 白带黄色成豆腐渣| 国内精品久久久久精免费| 成人漫画全彩无遮挡| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 少妇被粗大猛烈的视频| 一区福利在线观看| 亚洲国产色片| 99久国产av精品国产电影| 欧美潮喷喷水| 亚洲国产欧美人成| 丰满的人妻完整版| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲不卡免费看| 国产在线男女| 亚洲国产高清在线一区二区三| 99国产极品粉嫩在线观看| 精品午夜福利在线看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 麻豆av噜噜一区二区三区| 成人一区二区视频在线观看| 一级黄色大片毛片| 婷婷色综合大香蕉| 91久久精品国产一区二区三区| 亚洲精品国产av成人精品 | 日韩欧美 国产精品| 久久99热这里只有精品18| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 欧美xxxx性猛交bbbb| 中文字幕久久专区| av福利片在线观看| 欧美日韩在线观看h| 亚洲精品色激情综合| av视频在线观看入口| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 午夜久久久久精精品| 三级经典国产精品| 22中文网久久字幕| 亚洲av美国av| 欧美成人a在线观看| 成人二区视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久精品91蜜桃| 国产精品久久久久久精品电影| 免费观看人在逋| 99热6这里只有精品| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲av中文av极速乱| av免费在线看不卡| 亚洲五月天丁香| 精品午夜福利视频在线观看一区| 国产亚洲精品av在线| 久久热精品热| av免费在线看不卡| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲美女搞黄在线观看 | 哪里可以看免费的av片| 欧美成人一区二区免费高清观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 色综合色国产| 午夜a级毛片| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久久国产成人精品二区| 欧美日本视频| 国产三级中文精品| 综合色av麻豆| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 国产精品一区二区三区四区久久| 一个人观看的视频www高清免费观看| 成人二区视频| 色5月婷婷丁香| 午夜福利在线在线| 深爱激情五月婷婷| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 国产精品av视频在线免费观看| 在线观看美女被高潮喷水网站| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 91在线观看av| av中文乱码字幕在线| 乱人视频在线观看| 麻豆乱淫一区二区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 99国产极品粉嫩在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 色视频www国产| 搞女人的毛片| 日本色播在线视频| 观看美女的网站| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产精品国产高清国产av| 国内揄拍国产精品人妻在线| 美女内射精品一级片tv| 国产 一区 欧美 日韩| 1000部很黄的大片| 色综合站精品国产| 午夜激情欧美在线| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 97在线视频观看| 成年免费大片在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 午夜福利在线在线| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 精品午夜福利视频在线观看一区| 亚洲国产精品合色在线| 日韩精品有码人妻一区| 成人无遮挡网站| 亚洲在线自拍视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产一区亚洲一区在线观看| av女优亚洲男人天堂| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 日本五十路高清| 欧美一区二区亚洲| 中出人妻视频一区二区| 99久久九九国产精品国产免费| 免费av毛片视频| 日本一二三区视频观看| 亚洲在线观看片| 大型黄色视频在线免费观看| 久久久精品欧美日韩精品| 免费看日本二区| 一级黄色大片毛片| 深夜精品福利| 国产淫片久久久久久久久| 看片在线看免费视频| 日日啪夜夜撸| 久久综合国产亚洲精品| 国产单亲对白刺激| h日本视频在线播放| 国产精品一及| 亚洲四区av| 99精品在免费线老司机午夜| 男人舔奶头视频| 一个人免费在线观看电影| 国产91av在线免费观看| 青春草视频在线免费观看| av在线蜜桃| 欧美性感艳星| 99热这里只有精品一区| av天堂中文字幕网| 黑人高潮一二区| 少妇熟女欧美另类| 国产免费男女视频| 亚洲美女视频黄频| 男人的好看免费观看在线视频| 可以在线观看毛片的网站| 午夜影院日韩av| 岛国在线免费视频观看| 亚洲美女搞黄在线观看 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 欧美成人精品欧美一级黄| 小说图片视频综合网站| 精品午夜福利在线看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 欧美人与善性xxx| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 国产在线精品亚洲第一网站| 日韩精品青青久久久久久| 最近中文字幕高清免费大全6| 在线播放国产精品三级| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美中文日本在线观看视频| 婷婷精品国产亚洲av| 国产一区亚洲一区在线观看| 国产麻豆成人av免费视频| 伦精品一区二区三区| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 麻豆国产av国片精品| 欧美人与善性xxx| 久久精品国产清高在天天线| 亚洲国产精品成人久久小说 | 日日摸夜夜添夜夜添av毛片| 美女大奶头视频| 男插女下体视频免费在线播放| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 欧美bdsm另类| 欧美在线一区亚洲| 淫妇啪啪啪对白视频| 亚洲精品亚洲一区二区| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产欧美日韩精品一区二区| 色在线成人网| 精品久久久久久久末码| 中文字幕久久专区| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲欧美清纯卡通| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 亚洲欧美日韩无卡精品| 一本久久中文字幕| 亚洲欧美成人精品一区二区| 国内揄拍国产精品人妻在线| 欧美成人一区二区免费高清观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 午夜福利18| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产精品野战在线观看| 美女免费视频网站| 成人无遮挡网站| 中国美白少妇内射xxxbb| 久久久成人免费电影| 三级毛片av免费| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 人妻久久中文字幕网| 国产午夜福利久久久久久| 黄色视频,在线免费观看| 九九爱精品视频在线观看| 老熟妇仑乱视频hdxx| 最新在线观看一区二区三区| 国产成人一区二区在线| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 熟女人妻精品中文字幕| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 哪里可以看免费的av片| 成人亚洲精品av一区二区| 我的老师免费观看完整版| 国产精品女同一区二区软件| 老女人水多毛片| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久午夜亚洲精品久久| 不卡视频在线观看欧美| 深夜精品福利| 色av中文字幕| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品久久视频播放| 成人欧美大片| www.色视频.com| 一进一出抽搐动态| av天堂中文字幕网| 我要看日韩黄色一级片| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 欧美日本亚洲视频在线播放| 国产亚洲精品久久久com| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 亚洲av美国av| 亚洲精品456在线播放app| 老熟妇仑乱视频hdxx| av视频在线观看入口| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲美女视频黄频| 少妇熟女欧美另类| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产一区二区亚洲精品在线观看| 日本欧美国产在线视频| 日本a在线网址| 国内精品久久久久精免费| 亚洲精品成人久久久久久| 乱系列少妇在线播放| 九九在线视频观看精品| 一个人免费在线观看电影| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产精品久久久久久精品电影| 51国产日韩欧美| 在线观看免费视频日本深夜| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美一级a爱片免费观看看| avwww免费| 久久精品夜色国产| 日本-黄色视频高清免费观看| 天美传媒精品一区二区| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 成人国产麻豆网| 午夜激情福利司机影院| 小说图片视频综合网站| 嫩草影院新地址| 免费人成在线观看视频色| 男女下面进入的视频免费午夜| 久久精品国产亚洲网站| 伊人久久精品亚洲午夜| 全区人妻精品视频| 日本爱情动作片www.在线观看 | 国产一区二区在线av高清观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 91av网一区二区| 99热全是精品| 麻豆久久精品国产亚洲av| 男女视频在线观看网站免费| 亚洲,欧美,日韩| 男女边吃奶边做爰视频| 久久久a久久爽久久v久久| 国产伦精品一区二区三区视频9| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产精品综合久久久久久久免费| 午夜免费激情av| 亚洲国产精品合色在线| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 中文字幕久久专区| www.色视频.com| 亚洲av不卡在线观看| 男女啪啪激烈高潮av片| 精品欧美国产一区二区三| 免费无遮挡裸体视频| 露出奶头的视频| 99精品在免费线老司机午夜| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产69精品久久久久777片| 国产高潮美女av| 午夜老司机福利剧场| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| or卡值多少钱| 亚洲在线自拍视频| 99久久精品热视频| 国产精品久久久久久久久免| 成人av一区二区三区在线看| 最后的刺客免费高清国语| 国产探花极品一区二区| 久久久精品94久久精品| 国产成人a区在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 人妻久久中文字幕网| 亚洲av中文av极速乱| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲第一区二区三区不卡| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 婷婷亚洲欧美| 亚洲av一区综合| 国产精品电影一区二区三区| 国产精品人妻久久久影院| 午夜久久久久精精品| 亚洲自拍偷在线| 欧美丝袜亚洲另类| 日本黄色视频三级网站网址| 日日干狠狠操夜夜爽| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产一区二区激情短视频| 黄色欧美视频在线观看| 日韩欧美三级三区| 国产乱人偷精品视频| 国产精品av视频在线免费观看| 欧美极品一区二区三区四区| 精品久久久久久久久亚洲| 男人狂女人下面高潮的视频| 日本与韩国留学比较| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 1000部很黄的大片| 国产片特级美女逼逼视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | .国产精品久久| 69人妻影院| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产激情偷乱视频一区二区| 天堂动漫精品| 日韩大尺度精品在线看网址| 国产成人91sexporn| 中文字幕免费在线视频6| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美丝袜亚洲另类| 婷婷精品国产亚洲av在线| 国产黄色视频一区二区在线观看 | 女人被狂操c到高潮| 91av网一区二区| 99久国产av精品| 男女下面进入的视频免费午夜| 免费黄网站久久成人精品| 国内揄拍国产精品人妻在线| 国产av一区在线观看免费| 亚洲美女视频黄频| 亚洲久久久久久中文字幕| 日本 av在线| 成熟少妇高潮喷水视频| 国产不卡一卡二| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| avwww免费| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 香蕉av资源在线| 乱码一卡2卡4卡精品| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产综合懂色| 日韩欧美三级三区| 中文字幕久久专区| 欧美性猛交黑人性爽| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲av成人av| 成人精品一区二区免费| 18禁在线播放成人免费| 特级一级黄色大片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 久久久久国内视频| 国产极品精品免费视频能看的| 简卡轻食公司| av中文乱码字幕在线| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美bdsm另类| 在线播放国产精品三级| 高清日韩中文字幕在线| 精品久久久噜噜| 亚洲内射少妇av| 色5月婷婷丁香| 两个人视频免费观看高清| 亚洲色图av天堂| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲成人久久性| 韩国av在线不卡| 91av网一区二区| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚州av有码| 午夜视频国产福利| 国产精品女同一区二区软件| 亚洲国产精品合色在线| 国产精品久久久久久av不卡| 精品熟女少妇av免费看| 乱系列少妇在线播放| 村上凉子中文字幕在线| 99热这里只有精品一区| 久久久久久久久久黄片| 免费观看精品视频网站| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲无线观看免费| 亚洲av熟女| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 成人av在线播放网站| 午夜福利18| 欧美国产日韩亚洲一区| 哪里可以看免费的av片| av在线亚洲专区| 一区二区三区四区激情视频 | 亚洲经典国产精华液单| 免费观看的影片在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 秋霞在线观看毛片| 色噜噜av男人的天堂激情|