• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于特征圖譜的黃芩黃酮類(lèi)成分固相萃取研究

    2017-05-10 06:06:46郭威王亮周倩聶穎蘭崔寧于宗淵
    山東科學(xué) 2017年2期
    關(guān)鍵詞:小柱黃酮類(lèi)甲酸

    郭威,王亮,周倩, 聶穎蘭, 崔寧 ,于宗淵*

    (1. 山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,山東 濟(jì)南 250355;2.山東省中醫(yī)藥研究院,山東 濟(jì)南250014;3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心, 北京 100700)

    【中藥與天然活性產(chǎn)物】

    基于特征圖譜的黃芩黃酮類(lèi)成分固相萃取研究

    郭威1,2,王亮1,2,周倩1,2, 聶穎蘭3, 崔寧2,于宗淵2*

    (1. 山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,山東 濟(jì)南 250355;2.山東省中醫(yī)藥研究院,山東 濟(jì)南250014;3.中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心, 北京 100700)

    采用HPLC法建立黃芩中黃酮類(lèi)成分的特征圖譜,以6個(gè)主要特征峰的回收率和特征圖譜相似度為指標(biāo),優(yōu)選固相萃取小柱填料、淋洗液和洗脫條件。最終確定C18固相萃取小柱對(duì)6個(gè)成分的回收率最高,淋洗液為甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V),洗脫液為甲醇(含0.3%甲酸),純化后6個(gè)主要特征峰的回收率均在89%以上,HPLC特征圖譜相似度大于0.98。采用HPLC特征圖譜指導(dǎo)優(yōu)化黃芩黃酮類(lèi)成分的固相萃取純化方法,可保持純化前后黃芩有效組分中化學(xué)成分的一致性。

    黃芩;HPLC特征圖譜;固相萃??;黃酮類(lèi)成分

    由于中藥具有成分復(fù)雜多樣且極性差異較大的特點(diǎn),因此其有效組分的分離純化一直是中藥樣品前處理過(guò)程中亟待解決的重要問(wèn)題。固相萃取作為一種試樣預(yù)處理技術(shù),能有效地將分析物與干擾組分分離,具有高選擇性、高回收率、低溶劑消耗、操作簡(jiǎn)便的特點(diǎn)[1-2],近年來(lái)將其應(yīng)用于中藥有效組分的富集和純化中的研究日益增多。但在純化條件的研究中,多以一種或幾種有效成分的含量為考察指標(biāo),不符合中藥多成分的特點(diǎn)。特征圖譜作為一種綜合評(píng)價(jià)中藥質(zhì)量的手段,將其作為指標(biāo)優(yōu)化純化條件,能夠準(zhǔn)確地保證有效組分分離前后的一致性。

    黃芩為唇形科植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根,有清熱燥濕、瀉火解毒、止血安胎等功效[3]。主要有效成分為黃酮類(lèi)化合物,還含有少量油脂類(lèi)、蠟質(zhì)等弱極性物質(zhì)以及氨基酸、糖等強(qiáng)極性物質(zhì),其理化性質(zhì)有較大差異。本文采用固相萃取小柱來(lái)分離純化黃芩中的黃酮類(lèi)成分,除去弱極性及強(qiáng)極性的干擾物質(zhì),快速分離和富集目標(biāo)成分,提高分析檢測(cè)時(shí)的靈敏度,降低樣品對(duì)分析柱的污染,并以特征圖譜作為固相萃取分離純化黃芩中黃酮類(lèi)有效組分的評(píng)價(jià)手段,以特征圖譜的相似度和幾種主要有效成分的回收率為指標(biāo),綜合探討純化條件,保證黃酮類(lèi)成分的最大保留。

    1 儀器與試藥

    1.1 儀器

    1200系列高效液相色譜系統(tǒng)(美國(guó)安捷倫公司);6320離子阱質(zhì)譜檢測(cè)器(美國(guó)安捷倫公司),配備電噴霧離子源;Rotavapor R-3旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琪公司);BP211D型電子天平(德國(guó)賽多利斯集團(tuán));Simplicity純水儀(美國(guó)密理博公司);KDM型控溫電熱套(鄄城華魯電熱儀器有限公司)。

    1.2 試藥

    AccuBondII SPE ODS-C18Cartridges固相萃取柱(美國(guó)安捷倫公司,產(chǎn)品編號(hào)188-1320);Cleanert PA 聚酰胺固相萃取小柱(天津博納艾杰爾科技有限公司);高效液相色譜用甲醇為色譜純,水為超純水,甲酸等其他試劑均為分析純。

    黃芩為市售中藥飲片,經(jīng)山東省中醫(yī)藥研究院中藥資源研究室林慧彬研究員鑒定,均為唇形科植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的干燥根。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 黃芩提取液的制備

    稱(chēng)取黃芩粉末(過(guò)三號(hào)篩)0.3 g,置具塞錐形瓶中,加60 mL水,稱(chēng)定重量,加熱回流1 h,放冷,用水補(bǔ)足減失的重量,搖勻,過(guò)濾,即得供試品溶液1。

    2.2 黃芩HPLC特征圖譜的建立

    2.2.1 色譜條件

    色譜柱:Thermo Syncronis C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱;流動(dòng)相:乙腈(A)-0.3%磷酸(B),梯度洗脫(0~30 min,85%~75%B;30~45 min,75%~70%B;45~50 min,70%~60%B;50~55 min,60%B;55~60 min,60%~40%B;60~65 min,40%~30%B;65~75min,30%~0%B);柱溫:30 ℃;流速:1.0 mL/min;檢測(cè)波長(zhǎng):280 nm;進(jìn)樣量:10 μL。色譜圖見(jiàn)圖1。

    圖1 黃芩提取液的HPLC特征圖譜Fig.1 HPLC characteristic chromatogram of Radix Scutellariae extract

    2.2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

    取同一批黃芩提取液,重復(fù)進(jìn)樣6次,按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定,記錄特征圖譜,6次測(cè)定圖譜10個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于1%,相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于3%,儀器精密度良好。

    2.2.3 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

    取同一批黃芩按2. 1項(xiàng)下方法制備6份樣品,分別測(cè)定,6份樣品的10個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于1%,相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于3%,表明方法的重復(fù)性良好。

    2.2.4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

    取新制備的黃芩提取液,分別于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣,測(cè)定圖譜的10個(gè)特征峰相對(duì)保留時(shí)間的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.07%~0.58%,相對(duì)峰面積的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.54%~2.91%,表明該方法處理的黃芩提取液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

    2.2.5 黃芩HPLC特征圖譜中特征峰的結(jié)構(gòu)解析

    根據(jù)DAD在線(xiàn)紫外光譜信息,初步判斷1~10號(hào)峰為黃酮類(lèi)化合物,結(jié)合文獻(xiàn),通過(guò)HPLC-MSn質(zhì)譜信息對(duì)黃芩特征峰進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析,結(jié)果見(jiàn)表1。

    表1 黃芩HPLC特征圖譜中特征峰的質(zhì)譜解析

    1號(hào)峰和2號(hào)峰的分子量相同,為同分異構(gòu)體,推斷可能為白楊素-葡萄糖-阿拉伯糖苷,且1、2號(hào)峰二級(jí)質(zhì)譜碎片相同但碎片豐度不同,見(jiàn)圖2。推測(cè)是由于阿拉伯糖存在呋喃型和吡喃型兩種結(jié)構(gòu),六元環(huán)椅式構(gòu)象比五元環(huán)折疊式穩(wěn)定。因此,在相同質(zhì)譜條件下,呋喃型阿拉伯糖基易于開(kāi)環(huán),消耗的碰撞能量少,從而易于產(chǎn)生較大的中性丟失;吡喃型阿拉伯糖基相對(duì)穩(wěn)定,開(kāi)環(huán)消耗的能量大,較小的中性丟失較多。由于六元環(huán)氧孤對(duì)電子易被分散,原子之間的電負(fù)性小,因此極性小,而五元呋喃糖的電子分散程度及結(jié)構(gòu)穩(wěn)定程度低于六元吡喃糖,各原子之間的電負(fù)性較大,所以呋喃糖極性大于吡喃糖,在反相柱中先流出。故推斷1號(hào)峰為白楊素-葡萄糖-呋喃阿拉伯糖苷,2號(hào)為白楊素-葡萄糖-吡喃阿拉伯糖苷。

    A 1號(hào)峰; B 2號(hào)峰。圖2 1號(hào)峰和2號(hào)峰的二級(jí)質(zhì)譜圖Fig.2 Second-stage mass spectrum diagrams of peak 1 and peak 2

    2.3 黃芩中黃酮類(lèi)成分固相萃取純化條件的優(yōu)化

    2.3.1 在不同洗脫劑下固相萃取小柱填料的影響

    取不同類(lèi)型的SPE小柱,分別用8 mL甲醇和8 mL水預(yù)淋洗。

    精密量取按2.1項(xiàng)下方法制備的黃芩提取液1 mL,上樣,用3 mL甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)分3次淋洗SPE小柱,每次1 mL,棄去淋洗液,吹出殘留溶劑,用表2中的洗脫劑進(jìn)行洗脫,收集洗脫液至50 mL梨形瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,加1 mL甲醇,振蕩溶解,經(jīng)0.45 μm濾膜濾過(guò),即得供試品溶液2。

    以供試液2的HPLC圖譜中峰面積較大的6個(gè)特征成分(3,4,6,7,8,9號(hào)峰)為指標(biāo),與未經(jīng)固相萃取處理的供試液1比較,計(jì)算各主峰的回收率[9]。

    回收率(%)=(供試品溶液1主峰峰面積/供試品溶液2主峰峰面積)×100% 。

    采用國(guó)家藥典委員會(huì)出版的《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)2004A版》軟件計(jì)算各洗脫液特征圖譜與黃芩提取液指紋圖譜相似度。

    表2 填料類(lèi)型對(duì)主峰回收率和特征圖譜相似度的影響

    表2的結(jié)果表明,在其他工藝條件都相同的情況下,不同填料類(lèi)型的固相萃取小柱對(duì)黃芩提取液中各成分的保留率不同,當(dāng)洗脫溶劑為甲醇時(shí),聚酰胺小柱與C18小柱相比,各主峰保留率遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于C18小柱;當(dāng)洗脫溶劑為甲醇(含0.3%氨水)、甲醇(含0.3%甲酸)時(shí),主峰保留率有所提高,但仍低于C18小柱,并且洗脫液的特征圖譜與黃芩提取液特征圖譜的相似度也均低于C18小柱,因此選擇C18小柱。

    2.3.2 淋洗液種類(lèi)及洗脫液種類(lèi)的考察

    取1 mL黃芩提取液,上樣,分別用水、甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)、甲醇-0.3%甲酸(40∶60,V/V)、甲醇-0.3%甲酸(60∶40,V/V)、甲醇-0.3%甲酸(80∶20,V/V)、甲醇、甲醇(含0.3%甲酸)分三次淋洗C18SPE小柱,每次1 mL,收集每個(gè)淋洗梯度的洗脫液至50 mL梨形瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,加1 mL甲醇,振蕩溶解,按2.2.1中色譜條件測(cè)定3,4,6,7,8,9號(hào)峰面積。結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 淋洗液及洗脫液種類(lèi)對(duì)主峰回收率和特征圖譜相似度的影響

    水和甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)洗脫液中無(wú)特征成分出現(xiàn),故選擇甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)為淋洗液,既可將氨基酸、糖等強(qiáng)極性物質(zhì)洗脫下來(lái),又不影響特征成分的回收率。由表3結(jié)果可見(jiàn),甲醇-0.3%甲酸(40∶60,V/V)洗脫液中開(kāi)始出現(xiàn)特征成分,黃芩苷、黃芩素-6-O-葡萄糖酸苷、木蝴蝶素-7-O-葡萄糖酸苷、漢黃芩苷、黃芩素主要集中在甲醇-0.3%甲酸(60∶40,V/V)和甲醇-0.3%甲酸(80∶20,V/V)洗脫液中,甲醇-0.3%甲酸(60∶40,V/V)洗脫液與原提取液的相似度最高,但洗脫不完全。漢黃芩素主要集中于甲醇-0.3%甲酸(80∶20,V/V)洗脫液中,甲醇洗脫液中基本無(wú)特征成分,但當(dāng)洗脫液換為甲醇(含0.3%甲酸)時(shí),又可將部分特征成分洗脫下來(lái),故確定以甲醇(含0.3%甲酸)為洗脫液。

    2.3.2 洗脫液用量的考察

    精密量取按2.1項(xiàng)下方法制備的黃芩提取液1 mL,上樣,用3 mL甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)分3次淋洗C18SPE小柱,每次1 mL,棄去淋洗液,吹出殘留溶劑,采用甲醇(含0.3%甲酸)洗脫,每次1 mL,共洗脫4次,收集洗脫液至50 mL梨形瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,加1 mL甲醇,振蕩溶解,經(jīng)0.45 μm濾膜濾過(guò),按2.2.1中色譜條件測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果表明,第三次洗脫后仍有特征成分出現(xiàn),第四次洗脫后無(wú)特征峰,即3 mL 的甲醇(含0.3%甲酸)可將吸附的黃酮類(lèi)成分基本洗脫完全,因此確定洗脫液的用量為3 mL。

    A第一次洗脫; B第二次洗脫; C第三次洗脫; D第四次洗脫。圖3 不同體積甲醇洗脫液的色譜圖Fig.3 Chromatograms of methanol eluent at different volume

    2.3.6 方法專(zhuān)屬性

    精密吸取蒸餾水1 mL上樣,用3 mL甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)分3次淋洗SPE小柱,每次1 mL,棄去淋洗液,吹出殘留溶劑,用3 mL甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)洗脫,收集洗脫液至50 mL梨形瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,加1 mL甲醇,振蕩溶解,經(jīng)0.45 μm濾膜濾過(guò),按2.2.1項(xiàng)下方法測(cè)定,得空白溶液的色譜圖(見(jiàn)圖4)。由空白與黃芩提取液的色譜圖(圖1)比較可知,用本實(shí)驗(yàn)擬定固相萃取方法處理黃芩提取液后,在70 min色譜記錄時(shí)間內(nèi)無(wú)干擾成分流出。

    圖4 空白溶液的色譜圖Fig.4 Chromatogram of blank solution

    2.3.7 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

    稱(chēng)取黃芩粉末(過(guò)三號(hào)篩)0.3 g,置具塞錐形瓶中,加60 mL 水,稱(chēng)定重量,加熱回流1 h,放冷,用水補(bǔ)足減失的重量,搖勻,過(guò)濾,得黃芩提取液。取C18固相萃取小柱,分別用8 mL甲醇和8 mL水預(yù)淋洗SPE小柱。精密量取黃芩提取液1 mL,上樣,用3 mL甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)分3次淋洗SPE小柱,每次1 mL,棄去淋洗液,吹出殘留溶劑,用3 mL甲醇(含0.3%甲酸)洗脫,收集洗脫液至50 mL梨形瓶中,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干,加1 mL甲醇,振蕩溶解,經(jīng)0.45 μm濾膜濾過(guò),按2.2.1中色譜條件測(cè)定,計(jì)算各主峰的回收率(見(jiàn)表4)。結(jié)果表明,黃芩提取液經(jīng)固相萃取處理后黃芩苷、黃芩素-6-O-葡萄糖酸苷、木蝴蝶素-7-O-葡萄糖酸苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素的回收率均在89%以上,重現(xiàn)性較好,說(shuō)明確定的固相萃取小柱填料類(lèi)型、淋洗液種類(lèi)、洗脫液種類(lèi)及用量等條件較為合理,重復(fù)性好且主成分保留率較高。黃芩中黃酮類(lèi)成分的HPLC特征圖譜與黃芩水提液的HPLC特征圖譜相似度均大于0.98,實(shí)現(xiàn)了成分的均衡回收[9]。

    表4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=3)

    3 討論

    本實(shí)驗(yàn)采用HPLC特征圖譜,對(duì)黃芩水提液中黃酮類(lèi)成分的固相萃取條件進(jìn)行了考察,結(jié)果表明用甲醇-0.3%甲酸(20∶80,V/V)淋洗,甲醇(含0.3%甲酸)洗脫,可以特異性地獲取黃酮類(lèi)成分,6個(gè)特征成分的回收率均在89%以上。在考察固相萃取淋洗和洗脫條件中發(fā)現(xiàn),甲醇(含0.3%甲酸)洗脫能力強(qiáng)于純甲醇,可能由于黃酮類(lèi)成分多呈酸性,加酸后可抑制其電離,控制其呈分子狀態(tài),減少了洗脫時(shí)間,故加入甲酸后使甲醇的洗脫能力增強(qiáng)。

    與固相萃取前相比,黃芩水提取物經(jīng)固相萃取后浸膏重量減少了10%,故本實(shí)驗(yàn)建立的固相萃取方法可除去多糖等雜質(zhì),有利于減少非特征成分干擾、縮短分析時(shí)間和保護(hù)分析柱。

    本實(shí)驗(yàn)以黃芩中6個(gè)特征成分(黃芩苷、黃芩素-6-O-葡萄糖酸苷、木蝴蝶素-7-O-葡萄糖酸苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素)的回收率和特征圖譜的相似度作為評(píng)價(jià)指標(biāo),跟蹤評(píng)價(jià)固相萃取的處理效果,與傳統(tǒng)的以單一成分保留率為指標(biāo)的評(píng)價(jià)方法相比更為精細(xì),可較全面地反映固相萃取前處理中藥樣品時(shí)其藥效物質(zhì)的回收率,更好地體現(xiàn)了中藥多成分的特征,可為中藥中目標(biāo)成分的分離與富集方法提供參考。

    [1]賴(lài)宇紅,陳浩桉.固相萃取法在中藥分析中的應(yīng)用前景及其建立優(yōu)化新方法的策略與步驟[J].廣東藥學(xué),2002,12(2):12-16.

    [2]湯道權(quán),高媛媛,魏雅芹,等.銀杏葉提取物中四種黃酮類(lèi)成分固相萃取技術(shù)優(yōu)化[J].中藥材,2008,31(6): 918-920.

    [3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典2015年版一部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出社,2015:301.

    [4] OHKOSHI E,NAGASHIMA T,SATO H,et al. Simple preparation of baicalin from Scutellariae Radix[J]. J Chromatogr A, 2009, 1216(11): 2192-2194.

    [5]SHANG X F,HE X R,HE X Y,et al.The genus Scutellaria an ethnopharmacological and phytochemical review[J]. J Ethnopharmacol,2010,128(2):279-313.

    [6]HAN J,YE M,XU M,et al. Characterization of flavonoids in the traditional Chinese herbal medicine-Huangqin by liquid chromatography coupled with electrospray ionization mass spectrometry[J].J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci,2007, 848(2):355-362.

    [7] 趙勝男,李守拙.黃芩藥材中黃酮類(lèi)成分的HPLC-MS研究[J].承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2012, 29 (4):355-347.

    [8] 楊思敏,陳瑞戰(zhàn),董航,等.高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用快速篩選并鑒定黃芩甲醇提取物中抗氧化活性成分[J].分析化學(xué),2012,40(6):888-892.

    [9] 楊紅美,曾建國(guó),陳波,等.具有指紋特征的黃芩提取物質(zhì)量可控性研究[J].中草藥,2006,37(6):846-851.

    [10] 李守信,展金祥,劉武占,等.基于指紋圖譜的金銀花物質(zhì)組純化工藝研究[J].中草藥,2015,46(1):55-60.

    Solid phase extraction of flavonoids from Radix Scutellariae based on specific chromatogram

    GUO Wei1,2, WANG Liang1,2, ZHOU Qian1,2,NIE Ying-lan3,CUI Ning2,YU Zong-yuan2*

    (1. School of Pharmaceutical Sciences, Shandong University of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250355, China;2. Shandong Academy of Chinese Medicine, Jinan 250014, China; 3. Experimental Research Center, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100700, China)

    ∶The specific chromatogram of flavonoids in Radix Scutellariae was established by HPLC in this paper. The column filling, eluent and the elution condition of solid phase extraction were optimized using the recovery rates and specific spectral similarity of six main characteristic peaks in HPLC specific chromatogram as indexes. Experimental results confirmed that C18solid phase extraction (SPE) possessed the highest recovery rates of six components. The SPE column was rinsed with methanol-0.3% formic acid(20∶80,V/V), and then was eluted finally with methanol (containing 0.3% formic acid). After being purified, the recovery rates of six components were all over 89%, and the similarity of characteristic chromatogram was higher than 0.98. Based on HPLC characteristic chromatogram, the optimized purification process of flavonoids in Radix Scutellariae with solid phase extraction can ensure that the main effective components remain consistent before and after purification of Radix Scutellariae.

    ∶Radix Scutellariae; HPLC specific chromatogram; solid phase extraction; flavonoids

    10.3976/j.issn.1002-4026.2017.02.003

    2016-07-27

    山東省中醫(yī)藥科技發(fā)展計(jì)劃(2015-164)

    郭威(1982—),女,碩士,助理研究員,研究方向?yàn)橹兴幏治雠c質(zhì)量控制。E-mail:331527800@qq.com

    *通信作者,于宗淵,博士,研究員,研究方向?yàn)橹兴幏治雠c質(zhì)量控制。E-mail:yuzys@sohu.com

    R284.2

    A

    1002-4026(2017)02-0013-07

    猜你喜歡
    小柱黃酮類(lèi)甲酸
    志向
    少年文藝(2022年8期)2022-07-08 10:02:47
    MS-DAIL聯(lián)合MS-FINDER鑒定中藥黃酮類(lèi)化合物
    HPLC法同時(shí)測(cè)定白梅花中6種黃酮類(lèi)成分
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:18:46
    甲酸治螨好處多
    新鄉(xiāng):小城失敗者
    體積之爭(zhēng)
    甲酸鹽鉆井液完井液及其應(yīng)用之研究
    耳后游離皮片在修復(fù)鼻小柱與上唇粘連外翻畸形中的臨床應(yīng)用
    黃酮類(lèi)化合物抗心肌缺血再灌注損傷研究進(jìn)展
    中成藥(2014年10期)2014-02-28 22:29:33
    牛大力中黃酮類(lèi)成分
    中成藥(2014年10期)2014-02-28 22:29:25
    97在线视频观看| 免费av毛片视频| 午夜激情欧美在线| 高清午夜精品一区二区三区 | 色尼玛亚洲综合影院| 亚洲精品成人久久久久久| 午夜激情福利司机影院| 悠悠久久av| 亚洲国产色片| 男的添女的下面高潮视频| 午夜福利视频1000在线观看| 日本成人三级电影网站| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 欧美区成人在线视频| 一本久久中文字幕| 国产精品一区二区在线观看99 | 中国国产av一级| 日韩成人伦理影院| 免费看美女性在线毛片视频| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 超碰av人人做人人爽久久| 国产伦在线观看视频一区| 嫩草影院新地址| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 国产不卡一卡二| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产精品福利在线免费观看| 又爽又黄无遮挡网站| 看非洲黑人一级黄片| 午夜精品国产一区二区电影 | 亚洲欧洲国产日韩| 99热这里只有精品一区| 搡女人真爽免费视频火全软件| 成年av动漫网址| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产伦精品一区二区三区视频9| 别揉我奶头 嗯啊视频| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲精品色激情综合| 精品国内亚洲2022精品成人| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 久久这里有精品视频免费| a级毛片a级免费在线| 成人特级av手机在线观看| 六月丁香七月| 简卡轻食公司| 少妇人妻一区二区三区视频| 内地一区二区视频在线| 深夜精品福利| 啦啦啦韩国在线观看视频| 我要看日韩黄色一级片| 伊人久久精品亚洲午夜| 午夜福利在线观看吧| 不卡一级毛片| 亚洲精品亚洲一区二区| 男人舔奶头视频| .国产精品久久| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产精品久久电影中文字幕| 久久久久性生活片| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 国产午夜精品论理片| 久久久久九九精品影院| 亚洲精品自拍成人| 国产91av在线免费观看| 九色成人免费人妻av| 内射极品少妇av片p| 国产成人影院久久av| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产大屁股一区二区在线视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 国产精品日韩av在线免费观看| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产精品综合久久久久久久免费| 色综合色国产| 欧美高清成人免费视频www| 99精品在免费线老司机午夜| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 2021天堂中文幕一二区在线观| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 99九九线精品视频在线观看视频| 在线a可以看的网站| 国产麻豆成人av免费视频| 亚洲最大成人av| 国产亚洲av嫩草精品影院| 国产一级毛片在线| АⅤ资源中文在线天堂| 黄色配什么色好看| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲欧美成人综合另类久久久 | 日本黄色片子视频| 在线免费观看的www视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 性色avwww在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 日本免费a在线| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 青春草国产在线视频 | 国产精品精品国产色婷婷| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 国产高清激情床上av| 久久这里有精品视频免费| 久久午夜福利片| 中文欧美无线码| 99精品在免费线老司机午夜| 亚洲av第一区精品v没综合| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产一级毛片在线| 国产精品三级大全| 黄色日韩在线| 亚洲欧美精品综合久久99| 一边亲一边摸免费视频| 黄色日韩在线| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产成人精品婷婷| 亚洲经典国产精华液单| 又爽又黄无遮挡网站| a级毛片免费高清观看在线播放| av福利片在线观看| 久久99热6这里只有精品| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲成人av在线免费| 久久精品久久久久久久性| 99在线人妻在线中文字幕| 一个人看的www免费观看视频| 国产精品一二三区在线看| АⅤ资源中文在线天堂| 在线观看免费视频日本深夜| 极品教师在线视频| 久久久久久久午夜电影| 国产老妇女一区| 成年av动漫网址| 欧美日韩乱码在线| 日韩av不卡免费在线播放| 日韩视频在线欧美| 一区二区三区免费毛片| 久久精品国产自在天天线| 欧美人与善性xxx| 久久韩国三级中文字幕| 插逼视频在线观看| 男插女下体视频免费在线播放| 搡女人真爽免费视频火全软件| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国产成人aa在线观看| 国产成人福利小说| 国产免费一级a男人的天堂| 天堂影院成人在线观看| 欧美成人a在线观看| 久久国产乱子免费精品| 91精品一卡2卡3卡4卡| 一级黄片播放器| 久久久久久国产a免费观看| 91久久精品电影网| 免费人成在线观看视频色| 久久久国产成人免费| 国产成年人精品一区二区| 九九在线视频观看精品| 国产在视频线在精品| 午夜老司机福利剧场| 色视频www国产| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产精品嫩草影院av在线观看| 午夜免费激情av| 午夜免费激情av| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 亚洲自偷自拍三级| 在线观看av片永久免费下载| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 秋霞在线观看毛片| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲乱码一区二区免费版| 免费看光身美女| 成年av动漫网址| 亚洲精品久久国产高清桃花| 美女黄网站色视频| 中文字幕av成人在线电影| 床上黄色一级片| 日韩av在线大香蕉| 亚洲久久久久久中文字幕| 欧美成人精品欧美一级黄| 久久99热6这里只有精品| 欧美丝袜亚洲另类| 男女那种视频在线观看| 国产淫片久久久久久久久| 乱人视频在线观看| 久久国产乱子免费精品| 波野结衣二区三区在线| 亚洲av成人精品一区久久| 国产人妻一区二区三区在| 黄色视频,在线免费观看| 成人三级黄色视频| 一个人看的www免费观看视频| 精品久久久久久久久久久久久| 毛片女人毛片| 色综合站精品国产| 久久人人精品亚洲av| 网址你懂的国产日韩在线| 国产综合懂色| 在线免费十八禁| 偷拍熟女少妇极品色| 精品国产三级普通话版| 免费观看在线日韩| 人人妻人人看人人澡| 亚洲欧美精品综合久久99| 国模一区二区三区四区视频| 又粗又硬又长又爽又黄的视频 | 亚洲真实伦在线观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 观看免费一级毛片| 国产成人aa在线观看| 嫩草影院新地址| 久久久久久伊人网av| 成人毛片60女人毛片免费| 国产成人午夜福利电影在线观看| 晚上一个人看的免费电影| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲真实伦在线观看| 看十八女毛片水多多多| 青春草视频在线免费观看| 久久久国产成人精品二区| 中国美女看黄片| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 日本与韩国留学比较| 日韩国内少妇激情av| 久久久久久久亚洲中文字幕| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 成人午夜高清在线视频| 国产不卡一卡二| 色哟哟哟哟哟哟| 国产探花极品一区二区| 日本一本二区三区精品| 美女高潮的动态| 青青草视频在线视频观看| 色综合亚洲欧美另类图片| 日韩欧美 国产精品| 天天一区二区日本电影三级| 精品久久久久久久久久免费视频| 秋霞在线观看毛片| 高清毛片免费观看视频网站| 欧美性感艳星| 日韩欧美三级三区| 国产真实伦视频高清在线观看| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 麻豆成人av视频| 黄色欧美视频在线观看| 特大巨黑吊av在线直播| 99久国产av精品国产电影| 搡老妇女老女人老熟妇| 波多野结衣高清作品| 3wmmmm亚洲av在线观看| 22中文网久久字幕| 不卡视频在线观看欧美| 又爽又黄a免费视频| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲精品久久久久久婷婷小说 | 久久韩国三级中文字幕| 淫秽高清视频在线观看| 美女黄网站色视频| 亚洲成人中文字幕在线播放| 麻豆久久精品国产亚洲av| 内射极品少妇av片p| 成人午夜精彩视频在线观看| 高清在线视频一区二区三区 | 免费av不卡在线播放| 欧美人与善性xxx| 国产精品野战在线观看| 99久久人妻综合| 桃色一区二区三区在线观看| 1024手机看黄色片| 好男人视频免费观看在线| 综合色丁香网| 国产一区二区在线av高清观看| 99国产精品一区二区蜜桃av| 精品久久久久久久久久久久久| 日本-黄色视频高清免费观看| 九九在线视频观看精品| 国产高清激情床上av| 免费搜索国产男女视频| 美女 人体艺术 gogo| 日本在线视频免费播放| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产精品久久久久久久电影| 2021天堂中文幕一二区在线观| 黄片wwwwww| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产av在哪里看| 2022亚洲国产成人精品| 午夜福利高清视频| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 午夜福利视频1000在线观看| 久久韩国三级中文字幕| 一区二区三区四区激情视频 | 校园春色视频在线观看| 亚洲精品456在线播放app| 国产亚洲精品av在线| 26uuu在线亚洲综合色| 色播亚洲综合网| 国产视频内射| 免费观看精品视频网站| 亚洲av二区三区四区| 最好的美女福利视频网| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 免费av不卡在线播放| 亚洲色图av天堂| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产成人一区二区在线| 中文资源天堂在线| 亚洲,欧美,日韩| 搞女人的毛片| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 久久久久久久久久成人| 国产成人一区二区在线| 国产成人午夜福利电影在线观看| 国产在线男女| 免费av观看视频| 国产精品不卡视频一区二区| 在线播放无遮挡| 久久久久免费精品人妻一区二区| 国产亚洲精品av在线| 国产午夜精品论理片| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产伦在线观看视频一区| 亚洲,欧美,日韩| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 欧美+日韩+精品| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 亚洲av不卡在线观看| 内地一区二区视频在线| 久久久久久久久久久丰满| 亚洲美女搞黄在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品| 亚洲国产精品国产精品| 国产精品永久免费网站| 乱码一卡2卡4卡精品| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 国产大屁股一区二区在线视频| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 亚洲在线观看片| 国产色爽女视频免费观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 成人一区二区视频在线观看| 成人午夜精彩视频在线观看| kizo精华| 久久鲁丝午夜福利片| 搞女人的毛片| 亚洲av二区三区四区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 亚洲国产高清在线一区二区三| 成年女人看的毛片在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 日日啪夜夜撸| 亚洲精品成人久久久久久| 日韩精品有码人妻一区| 日日撸夜夜添| 国产亚洲91精品色在线| 成年女人永久免费观看视频| 深爱激情五月婷婷| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 日韩亚洲欧美综合| 成年免费大片在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 又爽又黄a免费视频| 日韩视频在线欧美| 欧美日韩国产亚洲二区| 国语自产精品视频在线第100页| av.在线天堂| 2022亚洲国产成人精品| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 久久久久久久久久黄片| 激情 狠狠 欧美| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 国产老妇伦熟女老妇高清| 麻豆av噜噜一区二区三区| 久久久久久久久久久丰满| 99久久精品一区二区三区| 亚洲欧美日韩东京热| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产亚洲5aaaaa淫片| 久久久成人免费电影| 久久久久久久午夜电影| 99国产精品一区二区蜜桃av| 男人和女人高潮做爰伦理| 久久久国产成人精品二区| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 岛国在线免费视频观看| 波多野结衣巨乳人妻| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲成人中文字幕在线播放| 五月玫瑰六月丁香| 国产黄片视频在线免费观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 日本黄色片子视频| 久久久a久久爽久久v久久| 久久久久免费精品人妻一区二区| 女同久久另类99精品国产91| 蜜臀久久99精品久久宅男| 日日撸夜夜添| 一级毛片久久久久久久久女| 美女cb高潮喷水在线观看| 女人被狂操c到高潮| 99热这里只有是精品50| 日本熟妇午夜| 22中文网久久字幕| www.色视频.com| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 男人的好看免费观看在线视频| 久久久国产成人精品二区| 亚洲在线观看片| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲精品自拍成人| 99热只有精品国产| av在线播放精品| 免费在线观看成人毛片| 又黄又爽又刺激的免费视频.| 天天一区二区日本电影三级| 国产精品综合久久久久久久免费| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 听说在线观看完整版免费高清| 亚洲欧美日韩高清专用| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 亚洲,欧美,日韩| 五月玫瑰六月丁香| 日本在线视频免费播放| 亚洲成人精品中文字幕电影| 天天躁日日操中文字幕| 成人美女网站在线观看视频| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 99九九线精品视频在线观看视频| 中文字幕制服av| 国产极品精品免费视频能看的| 久久久久久国产a免费观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 日本在线视频免费播放| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产av在哪里看| 在线观看午夜福利视频| 国产色婷婷99| 丰满的人妻完整版| 又爽又黄无遮挡网站| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品三级大全| 国产v大片淫在线免费观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 国国产精品蜜臀av免费| 老司机福利观看| 三级国产精品欧美在线观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 国产精品一区二区三区四区免费观看| 少妇人妻一区二区三区视频| 舔av片在线| 人妻系列 视频| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 国产黄色小视频在线观看| 国产亚洲欧美98| 免费av观看视频| 久久久午夜欧美精品| 中文字幕熟女人妻在线| 午夜激情福利司机影院| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲成人久久性| 床上黄色一级片| 简卡轻食公司| 国产伦精品一区二区三区四那| 成人毛片a级毛片在线播放| 床上黄色一级片| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 中文字幕久久专区| 悠悠久久av| 成年女人永久免费观看视频| 能在线免费观看的黄片| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 日韩av不卡免费在线播放| 久久久精品94久久精品| www.av在线官网国产| 3wmmmm亚洲av在线观看| 日韩av在线大香蕉| 别揉我奶头 嗯啊视频| 人体艺术视频欧美日本| 美女黄网站色视频| 午夜精品在线福利| 可以在线观看毛片的网站| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产av不卡久久| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲成av人片在线播放无| 亚洲自拍偷在线| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 日本三级黄在线观看| 插逼视频在线观看| 亚洲av成人av| 51国产日韩欧美| 麻豆成人av视频| 日韩精品有码人妻一区| 最后的刺客免费高清国语| 成人美女网站在线观看视频| 91久久精品电影网| 我要看日韩黄色一级片| 国产v大片淫在线免费观看| 国产黄片美女视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 两个人视频免费观看高清| 日本在线视频免费播放| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产男人的电影天堂91| 99热6这里只有精品| 看免费成人av毛片| av免费在线看不卡| 国产精品一区www在线观看| av在线亚洲专区| 久久这里只有精品中国| 国产亚洲av嫩草精品影院| 久久这里有精品视频免费| 国产精品无大码| 97热精品久久久久久| 亚洲丝袜综合中文字幕| 中文欧美无线码| 中国美女看黄片| 日韩一区二区视频免费看| 国产一区二区三区av在线 | 精品国内亚洲2022精品成人| 蜜臀久久99精品久久宅男| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 少妇熟女欧美另类| 黄色配什么色好看| 爱豆传媒免费全集在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产伦精品一区二区三区四那| 久久人人精品亚洲av| 天天躁日日操中文字幕| 99热精品在线国产| 免费观看a级毛片全部| 男插女下体视频免费在线播放| 人人妻人人看人人澡| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 国产真实乱freesex| 亚洲最大成人中文| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 女人被狂操c到高潮| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 99九九线精品视频在线观看视频| 精品人妻一区二区三区麻豆| 久久久午夜欧美精品| 亚洲精品久久国产高清桃花| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 成人无遮挡网站| 国产午夜精品一二区理论片| 99久久精品热视频| 久久精品国产亚洲网站| 国产老妇女一区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 午夜久久久久精精品| av在线观看视频网站免费| 春色校园在线视频观看| 搞女人的毛片| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 人妻久久中文字幕网| 午夜福利高清视频| 亚洲五月天丁香| 亚洲成av人片在线播放无| 我的女老师完整版在线观看| 国产69精品久久久久777片| 亚洲国产高清在线一区二区三| 日韩成人av中文字幕在线观看| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产一区二区在线观看日韩| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 婷婷精品国产亚洲av| av在线天堂中文字幕| 精品久久久噜噜| 99久久精品热视频| 午夜激情欧美在线| 欧美三级亚洲精品| 国产成人精品婷婷| 成年av动漫网址| 亚洲乱码一区二区免费版| 国产片特级美女逼逼视频| 婷婷精品国产亚洲av| 一级毛片久久久久久久久女| 欧美潮喷喷水| 国产精品免费一区二区三区在线| 91精品国产九色| 2022亚洲国产成人精品| 亚洲欧美日韩高清专用| 国产高清不卡午夜福利| 国产高清有码在线观看视频| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产精品人妻久久久影院| 国产久久久一区二区三区| 少妇人妻一区二区三区视频| 热99re8久久精品国产| 国产午夜福利久久久久久| 欧美成人a在线观看| 国产精品乱码一区二三区的特点| 久久久久久久午夜电影| av在线老鸭窝| www.色视频.com| 亚洲久久久久久中文字幕| 国产一区二区三区av在线 | 欧美最新免费一区二区三区| 日日干狠狠操夜夜爽| 久久久久免费精品人妻一区二区| 有码 亚洲区| 亚洲三级黄色毛片| 深夜精品福利| 老女人水多毛片| 亚洲av男天堂| 成人一区二区视频在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看|