幾個(gè)品牌的黃曲霉毒素膠體金快速檢測(cè)卡的質(zhì)量評(píng)價(jià)

羅俊霞范 知賈 冬劉 萃趙建波(河南省鄭州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)流通中心 450006；河南省鄭州市農(nóng)業(yè)信息中心；河南省鄭州市園藝工作站）

幾個(gè)品牌的黃曲霉毒素膠體金快速檢測(cè)卡的質(zhì)量評(píng)價(jià)

羅俊霞1范 知2賈 冬1劉 萃1趙建波3*(1河南省鄭州市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量檢測(cè)流通中心 450006；2河南省鄭州市農(nóng)業(yè)信息中心；3河南省鄭州市園藝工作站）

為了解市面上銷售的黃曲霉毒素B1膠體金快速檢測(cè)卡的質(zhì)量，對(duì)幾個(gè)品牌的檢測(cè)卡的最低檢測(cè)限、操作步驟和膠體金質(zhì)量以及最終的檢測(cè)效果等進(jìn)行了比較和評(píng)價(jià)。結(jié)果顯示：A公司的產(chǎn)品最好、B公司的產(chǎn)品次之、C公司的產(chǎn)品第三；雖然A公司和C公司的產(chǎn)品顯色效果較好，但在進(jìn)行氮吹時(shí)對(duì)檢測(cè)人員的身體損害較大；B公司的檢測(cè)卡顯色不清晰，究其原因可能是該公司的抗原抗體質(zhì)量較差或者研發(fā)技術(shù)不成熟。

黃曲霉毒素；膠體金快速檢測(cè)卡；質(zhì)量評(píng)價(jià)

黃曲霉毒素（Afaltoxin，簡(jiǎn)寫為AF）是黃曲霉菌和寄生曲霉菌的代謝物，目前已經(jīng)確定黃曲霉毒素有A F B1、AFM1等18種［1，2］，其中以AFB1的致癌性最強(qiáng)［3,4］。黃曲霉毒素廣泛存在于發(fā)霉的玉米、小麥等糧食作物和花生、菜籽等油料作物中以及飼料中［1,5］，牛奶和羊奶中也有發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素［6］。因?yàn)辄S曲霉毒素強(qiáng)烈的致癌性、致畸性，世界衛(wèi)生組織將其列為Ⅰ類致癌物［7］，世界各國紛紛制定了各類食品（包括飼料）中黃曲霉毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)［8-9］。據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織調(diào)查，截止1995年，全球已有77個(gè)國家和地區(qū)針對(duì)真菌毒素設(shè)立了限量法令［9］，中華人民共和國衛(wèi)生部于2011年發(fā)布的GB 2761標(biāo)準(zhǔn)中重新修訂了食品中真菌毒素AFB1、AFM1的限量指標(biāo)，并分別規(guī)定了糧食作物、堅(jiān)果級(jí)油料、油脂、豆類及其他食品中黃曲霉毒素的限量［10］。正因如此，糧食中黃曲霉毒素的檢測(cè)也成為了科研工作者的關(guān)注焦點(diǎn)。目前，黃曲霉毒素常用的檢測(cè)方法有薄層色譜法、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、熒光分光光度法［11］、生物學(xué)方法、免疫學(xué)方法［12-14］等，另外，鄧省亮、陳笑笑、王督等人分別開展了膠體金免疫層析法快速檢測(cè)AFB1的研究［15-17］，但上述方法均存在諸多缺陷，如操作復(fù)雜，耗費(fèi)時(shí)間長、對(duì)檢測(cè)人員的要求較高等，且生物學(xué)方法還只能用于定性檢測(cè)而無法進(jìn)行定量檢測(cè)。

目前，膠體金免疫層析技術(shù)已廣泛應(yīng)用于糧油作物中的黃曲霉毒素檢測(cè)，但市場(chǎng)上黃曲霉毒素的膠體金快速檢測(cè)卡林林總總，缺乏有效的監(jiān)督監(jiān)管機(jī)制來檢查或衡量這些檢測(cè)卡的檢測(cè)效果，同時(shí)也缺乏統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，所以，在使用這些檢測(cè)卡時(shí)有必要對(duì)它們進(jìn)行陰陽性樣品的比較測(cè)試，篩選出質(zhì)量較優(yōu)的檢測(cè)卡用于日常檢測(cè)。為此，筆者特開展了本次試驗(yàn)，以期對(duì)日常檢測(cè)的產(chǎn)品購置有所幫助。

1 材料與方法

1.1 試劑和材料

AFB1標(biāo)準(zhǔn)溶液購于Sigma公司，實(shí)驗(yàn)過程中所用的有機(jī)溶劑均為色譜純，實(shí)驗(yàn)用水均為純凈水，黃曲霉毒素B1膠體金免疫層析快速檢測(cè)卡分別購于北京、深圳、杭州、無錫、武漢，具體情況見表1。玉米為市場(chǎng)上購買，經(jīng)液相色譜檢測(cè)AFB1為陰性的玉米糝。

1.2 儀器和設(shè)備

表1 幾種品牌的黃曲霉毒素膠體金快速檢測(cè)卡的基本情況

天平為余姚紀(jì)銘稱重校驗(yàn)設(shè)備有限公司的感量為0.01g、型號(hào)為JM 2102的天平；旋渦混合器品牌為華利達(dá)，型號(hào)為WH-861；離心機(jī)是德國生產(chǎn)、品牌為Hettich、型號(hào)為Uniwersal 320R；氮吹儀是美國生產(chǎn)、品牌為Organomation Associates、型號(hào)為N-EVAPTM 112；移液器為美國熱電的Finnpipette的不同規(guī)格的單道可調(diào)移液器。

1.3 檢測(cè)方法

本試驗(yàn)根據(jù)國標(biāo)［10］給出的糧食作物的限量標(biāo)準(zhǔn)選取滿足要求的A、B、C、D四家公司的產(chǎn)品，分別就各公司檢測(cè)卡說明書所給出的稱樣量于第1天下午稱取玉米糝樣品各40個(gè)，其中20個(gè)樣品不添加AFB1的標(biāo)準(zhǔn)品，為陰性樣品；20個(gè)樣品添加AFB1的標(biāo)準(zhǔn)品，制備成濃度為5?g/kg的陽性添加樣品；于第2天上午根據(jù)各公司說明書中的步驟進(jìn)行檢測(cè)、分析；根據(jù)分析結(jié)果計(jì)算出假陽性率和假陰性率；判讀后將圖片發(fā)給廠家工程師，讓廠家工程師進(jìn)行判讀，也據(jù)此計(jì)算出假陽性率和假陰性率。同時(shí)就各品牌檢測(cè)卡的最低檢測(cè)限、操作步驟和膠體金質(zhì)量各方面進(jìn)行比較和評(píng)價(jià)。

2 結(jié)果與分析

2.1 說明書的檢測(cè)限

A、B、C、D四家公司的產(chǎn)品都滿足國家糧食作物中AFB15 μg/kg的限量要求，而E公司的檢測(cè)卡的最低檢測(cè)限是12 μg/kg，不能滿足國家對(duì)糧食作物中AFB1限量的要求。

2.2 從前處理的操作步驟方面評(píng)價(jià)

A公司、B公司和D公司的檢測(cè)卡的操作方法比較簡(jiǎn)便，A公司的產(chǎn)品需要提取、離心、取上清液進(jìn)行稀釋后點(diǎn)卡；B公司的檢測(cè)卡提取之后需要與復(fù)溶液或緩沖溶液按照一定比例進(jìn)行混合、混勻后進(jìn)行點(diǎn)卡；D公司的檢測(cè)卡的前處理只需提取、離心就可以點(diǎn)卡；C公司的產(chǎn)品則需要提取、離心、氮吹、復(fù)溶、稀釋之后進(jìn)行點(diǎn)卡。

2.3 膠體金的質(zhì)量方面

膠體金的質(zhì)量評(píng)價(jià)是從T線和C線的顯色效果進(jìn)行評(píng)價(jià)的，A公司和C公司的檢測(cè)卡顯色均勻、清晰，未出現(xiàn)斷斷續(xù)續(xù)、若隱若現(xiàn)的情況，說明他們的抗原抗體質(zhì)量好或技術(shù)過硬；B公司的檢測(cè)卡顯色不清晰，有斷斷續(xù)續(xù)、若隱若現(xiàn)的情況發(fā)生，其原因可能是該公司的抗原抗體質(zhì)量較差或研發(fā)技術(shù)不夠成熟；D公司的檢測(cè)卡顯色非常不均勻，質(zhì)量最差。

2.4 檢測(cè)效果方面

由表2及實(shí)際檢測(cè)效果可知，A公司的產(chǎn)品采用消線法，40個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果是20個(gè)陽性樣品的T線均消線，而20個(gè)陰性樣品則呈現(xiàn)T線比C線顏色淺，拍了圖片發(fā)給廠家工程師，廠家工程師判定結(jié)果和添加實(shí)際完全符合，說明樣品里可能含有黃曲霉毒素，只是含量較低，小于5 ppb，所以陰性樣品均表現(xiàn)為T線比C線顏色淺。

B公司的產(chǎn)品采用T線與C線比較的方法，圖片發(fā)給廠家工程師，廠家的判定結(jié)果和添加實(shí)際完全符合，符合率是100%；因?yàn)橛嘘幮詷悠纷鳛閷?duì)照，筆者自己判定結(jié)果有15%的不符合率,也就是說假陰性率為15%。

C公司的產(chǎn)品采用消線法，但從40個(gè)樣品的檢測(cè)結(jié)果看，所采用的不是消線法，而是T線、C線比較的方法，陰性樣品的C線均比T線顏色深，而陽性樣品的T線均比C線顏色淺。如果沒有陰、陽性樣品做對(duì)照，單單按照說明書的要求進(jìn)行判定，5 ppb的添加樣品均是陰性的，廠家工程師的判斷也是如此，也就是說按照試劑盒說明書判斷假陰性率和廠家工程師判定假陰性率均是100%。

D公司的產(chǎn)品采用T線、C線比較的方法，20個(gè)陰性樣品的C線均比T線顏色淺，20個(gè)添加樣品中有14個(gè)樣品的T線和C線顏色一樣深淺，只有6個(gè)樣品的T線比C線顏色淺。也就是說有70%的假陰性率。

E公司的產(chǎn)品，因說明書上的檢出限很高，為12μg/kg，同時(shí)稱樣量也比較大，所以制備陽性樣品所需要的標(biāo)準(zhǔn)品量很大，未進(jìn)行測(cè)試。

表2 幾種品牌的黃曲霉毒素膠體金快速檢測(cè)卡的檢測(cè)效果比較

3 結(jié)論與討論

檢測(cè)結(jié)果表明，A公司的產(chǎn)品最好、B公司的產(chǎn)品次之、C公司的產(chǎn)品第3。但這只是一批試劑盒的檢測(cè)結(jié)果，如果要知道該品牌的試劑盒是否穩(wěn)定，還需要進(jìn)行穩(wěn)定性試驗(yàn)，考察多批試劑盒；同時(shí)，還應(yīng)該考察其對(duì)實(shí)際的陽性樣品的檢測(cè)結(jié)果。由于每個(gè)產(chǎn)品的判定標(biāo)準(zhǔn)不同，因此，有必要請(qǐng)廠家工程師對(duì)檢測(cè)人員進(jìn)行專門培訓(xùn)。

雖然A公司和C公司的產(chǎn)品顯色效果較好，但因前處理步驟較為繁瑣，需要進(jìn)行氮吹濃縮，需要配置氮吹儀，在進(jìn)行樣品檢測(cè)時(shí)，如果樣品里含有黃曲霉毒素B1，在進(jìn)行氮吹時(shí)對(duì)檢測(cè)人員的身體損害較大，這也應(yīng)該作為考察產(chǎn)品質(zhì)量的主要因素。

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2016-10-28

*為通訊作者。