卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF表達(dá)變化及意義

張艷慧, 馮艷奇,張愛萍

(1黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院,鄭州450063；2河南醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校；3鄭州市中醫(yī)院)

卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF表達(dá)變化及意義

張艷慧1, 馮艷奇2,張愛萍3

(1黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院,鄭州450063；2河南醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校；3鄭州市中醫(yī)院)

目的 觀察卵巢癌患者組織中切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因(ERCC1)、基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)、血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的表達(dá)變化，并探討其臨床意義。方法 收集60例卵巢癌患者的癌組織及其20例癌旁正常組織，采用免疫組化SP法檢測ERCC1、MMP-2、VEGF，分析三者與卵巢癌患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果 卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF陽性表達(dá)率均高于癌旁正常組織(P均<0.05)，臨床分期高的卵巢癌組織ERCC1表達(dá)高于臨床分期低者(P<0.05)，分化程度低、臨床分期高和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移卵巢癌組織MMP-2、VEGF表達(dá)高于分化程度高、臨床分期低和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)。MMP-2、VEGF陽性表達(dá)與陰性表達(dá)者5年生存率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)，ERCC1陽性表達(dá)者5年生存率高于陰性表達(dá)者(P<0.05)。結(jié)論 卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF表達(dá)增加，三者均在卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，且ERCC1可作為卵巢癌患者預(yù)后判斷的參考指標(biāo)。

卵巢癌；切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因；基質(zhì)金屬蛋白酶2；血管內(nèi)皮生長因子

卵巢癌是病死率最高的一類婦科惡性腫瘤，70%診斷時已有卵巢癌浸潤、盆腹腔轉(zhuǎn)移[1]。腫瘤轉(zhuǎn)移是多基因、多階段、多步驟相互作用的級聯(lián)反應(yīng)，形成腫瘤新生血管與降解細(xì)胞外基質(zhì)金屬是此過程中兩個至關(guān)重要的環(huán)節(jié)[2]。切除修復(fù)交叉互補(bǔ)基因(ERCC1)參與DNA的修復(fù)，與腫瘤的生長分化密切相關(guān)；基質(zhì)金屬蛋白酶2(MMP-2)與多種腫瘤的轉(zhuǎn)移、侵襲有關(guān)；血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)能夠誘導(dǎo)血管生成，導(dǎo)致腫瘤的生長、侵襲及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本研究觀察了卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF的表達(dá)，分析其表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理因素及預(yù)后的關(guān)系?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2004年6月～2008年6月黃河科技學(xué)院附屬醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)治療的卵巢癌患者60例，年齡37～66歲。病理類型：黏液性囊腺癌15例，漿液性囊腺癌33例，子宮內(nèi)膜樣癌10例，其他類型2例；組織高分化 28 例，中分化 22例，低分化 10例；臨床分期Ⅰ～Ⅱ期 44例，Ⅲ～Ⅳ期16例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移27例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例；單側(cè)發(fā)病48例，雙側(cè)發(fā)病12例；術(shù)前均未接受過化療、放療或免疫治療。術(shù)中收集所有患者的癌組織及其20例癌旁正常組織，術(shù)后均經(jīng)病理確診?；颊咝g(shù)后均進(jìn)行30個月的隨訪，末次隨訪至2011年10月。

1.2 ERCC1、MMP-2、VEGF檢測方法 所有組織標(biāo)本用4%甲醛固定，脫水，包埋，切片，切片厚度為4 μm。先將切片進(jìn)行抗原修復(fù)，在0.01 mmol/L檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0)中放入切片，置入水浴鍋內(nèi)煮20 min后取出；切片冷卻后用PBS液洗3次，加入一抗，置入4 ℃冰箱過夜；第2天取出后再用PBS液洗3×3 min，加入二抗(En Vision法)試劑，置入37 ℃水浴箱30 min；取出后用PBS液洗3次，DAB顯色10 min；最后，用蘇木精襯染、分化、藍(lán)化，脫水，樹脂封片。結(jié)果判定：染色結(jié)果由兩名有經(jīng)驗(yàn)的病理科醫(yī)生閱片審核，所有標(biāo)本置于10×40倍光學(xué)顯微鏡下觀察。每例隨機(jī)選取5個視野，計數(shù)每個視野陽性細(xì)胞所占的比例，取平均值。ERCC1定位于細(xì)胞核內(nèi)，MMP-2與VEGF定位于細(xì)胞質(zhì)中，均以出現(xiàn)棕色或棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞。染色強(qiáng)度評分標(biāo)準(zhǔn): 不著色 0 分,黃色1分,棕黃色2 分，黃褐色3 分。陽性細(xì)胞所占比例評分標(biāo)準(zhǔn): 陽性細(xì)胞數(shù)﹤5%者0 分，5%～﹤30% 者 1 分，30%～﹤70%者2 分，≥71%者3分。兩種評分相乘≥3者視為免疫染色陽性。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件。計數(shù)資料比較采用χ2檢驗(yàn)，采用Kaplan-Meier進(jìn)行生存分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌及其癌旁正常組織ERCC1、MMP-2、VEGF表達(dá)比較 卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF陽性率分別為40.00%(24/60)、78.33%(47/60)、86.67%(52/60)，均高于癌旁正常組織的0、10.00%(2/20)、20.00%(4/20)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。

2.2 ERCC1、MMP-2、VEGF表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系 臨床分期高的卵巢癌組織ERCC1表達(dá)高于臨床分期低者(P<0.05)，分化程度低、臨床分期高和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移卵巢癌組織MMP-2、VEGF表達(dá)高于分化程度高、臨床分期低和無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)。見表1 。

表1 ERCC1、MMP-2、VEGF表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系

2.3 ERCC1、MMP-2、VEGF表達(dá)與患者生存率的關(guān)系 Kaplan-Meier生存分析顯示，MMP-2、VEGF陽性表達(dá)者5年生存率分別為19.41%、20.28%，MMP-2、VEGF陰性表達(dá)者分別為21.52%、22.41%，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P均>0.05)；ERCC1陽性表達(dá)者5年生存率為18.41%，高于陰性表達(dá)者的11.23%(P<0.05)。

3 討論

卵巢癌是婦科疾病中常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌，嚴(yán)重威脅婦女的生命健康[3，4]。由于卵巢的發(fā)育、解剖結(jié)構(gòu)及內(nèi)分泌功能較復(fù)雜，疾病的早期癥狀不典型，很難在術(shù)前鑒別卵巢腫瘤的組織類型及其良惡程度[5]。卵巢上皮癌是卵巢惡性腫瘤中最多見的一種，其次是惡性生殖細(xì)胞腫瘤[6]。大約30%的卵巢上皮癌患者在手術(shù)中發(fā)現(xiàn)其腫瘤仍局限于卵巢，多數(shù)患者在手術(shù)時發(fā)現(xiàn)病變已擴(kuò)散到子宮、大網(wǎng)膜、附件及盆腔各器官，侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤患者治療失敗和致死的主要原因之一。所以，早期診斷卵巢癌、及時進(jìn)行手術(shù)治療是臨床上面臨上的一大難題[7，8]。

ERCC1參與核苷酸剪切修復(fù)，是其家族中具有特異性的重要成員之一，在19號染色體表達(dá)，可編碼297個氨基酸的蛋白，作用于DNA單鏈?zhǔn)軗p處5′端，參與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及增殖[9]。有研究[10]報道，ERCC1表達(dá)陽性的患者其術(shù)后生存期高于ERCC1表達(dá)陰性的患者;亦有研究[11]報道，ERCC1的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的臨床分期、組織學(xué)類型及預(yù)后密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，臨床分期高者ERCC-1表達(dá)高于臨床分期低者，且ERCC1陽性表達(dá)者總生存率高于陰性表達(dá)者。說明ERCC1的表達(dá)與生存顯著相關(guān)，影響患者預(yù)后，該結(jié)論與上述研究相符。MMP-2在血管生成過程中參與血管基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的降解，而降解細(xì)胞外基質(zhì)可為腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移提供路徑[12]。有研究[13]報道，MMP-2能夠破壞基底膜的完整性，致使癌細(xì)胞向其他部位轉(zhuǎn)移，且MMP-2陽性表達(dá)率在伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的卵巢癌患者明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者。VEGF是血管內(nèi)皮特異性的有絲分裂原，參與血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、遷移和血管構(gòu)建的調(diào)控。VEGF可使血管的滲透性增加，為腫瘤轉(zhuǎn)移提供基質(zhì)[14]。本研究結(jié)果顯示，ERCC1、MMP-2、VEGF在卵巢癌組織中的陽性表達(dá)率均高于癌旁正常組織，MMP-2、VEGF表達(dá)與卵巢癌的浸潤程度、臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，而與患者年齡、腫塊大小、病理類型及發(fā)生部位無關(guān)。

綜上所述，腫瘤的形成、發(fā)展及轉(zhuǎn)移都是一個多基因相互作用的復(fù)雜過程。卵巢癌組織中ERCC1、MMP-2、VEGF表達(dá)增加，且ERCC1表達(dá)與患者預(yù)后關(guān)系密切。因此，MMP-2、VEGF參與了卵巢癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移，檢測ERCC1、MMP-2、VEGF的表達(dá)水平可作為卵巢癌患者病情及預(yù)后判斷的重要參考指標(biāo)。

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張愛萍(E-mail: 389974090@qq.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.10.023

R713.6

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1002-266X(2017)10-0067-03

2016-10-20)