時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)IVF/ICSI患者早期受精和胚胎發(fā)育潛能的影響

郭穎,連方,孫振高,吳海萃,高海霞,張楠

(1山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，濟(jì)南250014；2山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院)

時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)IVF/ICSI患者早期受精和胚胎發(fā)育潛能的影響

郭穎1，2,連方2,孫振高2,吳海萃2,高海霞2,張楠2

(1山東中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院，濟(jì)南250014；2山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院)

目的 觀察時(shí)差成像系統(tǒng)對(duì)體外受精/卵胞質(zhì)內(nèi)單精子顯微注射(IVF/ICSI)患者早期受精和胚胎發(fā)育潛能的影響。方法 回顧性分析104例不孕患者的臨床資料，共行IVF/ICSI治療104個(gè)周期。胚胎受精后，40例(觀察組)采用時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行胚胎培養(yǎng)，采用時(shí)間參數(shù)結(jié)合形態(tài)學(xué)指標(biāo)篩選胚胎；64例(對(duì)照組)采用常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行胚胎培養(yǎng)，采用形態(tài)學(xué)指標(biāo)篩選胚胎。比較兩組的受精率、卵裂數(shù)、可用胚胎率、臨床妊娠率。結(jié)果 觀察組受精率82.37%、卵裂率92.80%、可用胚胎率50.21%、臨床妊娠率62.50%，對(duì)照組受精率75.85%、卵裂率94.40%、可用胚胎率45.11%、臨床妊娠率50.00%。兩組受精率、卵裂率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P均>0.05)，可用胚胎率、臨床妊娠率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。結(jié)論 IVF/ICSI患者胚胎受精后采用時(shí)差成像培養(yǎng)，對(duì)早期受精無(wú)明顯影響，但可通過(guò)提高胚胎發(fā)育潛能改善臨床結(jié)局。

不孕癥；時(shí)差成像；體外受精；卵胞質(zhì)內(nèi)單精子顯微注射；胚胎篩選；臨床妊娠

隨著國(guó)家二孩政策的全面放開，體外受精-胚胎移植 (IVF-ET)作為一項(xiàng)可以治療不孕癥的人類輔助生殖技術(shù)受到更多的關(guān)注。然而，妊娠率不高仍然是當(dāng)今輔助生殖技術(shù)的發(fā)展瓶頸之一[1]。如何提高胚胎的可利用率，獲得更高的臨床妊娠率成為本領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，如何挑選早期胚胎中具有較高發(fā)育潛能的優(yōu)質(zhì)胚胎成為胚胎學(xué)研究的關(guān)鍵?，F(xiàn)有常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)的胚胎評(píng)價(jià)方法是根據(jù)伊斯坦布爾共識(shí)[2]，在特定的時(shí)間點(diǎn)對(duì)胚胎進(jìn)行觀察，根據(jù)形態(tài)學(xué)參數(shù)及發(fā)育情況對(duì)胚胎進(jìn)行篩選。該法將胚胎發(fā)育這個(gè)動(dòng)態(tài)過(guò)程，人為選取特定時(shí)間點(diǎn)來(lái)進(jìn)行觀察，本身存在一定的局限性[3]；加之反復(fù)開箱，造成胚胎培養(yǎng)環(huán)境的溫度、濕度及氣體含量改變，對(duì)胚胎培養(yǎng)環(huán)境產(chǎn)生影響；同時(shí)，胚胎評(píng)估人員存在主觀因素等原因，使傳統(tǒng)評(píng)價(jià)體系弊端逐漸暴露。時(shí)差成像是一種瞬間曝光連續(xù)拍攝的成像技術(shù)，具有極高的分辨率,同時(shí)與胚胎培養(yǎng)裝置進(jìn)行整合，與計(jì)算機(jī)分析軟件相連構(gòu)成全新的胚胎評(píng)估體系，確保觀察過(guò)程中胚胎發(fā)育環(huán)境的穩(wěn)定性[4]。然而，該技術(shù)的安全性、分析體系的有效性，尚存在爭(zhēng)議。因此，我們對(duì)行IVF/卵胞質(zhì)內(nèi)單精子顯微注射(ICSI)的胚胎采用時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)，旨在探討時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)是否為胚胎發(fā)育提供更有利的條件。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2016年1～5月山東中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合生殖與遺傳中心收治的104例不孕患者的臨床資料，共行IVF/ICSI治療104個(gè)周期；均為女方輸卵管因素、男方因素以及其他因素導(dǎo)致不孕，排除因女方內(nèi)膜因素(盆腔子宮內(nèi)膜異位癥、 子宮腺肌癥、 子宮肌瘤等)、反復(fù)流產(chǎn)、反復(fù)胚胎著床失敗等者。其中，采用時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行胚胎培養(yǎng)40例(觀察組)，采用常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行胚胎培養(yǎng)64例(對(duì)照組)。觀察組年齡(32.08±5.21)歲，BMI(23.42±2.72)kg/m2；原發(fā)性不孕13例、繼發(fā)性不孕27例，不孕年限(3.77±1.56)年；人絨毛膜促性腺激素(hCG)日內(nèi)膜厚度(10.57±2.14)mm ，每人取卵(12.50±7.07)枚，共取卵500枚；受精方式：IVF 31例，ICSI 9例。對(duì)照組年齡(32．75±6.22)歲，BMI (23.79±2.31) kg/m2；原發(fā)性不孕24例、繼發(fā)性不孕40例，不孕年限(3.42±1.40)年；hCG日內(nèi)膜厚度(11.39±2.05)mm，每人卵數(shù)(13.51±9.67)枚，，共取卵865枚；受精方式：IVF 49例，ICSI 15例。兩組臨床資料具有可比性(P均>0.05)。

1.2 胚胎培養(yǎng)方法 觀察組采用 ESCO Miri TL(ESCO，新加坡)胚胎實(shí)時(shí)監(jiān)控系統(tǒng)，此系統(tǒng)在傳統(tǒng)培養(yǎng)箱內(nèi)配置胚胎顯微成像系統(tǒng)，通過(guò)數(shù)據(jù)線與培養(yǎng)箱外的控制臺(tái)主機(jī)相連接，拍照頻率為 10 min/次。觀察組受精后立即將胚胎置于專用 14 孔集合培養(yǎng)皿中，每孔放置1 個(gè)胚胎，具有明確的位置標(biāo)記；使用全程培養(yǎng)液 (CSC,Irvine,美國(guó)) 培養(yǎng)胚胎，培養(yǎng)液上覆以礦物油。然后將培養(yǎng)皿放入ESCO Miri TL實(shí)時(shí)監(jiān)控培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)環(huán)境參數(shù)為5% CO2、5% O2、37 ℃，直至胚胎發(fā)育至第3天。對(duì)照組受精后將胚胎放入普通培養(yǎng)皿中，置于Labotect C200(Labotect，德國(guó))培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)液、培養(yǎng)環(huán)境、培養(yǎng)時(shí)間同觀察組。

1.3 胚胎的評(píng)價(jià)、篩選及妊娠判定 兩組分別于授精后16～18 h、67～69 h觀察受精及卵裂情況，計(jì)算受精率及卵裂率。觀察組利用ESCO實(shí)時(shí)監(jiān)控培養(yǎng)箱連接的外部電腦中的ESCO Miri TL Viewer軟件，觀察并獲得胚胎形態(tài)發(fā)生改變的時(shí)間資料[5,6]，結(jié)合培養(yǎng)第3天伊斯坦布爾共識(shí)[2]形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)選擇胚胎移植。對(duì)照組培養(yǎng)第3天根據(jù)伊斯坦布爾共識(shí)[2]形態(tài)學(xué)標(biāo)準(zhǔn)選擇胚胎移植。每例患者選擇可用胚胎2枚進(jìn)行移植，移植后第14天測(cè)血hCG水平，移植后第4～6周經(jīng)陰道B超下出現(xiàn)孕囊和胎心為臨床妊娠。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用 SPSS17.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以率表示，組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

觀察組受精率82.37%、卵裂率92.80%、可用胚胎率50.21%、臨床妊娠率62.50%，對(duì)照組受精率75.85%、卵裂率94.40%、可用胚胎率45.11%、臨床妊娠率50.00%。兩組受精率、卵裂率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均>0.05)，可用胚胎率、臨床妊娠率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P均<0.05)。

3 討論

隨著輔助生殖技術(shù)的不斷發(fā)展，如何更準(zhǔn)確地挑選出具有發(fā)育潛能的胚胎進(jìn)行移植，并獲得良好的臨床妊娠率一直是生殖領(lǐng)域探討的熱門話題。目前，大多選用傳統(tǒng)的形態(tài)學(xué)評(píng)價(jià)體系進(jìn)行胚胎的篩選[7]，在特定的時(shí)間點(diǎn)觀察一系列的靜態(tài)指標(biāo)，包括卵母細(xì)胞的形態(tài)、成熟度，早期原核數(shù)目、大小、對(duì)稱程度，胚胎期的細(xì)胞數(shù)目、卵裂球的對(duì)稱程度、碎片率等以及囊胚期的囊腔分期、內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層細(xì)胞的多少等。

時(shí)差成像系統(tǒng)是新興的應(yīng)用于臨床的胚胎篩選評(píng)價(jià)方法，其實(shí)時(shí)監(jiān)控的特點(diǎn)可以對(duì)胚胎進(jìn)行動(dòng)態(tài)觀察，并可利用形態(tài)動(dòng)力學(xué)參數(shù)將胚胎發(fā)育過(guò)程進(jìn)行量化，使其更加客觀化[8]；拍攝監(jiān)控系統(tǒng)與培養(yǎng)箱相結(jié)合，有效減少開箱頻率，保證胚胎環(huán)境的穩(wěn)定性[9]。因此，運(yùn)用時(shí)差成像技術(shù)準(zhǔn)確預(yù)測(cè)并篩選出具有發(fā)育潛能的胚胎[10～13]已經(jīng)成為胚胎學(xué)家們的研究重點(diǎn)。Meseguer等[14]回顧性分析了時(shí)差成像與常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行的7 305個(gè)臨床周期, 時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)通過(guò)Meseguer的等級(jí)評(píng)分系統(tǒng)結(jié)合傳統(tǒng)形態(tài)評(píng)估進(jìn)行胚胎選擇并移植, 而常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng)通過(guò)形態(tài)學(xué)方法選擇胚胎并進(jìn)行移植。結(jié)果顯示，時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)患者的臨床妊娠率較傳統(tǒng)培養(yǎng)系統(tǒng)顯著提高。Rubio等[3]采用隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)研究分析比較了時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)和常規(guī)培養(yǎng)系統(tǒng),時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)中的胚胎評(píng)估通過(guò)時(shí)間參數(shù)與卵裂模式相結(jié)合的方式獲得;該研究結(jié)果表明, 時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)患者的繼續(xù)妊娠率明顯增加,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。有研究[14]認(rèn)為，時(shí)差成像培養(yǎng)相對(duì)普通培養(yǎng)可以避免培養(yǎng)箱頻繁的開關(guān)，保持培養(yǎng)箱內(nèi)環(huán)境尤其是pH和溫度的穩(wěn)定，有利于獲得高質(zhì)量的胚胎。Siristatidis等[15]研究顯示，采用時(shí)差成像培養(yǎng)技術(shù)獲得了比常規(guī)培養(yǎng)更高的臨床妊娠率、繼續(xù)妊娠率和出生率。本研究結(jié)果顯示，兩組受精率、卵裂率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而觀察組的可用胚胎率和臨床妊娠率均高于對(duì)照組，與前期文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相同[3，14,15]。我們分析時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)能顯著提高可用胚胎率和臨床妊娠率的原因包括:①時(shí)差成像培養(yǎng)系統(tǒng)采用小箱體單獨(dú)培養(yǎng)模式，使得培養(yǎng)環(huán)境更加穩(wěn)定；②減少開箱觀察的頻率，減少室溫下暴露時(shí)間，使胚胎避免外界刺激；③動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，獲得的信息更加全面；④選擇胚胎的時(shí)間參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合形態(tài)學(xué)指標(biāo)共同篩選胚胎[15，16]。

綜上所述，時(shí)差成像培養(yǎng)可以獲得比常規(guī)培養(yǎng)更多的可用胚胎和更高的臨床妊娠率。然而，我們的研究樣本量較少，未來(lái)我們將進(jìn)一步擴(kuò)大樣本, 增加囊胚形成率、出生率等指標(biāo), 以確保該方法的有效性和安全性，更好的提高臨床妊娠率， 縮短患者獲得妊娠的時(shí)間。

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國(guó)家自然基金資助項(xiàng)目(81273790，81473720)；山東省醫(yī)藥衛(wèi)生科技發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(2015WSB23005)。

連方(E-mail: f_lian@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.10.026

R715.5

B

1002-266X(2017)10-0074-03

2016-10-22)