清熱抗毒口服液穩(wěn)定性研究*

河北省石家莊市第五醫(yī)院

楊 靜 馮 莉△ 張 娟 馮彩霞 杜 婧△△(石家莊 050021)

清熱抗毒口服液穩(wěn)定性研究*

河北省石家莊市第五醫(yī)院

楊 靜 馮 莉△張 娟 馮彩霞 杜 婧△△(石家莊 050021)

目的：研究考察清熱抗毒口服液的穩(wěn)定性。方法：依據(jù)《藥物制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則》，觀察清熱抗毒口服液的性狀、pH值、相對(duì)密度、鑒別、鹽酸小檗堿含量的變化。結(jié)果：在影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)中，清熱抗毒口服液的性狀、pH、相對(duì)密度、薄層鑒別均未發(fā)生明顯變化。制劑中的藥效成分鹽酸小檗堿的含量隨存放時(shí)間的延長(zhǎng)有所降低。結(jié)論：高溫和強(qiáng)光對(duì)本制劑的穩(wěn)定性有一定的影響。故采用深棕色玻璃瓶存放口服液，置于陰涼干燥處保存。本品在室溫下是穩(wěn)定的。

清熱抗毒口服液；穩(wěn)定性；影響因素；加速試驗(yàn)；長(zhǎng)期試驗(yàn)；高溫；強(qiáng)光；深棕色

清熱抗毒口服液是石家莊市第五醫(yī)院名中醫(yī)精心研制的中藥復(fù)方制劑，處方由白茅根、鉤藤、生石膏、板藍(lán)根、藿香、黃連等十味中藥組成(本制劑處方已申請(qǐng)專(zhuān)利)。本制劑清肝經(jīng)熱，祛濕解毒、平肝止痛，可用于治療皰疹、抽搐、發(fā)熱等急性感染癥狀。臨床上用于手足口病的治療。制劑的穩(wěn)定性不僅是評(píng)價(jià)制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，而且是臨床用藥安全的重要保證。因此，制劑穩(wěn)定性的考察就顯得尤為重要。筆者根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版《藥物制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則》，[1]以清熱抗毒口服液的性狀、pH、相對(duì)密度、鑒別、有效成分含量為指標(biāo)進(jìn)行考察，分別進(jìn)行影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)，通過(guò)觀察各指標(biāo)的變化評(píng)價(jià)制劑的穩(wěn)定性，[2]以期為該制劑的生產(chǎn)、質(zhì)量控制、儲(chǔ)藏條件等后續(xù)研究提供科學(xué)的參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Agilent1260)；微電腦光照箱( 型號(hào):SPX-2501-G，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司)；十萬(wàn)分之一天平(BS124Ssartorius)；電熱恒溫水浴鍋(HHS型，上海東星建材試驗(yàn)設(shè)備有限公司)；超聲清洗儀(KQ-100E型，昆山市超聲儀器有限公司)；隔水式電熱恒溫培養(yǎng)箱。

1.2 試藥 對(duì)照品：白茅根對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所，121145-201003)；鉤藤對(duì)照藥材(中國(guó)藥品生物制品檢定所，121190-201204)；黃連對(duì)照藥材(石家莊市第五醫(yī)院制劑室提供)；鹽酸小檗堿(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110713-201212)。清熱抗毒口服液(石家莊市第五醫(yī)院制劑室提供，規(guī)格：10mL/支，批號(hào)為140306，140409，140508)。

所用試劑均為分析純；乙腈(德國(guó)CNW生產(chǎn)公司)為色譜純；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 測(cè)定方法

2.1.1 性狀、pH、相對(duì)密度、鑒別:制劑的性狀測(cè)定采取在自然光條件下白色背景中通過(guò)肉眼進(jìn)行直接觀察；口服液的pH值使用酸度計(jì)測(cè)量；口服液的相對(duì)密度采用比重瓶法測(cè)定；采用薄層色譜法對(duì)口服液中白茅根、鉤藤、黃連進(jìn)行鑒別。

2.1.2 含量測(cè)定: 本制劑中鹽酸小檗堿的含量采用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定的色譜條件：色譜柱為島津C18(4.6×150mm，5μm)；以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀溶液(25∶75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為265nm；流速為1.0mL/min；柱溫為30℃；進(jìn)樣體積為10μL。按鹽酸小檗堿峰計(jì)算，理論塔板數(shù)應(yīng)不低于3 000。在此實(shí)驗(yàn)條件下分別進(jìn)行了線(xiàn)性關(guān)系考察、精密度試驗(yàn)、穩(wěn)定性試驗(yàn)、重復(fù)性試驗(yàn)、加樣回收率試驗(yàn)等方法學(xué)研究。

在本制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立中，對(duì)此方法進(jìn)行了詳細(xì)的描述，在此不再贅述。

2.2 影響因素試驗(yàn)

2.2.1 方法:按照《藥物制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則》中對(duì)口服液穩(wěn)定性的考察要求，重點(diǎn)考察的項(xiàng)目包括性狀、pH、相對(duì)密度、鑒別以及含量，分別進(jìn)行高溫試驗(yàn)與強(qiáng)光試驗(yàn)。

2.2.1.1 高溫試驗(yàn):取供試品20支除去包裝后開(kāi)口置于潔凈容器中，在(60±2)℃恒溫箱中放置10d，分別于第0、5、10d各取5支進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2.1.2 強(qiáng)光試驗(yàn)：取供試品20支除去包裝后開(kāi)口置于光照箱內(nèi)，在光照強(qiáng)度4 500Lx條件下放置10d，分別于第0、5、10d各取5支進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2.2 結(jié)果：在高溫和強(qiáng)光的影響下，清熱抗毒口服液的性狀、pH、相對(duì)密度、鑒別未發(fā)生明顯變化，而鹽酸小檗堿的含量有所降低。

表1 高溫實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表2 強(qiáng)光實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.3 加速試驗(yàn)

2.3.1 方法:取清熱抗毒口服液3批樣品，在40℃±2℃、相對(duì)溫度75%±5%條件下放置6個(gè)月，并對(duì)真實(shí)溫度與濕度進(jìn)行監(jiān)測(cè)。在試驗(yàn)期間第1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月末分別取樣1次，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目進(jìn)行檢測(cè)。

2.3.2 結(jié)果：在該試驗(yàn)條件下，3批口服液的性狀、pH、相對(duì)密度、鑒別均未發(fā)生明顯變化。制劑中有效成分的含量隨存放時(shí)間的延長(zhǎng)有所降低。詳見(jiàn)表3。

表3 加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果

續(xù)表3 加速實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.4 長(zhǎng)期試驗(yàn)

2.4.1 試驗(yàn)方法：清熱抗毒口服液3批樣品，在30℃±2℃、相對(duì)濕度65%±5%的條件下放置12個(gè)月，每3個(gè)月取樣1次，分別于0、3、6、9、12個(gè)月取樣，按穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目并檢測(cè)。

2.4.2 試驗(yàn)結(jié)果：在30℃±2℃、相對(duì)濕度65%±5%的條件下放置12個(gè)月，3批口服液的性狀、pH、相對(duì)密度、鑒別均未發(fā)生明顯變化。制劑中有效成分的含量隨存放時(shí)間的延長(zhǎng)有所降低。詳見(jiàn)表4。

表4 長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

清熱解毒類(lèi)抗病毒復(fù)方中藥大多有抗病毒、抗炎雙重作用。[3]根據(jù)中醫(yī)辨證施治的原則，在不同類(lèi)型的抗病毒治療中，發(fā)揮著自己獨(dú)特的作用。清熱抗毒口服液中白茅根具有利尿與抗菌作用以及增強(qiáng)肌體的非特異性免疫作用。[4]黃連味苦性寒，具有清熱燥濕，瀉火解毒之功，同時(shí)具有抗炎、抗病毒、解熱等多重功效，黃連中的鹽酸小檗堿為含小檗堿中藥中主要抑菌成分，其抗菌譜廣，對(duì)革蘭氏陽(yáng)性、陰性菌均有抑制作用。[5]升麻有發(fā)表透疹，清熱解毒，升陽(yáng)舉陷的功效。本制劑內(nèi)外兼治，從根本上針對(duì)手足口病的各證加以治療，達(dá)到標(biāo)本兼治的目的。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)手足口病患兒體內(nèi)的Treg/Th17較正常值明顯降低，存在Treg/Th17平衡紊亂。而Treg/Th17平衡在肌體免疫中發(fā)揮著不可忽視的作用。這可能是手足口病的發(fā)病機(jī)制之一。中藥對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用逐漸為人們所認(rèn)可。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)[6]清熱抗毒口服液可通過(guò)抑制Th17細(xì)胞及其相關(guān)的細(xì)胞因子的產(chǎn)生，調(diào)整患兒體內(nèi)Treg/Th17平衡紊亂，從而抑制體內(nèi)炎癥的進(jìn)一步擴(kuò)展，這可能是本制劑治療手足口病的作用機(jī)制之一。

清熱抗毒口服液采用加權(quán)評(píng)分法優(yōu)化水提制備工藝，祛除傳統(tǒng)煎劑的弊端，選取最佳制備工藝，真正發(fā)揮藥物的最大作用。中藥制劑劑型選擇遵循首選口服，后選注射的治療原則。[7]本制劑采取口服液劑型，是由于患者多為嬰幼兒，口服液較煎劑用量小，服用方便，以便增強(qiáng)患兒用藥的依從性。清熱抗毒口服液為棕褐色的液體，通過(guò)白茅根、鉤藤、黃連的薄層鑒別和鹽酸小檗堿的含量測(cè)定以控制制劑的質(zhì)量。穩(wěn)定性試驗(yàn)的目的是考察藥物制劑在溫度、光線(xiàn)等因素的影響下隨時(shí)間變化的規(guī)律，通過(guò)加速實(shí)驗(yàn)及長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)的觀察，對(duì)制劑穩(wěn)定性進(jìn)行進(jìn)一步考察，為制劑的生產(chǎn)、包裝、貯藏條件的合理性提供參考依據(jù)，并通過(guò)試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析進(jìn)一步確定藥品的有效期。[8-9]在影響因素試驗(yàn)中本應(yīng)考察高溫、強(qiáng)光和高濕因素對(duì)制劑穩(wěn)定性的影響，由于本制劑為口服液劑型，含水量較大，故高濕不作為考察因素。

在本課題中，分別選取不同廠(chǎng)家的藥材，采用相同的工藝對(duì)清熱抗毒口服液進(jìn)行提取濃縮，并對(duì)制劑中鹽酸小檗堿的含量進(jìn)行測(cè)定。以此來(lái)判斷不同廠(chǎng)家的藥材對(duì)制劑中鹽酸小檗堿含量的影響。同時(shí)也為本課題中清熱抗毒口服液的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。測(cè)定結(jié)果表明，不同廠(chǎng)家藥材提取的制劑中鹽酸小檗堿的含量存在不同程度的差異。其中選自樂(lè)仁堂藥材廠(chǎng)家提取的制劑中鹽酸小檗堿的含量最高，表明質(zhì)量較好；選自其它廠(chǎng)家的藥材提取的制劑中鹽酸小檗堿含量均低于樂(lè)仁堂廠(chǎng)家，故本實(shí)驗(yàn)采用選自樂(lè)仁堂藥材廠(chǎng)家的藥材作為實(shí)驗(yàn)原料。通過(guò)該制劑3批樣品含量測(cè)定的結(jié)果以及穩(wěn)定性試驗(yàn)研究，暫定制劑中鹽酸小檗堿的含量不低于2 mg/10 mL。

通過(guò)穩(wěn)定性試驗(yàn)的各項(xiàng)研究，結(jié)果表明清熱抗毒口服液的性狀、pH值(4.4～4.6)、相對(duì)密度(1.06～1.08)未發(fā)生明顯變化，說(shuō)明在高溫、強(qiáng)光條件下，口服液的性狀、pH、相對(duì)密度、薄層鑒別的變化不明顯，比較穩(wěn)定。但影響因素試驗(yàn)中鹽酸小檗堿的含量呈下降趨勢(shì)，并且下降趨勢(shì)較明顯，說(shuō)明鹽酸小檗堿在高溫[10]和強(qiáng)光條件下容易分解。在加速實(shí)驗(yàn)中，第1個(gè)月口服液中鹽酸小檗堿的含量下降明顯，而后仍呈下降趨勢(shì)，但是下降較緩慢。說(shuō)明在一定實(shí)驗(yàn)溫度下，有效成分含量會(huì)隨存放時(shí)間的延長(zhǎng)而降低，而且溫度越高有效成分含量下降得越快。說(shuō)明高溫和強(qiáng)光是影響本制劑穩(wěn)定性的主要因素。因此，在工藝生產(chǎn)過(guò)程中應(yīng)注意對(duì)溫度和時(shí)間的控制，以及儲(chǔ)存運(yùn)輸中應(yīng)注意避高溫、避強(qiáng)光保存。結(jié)合實(shí)驗(yàn)結(jié)果，擬采用深棕色玻璃瓶存放口服液，存放于陰涼干燥處。本品在室溫下是穩(wěn)定的。故暫定清熱抗毒口服液的有效期為12個(gè)月。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì)．中華人民共和國(guó)藥典(二部) [S]．北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010.附錄

[2]劉澤干,黃良永,朱海濤,等.金茵清熱口服液穩(wěn)定性考察[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2014,33(11) : 1 502-1 505

[3]王英燕,王海.抗病毒中藥的研究進(jìn)展[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2006,34(1):25-26

[4]全紅,周濤,方東海,等.白茅根的研究概況[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),1999(1):60-61

[5]金建玲,欒永娜,華國(guó)強(qiáng),等.含小檗堿中藥的抑菌活性與小檗堿含量的關(guān)系[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào), 2005, 33(5):19-21

[6]閆納新,許尊貴,楊莉,等.清熱抗毒煎劑對(duì)普通型手足口病患兒外周血Treg、Th17平衡的調(diào)節(jié)作用[J].河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2015,30(3):40-43

[7]史秀玲,郭士叢.中藥及其制劑的安全、合理使用芻議[J].河北中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2011,26(1):38-40

[8]楊穎.改善藥物穩(wěn)定性的方法綜述[J].中國(guó)藥師,2007,10(2):138

[9]張星一.化學(xué)藥物穩(wěn)定性研究的設(shè)計(jì)和評(píng)價(jià)[J].中國(guó)新藥雜志,2010,19(14):1 209

[10]彭宗玢,朱天明.溫度對(duì)鹽酸小檗堿質(zhì)量的影響[J].時(shí)針國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2001,13(10):583

(2016-11-08 收稿)

*河北省石家莊市科技局科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目：No.151461523

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1007-5615(2017)02-0040-04

△河北省石家莊市第八醫(yī)院