兩種品牌試劑檢測(cè)血清AFU的臨床價(jià)值比較

吳惠芳+鄒繼華+賈江花+黎鵬

[摘要] 目的 探討利德曼試劑和美康試劑檢測(cè)血清α-L巖藻糖苷酶（α-L-fucosidase，AFU）的臨床價(jià)值差異。 方法 收集2012年1月～2015年12月在義烏市中醫(yī)醫(yī)院就診的患者121例，包括待產(chǎn)孕婦52例，肝癌患者29例，肝硬化患者17例，肝炎患者23例，另選取102例健康體檢者作為正常對(duì)照組。同時(shí)采用利德曼試劑和美康試劑檢測(cè)血清AFU，比較兩種試劑在不同情況下的檢測(cè)結(jié)果差異和相關(guān)性，并利用ROC曲線分析血清AFU診斷待產(chǎn)孕婦和肝癌的效率。 結(jié)果 AFU的總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01），不同疾病組的AFU水平均高于健康體檢組；AFU的陽(yáng)性率以待產(chǎn)孕婦組最高，其次為肝癌組。Spearman相關(guān)分析顯示，利德曼試劑和美康試劑在不同組別中的相關(guān)性良好（r=0.89、0.98、0.98、0.97、0.95，P均<0.01）；配對(duì)樣本t檢驗(yàn)顯示，兩品牌試劑的AFU檢測(cè)結(jié)果在各組中的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均<0.01），利德曼試劑的結(jié)果普遍高于美康試劑；卡方分析顯示，利德曼試劑的健康體檢組AFU陽(yáng)性率顯著高于美康試劑（χ2=40.30，P<0.01），而各疾病組的AFU陽(yáng)性率差異均不大（P均>0.05）。美康試劑從健康體檢者中診斷待產(chǎn)孕婦和肝癌的ROC曲線下面積（AUC）顯著大于利德曼試劑（Z=7.02，P<0.01），敏感性和特異度也更好。 結(jié)論 相較于利德曼試劑，美康試劑具備更好的臨床應(yīng)用價(jià)值。

[關(guān)鍵詞] α-L巖藻糖苷酶；肝癌；妊娠；診斷

[中圖分類(lèi)號(hào)] R735.7 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673-9701（2017）07-0115-03

[Abstract] Objective To investigate the differences of the clinical value of serum L-fucosidase（AFU） by Lidemann reagent and Meikang reagent. Methods 121 cases who were admitted to Yiwu Hospital of TCM from January 2012 to December 2015 were collected， including 52 cases of pregnant women， 29 patients with hepatocellular carcinoma， 17 patients with liver cirrhosis， and 23 patients with hepatitis. Another 102 healthy subjects were selected as the normal control group. At the same time， Lidemann reagent and Meikang reagent were used to detect serum AFU. The differences and correlations between the results of the two reagents under different conditions were compared， and the ROC curve was used to analyze the efficiency of serum AFU in the diagnosis of pregnant women and liver cancer. Results The overall difference of AFU was statistically significant（P<0.01）. The levels of AFU in different disease groups were higher than those in healthy subjects. The positive rate of AFU was the highest in pregnant women group， followed by liver cancer group. Spearman correlation analysis showed that there was a good correlation between Leadman reagent and Meikang reagent in different groups（r=0.89， 0.98， 0.98， 0.97， 0.95， P<0.01 for all）. Paired samples t-test showed that the differences of the AFU test results of the two brands of reagents in each group were statistically significant （P<0.01 for all）. Leadman reagent results were generally higher than Meikang reagent； the chi-square analysis showed that the positive rate of AFU in the healthy control group of Leadman reagent was significantly higher than that of the Meikang reagent（χ2=40.30， P<0.01）. The positive rate of AFU between disease groups was not significantly different （P>0.05 for all）. The area under the ROC curve（AUC） in the diagnosis of pregnant women and liver cancer among the healthy controls by Meikang reagent was significantly higher than that of the Leadman reagent（Z=7.02， P<0.01）. The sensitivity and specificity were also better. Conclusion Compared with the Leadman reagent， Meikang reagent has a better clinical application value.

[Key words] α-L fucosidase； Liver cancer； Pregnancy； Diagnosis

肝癌作為世界范圍內(nèi)死亡率排名前列的腫瘤[1]，嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康。肝癌的診斷，特別是早期診斷對(duì)其有效治療、挽救患者生命至關(guān)重要。作為最經(jīng)典的肝癌標(biāo)志物，AFP的敏感性?xún)H40%～65%不等，特異性?xún)H76%～96%不等[2-3]，無(wú)法滿(mǎn)足臨床需求。自上世紀(jì)80年代法國(guó)學(xué)者Deugnier報(bào)道α-L巖藻糖苷酶（α-L-Fucosidase，AFU）可以用于肝癌的診斷以來(lái)[4]，有關(guān)AFU在肝癌診斷中的價(jià)值廣受關(guān)注。但由于使用的方法和試劑成分缺乏規(guī)范化，衛(wèi)生部臨檢中心也未將該項(xiàng)目納入到室間質(zhì)評(píng)計(jì)劃（EQA），各家研究結(jié)論并不完全一致[5，6]。本醫(yī)院均使用寧波美康公司生化試劑，寧波美康通過(guò)試劑配方的優(yōu)化，新開(kāi)發(fā)出基于連續(xù)速率法的AFU試劑（以下簡(jiǎn)稱(chēng)美康試劑），利用該試劑檢測(cè)不同人群的AFU表達(dá)水平，并與市場(chǎng)上在售的利德曼試劑作比較。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

所有血清標(biāo)本121例均來(lái)源于本醫(yī)院2012年1月～2015年12月的門(mén)診患者，根據(jù)疾病種類(lèi)分為4組，包括待產(chǎn)孕婦52例，肝癌患者29例，肝硬化患者17例，肝炎患者23例。另選取102例健康體檢者作為正常對(duì)照組。以上各組的年齡和性別比例均差異不大，具有可比性。

1.2 血清學(xué)指標(biāo)檢測(cè)

所有血清標(biāo)本均采用利德曼商品試劑盒和美康公司新研發(fā)的試劑盒同時(shí)檢測(cè)AFU濃度，儀器采用AU640全自動(dòng)生化分析儀。利德曼商品試劑盒的檢測(cè)原理為：在AFU作用下，復(fù)合底物2-氯-4-硝基苯α-L-巖藻糖苷分解為巖藻糖和2-氯-4-硝基苯，在405 nm檢測(cè)吸光度的變化率。美康試劑檢測(cè)原理為：在AFU作用下，NG-2-氯-對(duì)硝基苯α-L-巖藻糖苷分解為巖藻糖和NG-2-氯-對(duì)硝基苯，對(duì)硝基苯酚在堿性溶液中呈黃色，可在405 nm檢測(cè)吸光度的變化率[7-9]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組和兩組的均數(shù)比較采用方差分析和配對(duì)樣本t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用例數(shù)和百分比[n（%）]表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。利德曼試劑和美康試劑的檢測(cè)結(jié)果相關(guān)性采用Spearman相關(guān)分析。繪制受試者工作特征（ROC）曲線，用ROC曲線下面積（AUC）評(píng)價(jià)血清AFU對(duì)待產(chǎn)孕婦和肝癌的診斷準(zhǔn)確性，AUC的比較采用正態(tài)性Z檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 利德曼試劑和美康試劑檢測(cè)結(jié)果比較

2.1.1 利德曼試劑檢測(cè)各組的血清AFU結(jié)果比較 對(duì)利德曼試劑，AFU的總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=21.54，P<0.01），不同疾病組的AFU水平均高于健康體檢組，但健康體檢組與肝硬化組、待產(chǎn)孕婦組與肝癌組、待產(chǎn)孕婦組與肝炎組、肝癌組與肝硬化組、肝癌組與肝炎組、肝硬化組與肝炎組之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05）；AFU的陽(yáng)性率以待產(chǎn)孕婦組最高，其次為肝癌組、肝炎組、健康體檢組和肝硬化組。見(jiàn)表1。

2.1.2 美康試劑檢測(cè)各組的血清AFU結(jié)果比較 對(duì)美康試劑，AFU的總體差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=41.64，P<0.01），不同疾病組的AFU水平均高于健康體檢組，但不同肝病組間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均>0.05）；AFU的陽(yáng)性率以待產(chǎn)孕婦組最高，其次為肝癌組、肝炎組、肝硬化組和健康體檢組。

2.1.3 兩種品牌試劑檢測(cè)結(jié)果比較 經(jīng)Spearman相關(guān)分析，利德曼試劑和美康試劑在不同組別中的相關(guān)性良好（r=0.89、0.98、0.98、0.97、0.95，P均<0.01）；配對(duì)樣本t檢驗(yàn)顯示，兩品牌試劑的AFU檢測(cè)結(jié)果在各組中的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=26.95、15.75、4.40、4.80、4.68，P均<0.01），利德曼試劑的結(jié)果普遍高于美康試劑；卡方分析顯示，利德曼試劑的健康體檢組AFU陽(yáng)性率顯著高于美康試劑（χ2=40.30，P<0.01），而各疾病組的AFU陽(yáng)性率差異均不大（χ2=0.70、0.083、0.13、1.42，P均>0.05）。

2.2 利德曼試劑和美康試劑診斷待產(chǎn)孕婦和肝癌的ROC曲線

因2.1中顯示，以待產(chǎn)孕婦組和肝癌組的AFU水平和陽(yáng)性率最高，故以待產(chǎn)孕婦和肝癌患者為疾病組，利用ROC曲線分析AFU從健康體檢者中診斷出待產(chǎn)孕婦和肝癌的效率。結(jié)果提示，美康試劑的AUC顯著大于利德曼試劑（Z=7.02，P<0.01），敏感性和特異度也更好。見(jiàn)封三圖6、表2。

3 討論

α-L巖藻糖苷酶（α-L-Fucosidase，AFU）是一種與糖代謝有關(guān)的溶酶體酸性水解酶，廣泛存在于人體肝、腎、胰、胎盤(pán)組織，其基本生理功能是催化含巖藻糖基的各種糖脂、粘多糖、糖蛋白和糖苷等大分子物質(zhì)的分解代謝。在機(jī)體正常狀態(tài)下，組織糖苷酶的釋放少，從而保證血清糖苷酶維持在一定水平。多項(xiàng)研究證實(shí)，當(dāng)罹患巖藻糖苷酶缺陷性疾病、肝臟疾?。ㄌ貏e是肝癌）、婦科腫瘤、糖尿病、腎臟疾病時(shí)血清水平不同程度升高[10-13]，同時(shí)妊娠期婦女因胎兒生長(zhǎng)發(fā)育的需要也會(huì)增高[14，15]。隨著對(duì)AFU研究的不斷深入，檢測(cè)方法也不斷更新、改進(jìn)，由早期的放免法、化學(xué)顯色法，發(fā)展到現(xiàn)在可以適用于全自動(dòng)生化分析儀批量檢測(cè)的連續(xù)檢測(cè)法[16]。

兩種試劑的檢測(cè)結(jié)果均表明，疾病組的血清AFU水平均高于健康體檢組，這與既往的研究結(jié)論基本一致，不同程度肝臟疾病患者和待產(chǎn)孕婦的血清AFU水平不同程度上調(diào)[17-19]。但利德曼試劑和美康試劑的檢測(cè)效能存在差異，其中對(duì)利德曼試劑，健康體檢組與肝硬化組、待產(chǎn)孕婦組與肝癌組、待產(chǎn)孕婦組與肝炎組、肝癌組與肝硬化組、肝癌組與肝硬化組、肝硬化組與肝炎組之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而對(duì)于美康試劑，只有不同肝病組間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，這與既往付麗娟等[20]的結(jié)論一致，說(shuō)明美康試劑具有更好的鑒別診斷效能。兩種試劑在各組別中的陽(yáng)性率稍有不同，其中利德曼試劑的健康體檢組陽(yáng)線率高于肝硬化組，而美康試劑的陽(yáng)性率高低與病情基本一致，后者具有更好的診斷價(jià)值。

進(jìn)一步的Spearman相關(guān)分析顯示，雖然利德曼試劑和美康試劑在不同組別中的相關(guān)性良好，但配對(duì)樣本t檢驗(yàn)顯示兩品牌試劑的AFU檢測(cè)結(jié)果在各組中的差異顯著，利德曼試劑的結(jié)果普遍高于美康試劑，其中以健康體檢組的差異最大，而且利德曼試劑的健康體檢組AFU陽(yáng)性率顯著高于美康試劑，這說(shuō)明利德曼試劑對(duì)于健康體檢者的檢測(cè)存在明顯缺陷，與臨床實(shí)際不相符。為明確利德曼試劑和美康試劑從健康體檢者中鑒別診斷出待產(chǎn)孕婦和肝癌的效率，我們繪制了ROC曲線，結(jié)果提示美康試劑的AUC顯著大于利德曼試劑，且敏感性和特異度也更好。

但必須指出的是，兩種品牌試劑對(duì)不同肝病的鑒別診斷效率均有限，肝癌患者的血清AFU陽(yáng)性率雖較高，但其血清水平并不顯著高于慢性肝炎和肝硬化患者，這提示血清AFU檢測(cè)在肝癌診斷（特別是從不同肝病中鑒別診斷出肝癌）領(lǐng)域可能價(jià)值不大。當(dāng)然，由于本研究樣本量較小，確切的結(jié)論仍需大樣本、多中心的實(shí)驗(yàn)予以確認(rèn)。

綜上所述，相較于利德曼試劑，美康試劑由于改進(jìn)了試劑配方，可以更好的應(yīng)用于臨床，值得推廣使用。

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（收稿日期：2016-09-19）