柴胡解毒湯聯(lián)合阿德福韋酯治療慢性乙型肝炎患者外周血淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的變化

肖玉柱

柴胡解毒湯聯(lián)合阿德福韋酯治療慢性乙型肝炎患者外周血淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的變化

肖玉柱

目的 分析柴胡解毒湯聯(lián)合阿德福韋酯片治療慢性乙型肝炎（CHB）患者體內(nèi)病毒水平與外周血淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子的變化的關(guān)系，為臨床治療CHB患者提供新的思路。方法2013年12月至2015年3月間我院收治的CHB患者60例，被分為A組、B組和C組。給予A組服用柴胡解毒湯治療，給予B組服用阿德福韋酯片，C組在B組基礎(chǔ)上，服用柴胡解毒湯治療。3組均觀察12 m。采用ELISA法檢測血清HBV標(biāo)記物和血清IL-2水平，采用熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA水平，使用貝克曼庫爾特流式細(xì)胞儀檢測T細(xì)胞亞群和自然殺傷細(xì)胞百分比。結(jié)果在治療12 m末，C組患者HBV DNA陰轉(zhuǎn)率、ALT復(fù)常率和HBeAg陰轉(zhuǎn)率分別為85.00%、80.00%和80.00%，均顯著高于A組（分別為50.00%、65.00%和45.00%）或B組（分別為65.00%、55.00%和50.00%，P＜0.05）；C組患者外周血CD3+T細(xì)胞、CD4+T細(xì)胞和CD4+/CD8+細(xì)胞比值分別為（65.2±9.6）%、（28.4±7.2）%和（1.1±0.3），與A組【分別為（57.5±8.7）%、（45.7±5.4）%和（1.8±0.6）】或B組【（55.7±6.3）%、（23.2±9.5）%和（0.9±0.1）】比，差異顯著（P＜0.05）；C組患者外周血CD8+T細(xì)胞為（25.3±4.1）%，顯著低于B組[（28.7±4.3)%, P＜0.05]；C組患者外周血NK細(xì)胞與A組或B組比，無顯著性差異（P＞0.05），但血清IL-2水平【（3.6±0.8）ng/mL】顯著高于B組【（2.8±0.5）ng/mL，P＜0.05】；A組CD4+T細(xì)胞增加與HBV DNA載量減少呈顯著正相關(guān)（P＜0.05）；C組CD3+T細(xì)胞增加、CD8+T細(xì)胞減少、NK細(xì)胞增加與HBV DNA載量減少呈正相關(guān)（P＜0.05）。結(jié)論柴胡解毒湯聯(lián)合阿德福韋酯片治療慢性乙型肝炎患者可調(diào)節(jié)外周血淋巴細(xì)胞比例失調(diào)，打破免疫耐受，恢復(fù)肝功能，提高抗病毒效果。

慢性乙型肝炎；柴胡解毒湯；阿德福韋酯；淋巴細(xì)胞亞群

有研究指出，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染的免疫耐受及慢性化與患者自身免疫狀態(tài)密切相關(guān)[1]。免疫功能紊亂及免疫耐受是慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B，CHB）患者治療的難點(diǎn)，采用抗病毒藥物治療CHB患者臨床療效仍有待提高，HBV易突變且不易清除[2]。目前，CHB的發(fā)病及發(fā)生機(jī)制尚未完全闡明，且臨床上仍缺乏特異性的治療方案，主要通過提高患者自身免疫力，增強(qiáng)免疫功能，以提高HBV清除率[3]。阿德福韋酯是現(xiàn)階段在臨床上應(yīng)用較廣的治療CHB藥物，但單獨(dú)使用該藥臨床效果仍不十分理想[4]。有學(xué)者指出，使用中藥聯(lián)合阿德福韋酯對CHB患者進(jìn)行治療，可能提高療效[5]。柴胡解毒湯是傳統(tǒng)的治療實(shí)火型或濕熱型膽道感染的中藥方劑，主要起到通里攻下、疏肝清熱的作用。我們應(yīng)用柴胡解毒湯聯(lián)合阿德福韋酯片治療CHB患者，檢測了外周血淋巴細(xì)胞亞群和細(xì)胞因子水平的變化，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 我院2013年12月至2015年3月間收治的CHB患者60例，男性31例，女性29例，年齡27～46歲，平均年齡（35.8±10.9）歲。平均病程（5.4±2.1）年。符合《慢性乙型肝炎防治指南》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）存在心、腦疾病或糖尿??；（2）處于哺乳或妊娠期婦女；（3）合并自身免疫性肝病、失代償期慢性肝病、遺傳性肝??；（4）合并感染其他肝炎病毒或艾滋病病毒；（5）對核苷類藥物過敏者。將患者分成3組，3組年齡、性別、病程等一般臨床資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。患者簽署知情同意書。

1.2 治療方法 給予A組患者柴胡解毒湯，組方為：柴胡15 g、赤芍30 g、蛇舌草30 g、垂盆草30 g、茵陳30 g、白術(shù)20 g、田基黃20 g、山藥20 g、草河車15 g、土茯苓15 g、仙靈脾15 g、連翹15 g、鳳尾草15 g、黃芩10 g、生茜草10 g、土鱉蟲10 g。每日1劑，水煎，分早晚2次服用，治療12 m；給予 B組阿德福韋酯片（代丁，天津藥物研究院藥業(yè)公司）10 mg口服，1次/d，治療12 m；給予 C組阿德福韋酯和柴胡解毒湯，用法同上，治療12 m。

1.3 觀察指標(biāo) 在治療前和治療結(jié)束后4 w，采集患者空腹靜脈血5 ml，室溫靜置10 min，使用離心機(jī)（Thermo）3000 r/m離心10 min，收集血清，采用ELISA法檢測血清HBV標(biāo)記物（上海生工生物有限公司）和血清IL-2水平（上海生工生物有限公司），所有操作均參照試劑盒說明書進(jìn)行；采用熒光定量PCR法檢測血清HBV DNA水平，使用DA-620型（達(dá)安生物工程公司）檢測儀及其配套試劑。

1.4 外周血T細(xì)胞亞群和自然殺傷細(xì)胞檢測 采集空腹靜脈血5 ml，使用流式細(xì)胞儀（CytoFLEX，貝克曼庫爾特）檢測T細(xì)胞亞群和自然殺傷細(xì)胞百分比。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 19.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，采用直線相關(guān)分析HBV DNA載量與淋巴細(xì)胞或細(xì)胞因子的相關(guān)性，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 療效情況 本組治療結(jié)果顯示，C組患者血清HBV DNA陰轉(zhuǎn)率、ALT復(fù)常率和HBeAg陰轉(zhuǎn)率均顯著高于A組或B組（P＜0.05，表1）。

表1 三組療效（%）比較

2.2 三組患者治療前后T細(xì)胞亞群變化情況的比較 結(jié)果顯示，治療前各組患者T細(xì)胞亞群無明顯差異（P＞0.05）；治療后A組患者CD3+、CD4+T細(xì)胞百分比和CD4+/CD8+比值顯著升高（P＜0.05），CD8+T細(xì)胞顯著降低（P＜0.05）；B組治療前后T細(xì)胞亞群無顯著性變化（P＞0.05）；C組患者CD3+T細(xì)胞和CD4+/CD8+比值顯著升高（P＜0.05），CD8+T細(xì)胞百分比顯著降低（P＜0.05）；治療后，C組患者CD3+T細(xì)胞百分比顯著高于A組和B組（P＜0.05），三組患者CD4+T細(xì)胞存在顯著性差異（P＜0.05），B組患者CD8+T細(xì)胞顯著高于A組和C組（P＜0.05），三組患者CD4+/CD8+比值存在顯著性差異（P＜0.05，表2）。

表2 三組治療前后T細(xì)胞亞群（%，±s）的變化

表2 三組治療前后T細(xì)胞亞群（%，±s）的變化

與A組或B組比，①P＜0.05

例數(shù) CD3+ CD4+ CD8+ CD4+/CD8+A組 治療前 20 51.6±11.9 27.4±6.4 29.4±5.5 0.9±0.3治療后 20 57.5±8.7 45.7±5.4 24.3±5.2 1.8±0.6 B組 治療前 20 53.7±8.8 25.0±8.4 30.4±6.4 0.8±0.1治療后 20 55.7±6.3 23.2±9.5 28.7±4.3 0.9±0.1 C組 治療前 20 52.3±12.3 26.0±6.9 31.2±7.3 0.9±0.2治療后 20 65.2±9.6① 28.4±7.2① 25.3±4.1① 1.1±0.3①

2.3 三組治療前后NK細(xì)胞和IL-2水平比較 結(jié)果顯示，治療前三組患者NK細(xì)胞及IL-2水平無顯著性差異（P＞0.05）；治療后B組和C組患者NK細(xì)胞均顯著升高（P＜0.05），A組和C組患者血清IL-2水平均顯著升高（P＜0.05）；治療后，三組患者NK細(xì)胞差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），但B組患者血清IL-2水平顯著低于A組和C組（表3）。

表3 三組治療前后NK細(xì)胞和IL-2水平（±s）比較

表3 三組治療前后NK細(xì)胞和IL-2水平（±s）比較

與A組或C組比，①P＜0.05

例數(shù) NK細(xì)胞（%） L-2（ng/mL）A組 治療前 20 24.1±6.1 2.8±0.6治療后 20 25.1±5.4 3.4±0.6 B組 治療前 20 23.8±4.7 2.3±0.7治療后 20 26.4±3.8 2.8±0.5①C組 治療前 20 24.7±4.3 2.4±0.5治療后 20 27.4±3.9 3.6±0.8

2.4 HBV DNA載量與淋巴細(xì)胞變化的相關(guān)性分析情況 分析發(fā)現(xiàn)，A組CD4+T細(xì)胞增加與HBV DNA載量減少呈顯著正相關(guān)（P＜0.05）；C組CD3+T細(xì)胞增加、CD8+T細(xì)胞減少、NK細(xì)胞增加與HBV DNA載量減少呈正相關(guān)（P＜0.05）。

3 討論

現(xiàn)階段，臨床治療CHB患者主要采用抗病毒、免疫調(diào)節(jié)、抗纖維化和改善肝功能等療法，其中抗HBV治療是最為關(guān)鍵和主要的治療方法[7-9]。徹底清除患者體內(nèi)HBV是治療的理想狀態(tài)，但諸多因素導(dǎo)致HBV在體內(nèi)極難被徹底清除，其中病毒DNA半衰期較長，且現(xiàn)階段一線抗病毒藥僅能控制病毒的復(fù)制，無法從根本上徹底清除HBV是主要原因之一[10-12]。大量研究指出，CHB患者機(jī)體易出現(xiàn)免疫耐受且病毒DNA與宿主染色體可出現(xiàn)整合等都是無法徹底清除HBV的原因[13，14]。阿德福韋酯片是目前臨床上應(yīng)用較為廣泛的抗HBV藥物。藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，阿德福韋酯主要通過作用于逆轉(zhuǎn)錄酶而起到阻斷和抑制病毒復(fù)制的作用，進(jìn)而在短時(shí)間內(nèi)降低HBV DNA載量，改善肝功能，提高ALT復(fù)常率[15，16]。但也有研究指出，該藥也存在作用時(shí)間短、HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換率低、易耐藥、停藥后病情易反復(fù)甚至惡化等缺點(diǎn)，限制了其廣泛應(yīng)用[14]。

傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為治病得扶助正氣，有助于清陽升發(fā)，驅(qū)邪外出，即提高自身免疫系統(tǒng)功能，激發(fā)免疫應(yīng)答，可有效識別感染HBV肝細(xì)胞，暴露病毒，并將其清除，以實(shí)現(xiàn)治療CHB的目的[17，18]。因此，選用中藥調(diào)節(jié)患者自身免疫系統(tǒng)，恢復(fù)免疫細(xì)胞的識別能力，再聯(lián)合抗病毒藥物，清除HBV是可靠的臨床治療策略[19，20]。我們結(jié)合中醫(yī)理論和選用中藥治療CHB患者，可以彌補(bǔ)單純西藥治療方案的不足。本研究選用柴胡解毒湯的組方為柴胡 、黃芩、赤芍、茵陳、土茯苓、鳳尾草、草河車、土鱉蟲、生茜草、連翹、垂盆草、蛇舌草、田基黃、白術(shù)、山藥、仙靈脾等，其中柴胡即可疏肝解郁，又能清解熱邪，黃芪清熱利濕，赤芍瀉肝火，茵陳蒿利膽退黃、利濕清熱，土茯苓淡滲利濕、清熱解毒，鳳尾草瀉熱涼血、利水解毒，草河車消炎止痛、清熱解毒，連翹、蛇舌草、垂盆草、田基黃清熱解毒，以上藥材作為主藥，其余幾味藥為輔藥，在扶正的同時(shí)還可清熱解毒。

本研究結(jié)果顯示，治療后C組患者血清HBV DNA水平顯著低于治療前，A組患者CD3+、CD4+T細(xì)胞和CD4+/CD8+比值顯著升高，CD8+T細(xì)胞顯著降低。B組治療前后T細(xì)胞亞群無顯著性變化，C組患者 CD3+T細(xì)胞和 CD4+/CD8+比值顯著升高，CD8+T細(xì)胞顯著降低。B組和C組患者NK細(xì)胞均顯著升高，A組和C組患者血清IL-2水平均顯著升高。在A組，血清HBV DNA載量減少與CD4+T細(xì)胞增加呈正相關(guān)。在C組，血清HBV DNA載量減少與CD3+T細(xì)胞增加、CD8+T細(xì)胞減少和NK細(xì)胞增加呈正相關(guān)。結(jié)果表明，相比較于單用柴胡解毒湯或阿德福韋酯片，使用柴胡解毒湯聯(lián)合阿德福韋酯片治療CHB患者，可有效改善患者T細(xì)胞亞群異常，并提高體內(nèi)NK細(xì)胞和IL-2水平，降低病毒載量，有效調(diào)節(jié)患者的免疫功能，提高療效，增強(qiáng)抗HBV效果。

柴胡解毒湯聯(lián)合阿德福韋酯可調(diào)節(jié)CHB患者免疫功能、打破免疫耐受、恢復(fù)肝功能、改善自覺癥狀、提高抗病毒效果。兩種治療藥物優(yōu)勢互補(bǔ)，增強(qiáng)了療效。本研究臨床樣本量較小，是否具有長期療效，還有待于下一步深入研究與分析。

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（收稿：2016-07-11）

（本文編輯：陳從新）

Changes of peripheral blood T lymphocyte subsets and IL-2 in patients with chronic hepatitis B receiving Bupleurum Jiedu decoction combined with adefovir dipivoxil therapy

Xiao Yuzhu.Department of Liver Diseases，Infectious Disease Hospital，Tangshan 063000，Hebei Province

s】Objectives To investigate the changes of peripheral blood T lymphocyte subsets and IL-2 in patients with chronic hepatitis B（CHB）receiving Bupleurum Jiedu decoction combined with adefovir dipivoxil（ADV）therapy.Methods 60 patients with CHB were recruited in our hospital between December 2013 and March 2015.They were treated with Bupleurum Jiedu decoction in group A（n=20），with ADV in group B（n=20）and with both in group C（n=20）.All regimens lasted for 12 months.Serum HBV markers and IL-2 were detected by ELISA，and T lymphocyte subsets and natural killer cells were detected by flow cytometry.Results At the end of 12-month treatment，the serum HBV DNA loss，ALT normalization rate and HBeAg negative rate in group C were 85.00%，80.00%and 80.00%，much higher than in group A（50.00%，65.00%and 45.00%，respectively）or in group B（65.00%，55.00%and 50.00%，respectively，P<0.05）；the proportion of peripheral CD3+T cells and CD4+T cells and ratio of CD4+/CD8+cells in groups C were（65.2±9.6）%，（28.4±7.2）%and（1.1±0.3），significantly different as compared to those in group A 【（57.5±8.7）%，（45.7±5.4）%and（1.8±0.6），respectively or group B（55.7±6.3）%，（23.2±9.5）%and（0.9±0.1），respectively，P<0.05]；the proportion of CD8+T cells in group C was（25.3±4.1）%，much lower than in group B [（28.7±4.3）%，P<0.05]；the proportion of NK cells in group C was not significantly different as compared to that in group A or in group B（P>0.05），while serum IL-2 level【（3.6± 0.8）ng/mL】was much higher than in group B【（2.8± 0.5）ng/mL，P<0.05】；the increased CD4+T cells was positively correlated to serum HBV DNA lossin group A（P<0.05）and the increased CD3+T cells，decreased CD8+T cells and increased NK cells were positively correlated to serum HBV DNA loss in group C（P< 0.05）.Conclusions The application of Bupleurum Jiedu decoction combined with adefovir dipivoxil can adjust lymphocyte dysfunction，break immune tolerance and improve the recovery of liver functions.

Hepatitis B；Herbal medicine；Adefovir dipivoxil；Peripheral lymphocyte subsets

10.3969/j.issn.1672-5069.2017.01.010

063021河北省唐山市傳染病醫(yī)院肝病科

肖玉柱，男，43歲，醫(yī)學(xué)學(xué)士，主治醫(yī)師。E-mail：tsxiaoyuzhu@163.com