ARID1a及性激素受體在子宮內(nèi)膜增生病變組織中的表達(dá)及意義

要秀娥，趙 敏*

（1．山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030001；2．山西省婦幼保健院，山西 太原 030013）

ARID1a及性激素受體在子宮內(nèi)膜增生病變組織中的表達(dá)及意義

要秀娥1，趙 敏2*

（1．山西醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)學(xué)院，山西 太原 030001；2．山西省婦幼保健院，山西 太原 030013）

目的 探討ARID1a基因在子宮內(nèi)膜增生病變組織中的表達(dá)及與性激素受體表達(dá)的相關(guān)性，為子宮內(nèi)膜增生癥的防治提供新的思路。方法 采用免疫組化SP（streptavidin peroxidase-biotin，SP）法，檢測132例子宮內(nèi)膜病變組織（單純性增生40例，復(fù)雜性增生40例，不典型增生52例）及28例增殖期子宮內(nèi)膜組織中ARID1a、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、雄激素受體（AR）的陽性表達(dá)率。結(jié)果 （1）在子宮內(nèi)膜組織中，普遍存在ER、PR、AR受體的表達(dá)。ER、PR陽性表達(dá)率各組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；AR在不典型增生癥組中表達(dá)率最低，與其余各組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），增殖期內(nèi)膜組、單純性增生組、復(fù)雜性增生組各組間比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（2）ARID1a基因在子宮內(nèi)膜腺上皮和間質(zhì)細(xì)胞核中普遍表達(dá)，在不典型子宮內(nèi)膜組織中表達(dá)丟失率為19.2%，與其余各組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；增殖期內(nèi)膜組、單純性增生組、復(fù)雜性增生組間，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（3）ARID1a基因的表達(dá)與ER、PR、AR之間無相關(guān)性。結(jié)論 雄激素及其受體與子宮內(nèi)膜病變風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)，ARID1a基因突變和表達(dá)缺失是子宮內(nèi)膜增生惡變中的一個(gè)早期事件；對于雄激素受體陽性患者采用聯(lián)合降低雄激素的治療，將有可能成為子宮內(nèi)膜增生癥患者治療的新思路。

子宮內(nèi)膜增生；雌激素受體，孕激素受體；雄激素受體；ARID1a基因

子宮內(nèi)膜不典型增生癥是子宮內(nèi)膜癌的癌前病變，23%～29%的未經(jīng)治療的子宮內(nèi)膜不典型增生患者可發(fā)展為子宮內(nèi)膜癌[1]。有研究表明，在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞及組織中有雄激素受體（AR）的表達(dá)[2]。AT豐富結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)域1a （AT rich interaction domain 1a，ARID1a）ARID1a基因是一個(gè)潛在的抑癌基因，在多種腫瘤中都存在不同程度的突變。在婦科癌癥中突變率最高，卵巢透明細(xì)胞癌中達(dá)到46%～57%[3]，子宮內(nèi)膜癌中達(dá)到30%～41.9%[4]。

本研究采用免疫組化法檢測ARID1a基因、雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、雄激素受體（AR）在增殖期內(nèi)膜、子宮膜增生癥不同病變中的表達(dá)，探討子宮內(nèi)膜增生癥的病因和發(fā)病機(jī)制，為子宮內(nèi)膜增生癥的防治提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月～2016年6月山西省婦幼保健院婦科經(jīng)宮腔鏡檢查和（或）診刮后的子宮內(nèi)膜石蠟切塊標(biāo)本160例，分為單純性增生組40例，復(fù)雜性增生組40例、不典型增生組52例，增殖期內(nèi)膜組織28例，全部標(biāo)本經(jīng)病理學(xué)證實(shí)，平均年齡（38.42±9.16）歲，所有患者均無乳腺癌、分泌雌激素的卵巢腫瘤病史，3個(gè)月內(nèi)未用激素治療。各組一般資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采用免疫組化SP法檢測各組組織中ARID1a、AR、ER 及PR蛋白表達(dá)產(chǎn)物，一抗鼠抗人ER、PR、兔抗人AR單克隆抗體（工作濃度分別為1:80，1:200及1:200）和SP免疫組化染色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，ARID1a單克隆抗體（工作濃度1:1000稀釋）購自abcam公司。用已知乳腺癌、前列腺癌作陽性對照。

1.3 療效判定標(biāo)準(zhǔn)

ER、PR、AR陽性染色為在胞核內(nèi)出現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒，染色結(jié)果根據(jù)細(xì)胞染色程度和陽性細(xì)胞百分率進(jìn)行綜合判定。陽性細(xì)胞數(shù)：無陽性細(xì)胞或＜5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，50%～75%為3分，＞75%為4分；著色程度計(jì)分：不著色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分，兩者相乘為最后得分：3～4分為弱陽性（+），6～9分為陽性（++），12分為強(qiáng)陽性（+++），（+）～（+++）均為陽性表達(dá)。

ARID1a表達(dá)的判定：ARID1a陽性染色出現(xiàn)在胞核，細(xì)胞核內(nèi)見棕黃色顆粒為陽性表達(dá)，細(xì)胞核內(nèi)未見棕黃色顆粒為陰性表達(dá)[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

運(yùn)用SPSS 21.0軟件，計(jì)量資料以“x ±s”表示，率的比較采用Fisher確切概率法檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同子宮內(nèi)膜增生病變組織中ER、PR、AR的比較

增殖期內(nèi)膜組、單純性增生組、復(fù)雜性增生組、不典型增生組的ER、PR的陽性表達(dá)率，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；不典型增生組，AR表達(dá)率最低，與其余各組間比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.018），增殖期內(nèi)膜組，單純性增生組、復(fù)雜性增生組，AR陽性表達(dá)率，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 不同子宮內(nèi)膜組中ER、PR、AR比較 [n（%）]

2.2 ARID1a基因表達(dá)水平的比較

隨著子宮內(nèi)膜增生病變的發(fā)展，ARID1a基因表達(dá)的丟失率逐漸增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2，圖1、2。

表2 ARID1a在各組中的表達(dá)

圖1 ARID1a 陽性表達(dá) SP×200

圖2 ARID1a 陰性表達(dá) SP×200

2.3 不典型增生組中，ARID1a與ER、PR、AR之間的相關(guān)性

在不典型增生組中，ARID1a與ER、PR、AR之間無明顯的相關(guān)性。見表3。

表3 子宮內(nèi)膜病變組織中ARID1a與ER、PR、AR的相關(guān)性

3 討 論

子宮內(nèi)膜癌是最常見的一種女性盆腔惡性腫瘤，其發(fā)病率有逐年增加的趨勢，在美國，每年有60050子宮內(nèi)膜癌新發(fā)病例和10470死亡病例[6]。子宮內(nèi)膜不典型增生是子宮內(nèi)膜癌的癌前病變，無孕激素拮抗的雌激素的長期刺激是子宮內(nèi)膜增生癥乃至Ⅰ型子宮內(nèi)膜癌的病因[7-8]，但是，基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床研究均證實(shí)，子宮內(nèi)膜異常增生的發(fā)生發(fā)展并不能僅用“無孕激素拮抗”這一理論來解釋，圍絕經(jīng)期婦女是子宮內(nèi)膜癌的高發(fā)人群，這些女性伴隨雌激素產(chǎn)生紊亂和不足，并不是雌激素水平最高的階段，約14%～16%子宮內(nèi)膜增生癥患者僅用孕激素治療無反應(yīng)（孕激素抵抗或不能逆轉(zhuǎn)病變），約20%在治療獲得緩解后復(fù)發(fā)甚至加重[9]。因此，探討子宮內(nèi)膜增生的病因和發(fā)病機(jī)制，將成為臨床預(yù)防及治療子宮內(nèi)膜癌的關(guān)鍵。

3.1 血清雄激素及其受體與子宮內(nèi)膜增生癥的相關(guān)性

歐洲癌癥與營養(yǎng)前瞻性研究委員會(huì)，分析了223例子宮內(nèi)膜癌（EC）及446例正常婦女后認(rèn)為，游離睪酮水平升高與子宮內(nèi)膜癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)[2]。薈萃分析顯示，多囊卵巢綜合癥（PCOS）患者與無PCOS相比，患子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn)顯著增加（OR：2.79），高的雄激素水平被認(rèn)為是患子宮內(nèi)膜癌的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素[2]。國內(nèi)林金芳等學(xué)者采用口服達(dá)英-35聯(lián)合二甲雙胍治療多囊卵巢綜合癥合并17例子宮內(nèi)膜不典型增生癥（EAH）及5例EC患者，結(jié)果顯示，12例（9例EAH，3例EEC）曾采用高劑量孕激素治療未能逆轉(zhuǎn)的患者及10例（EAH8例，EEC2例）直接采用達(dá)英-35聯(lián)合二甲雙胍治療的患者，于治療3～6個(gè)月后均獲得完全逆轉(zhuǎn)（100%）[9-10]。達(dá)英-35所含雌激素成分炔雌醇及孕激素成分環(huán)丙孕酮，可明顯降低血循環(huán)中及卵巢內(nèi)雄激素水平，從而間接抑制子宮內(nèi)膜細(xì)胞異常增生。基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)和臨床研究均證實(shí)，雄激素與子宮內(nèi)膜增生癥乃至子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)，降低雄激素治療對于子宮內(nèi)膜增生癥病變逆轉(zhuǎn)有一定的療效，但仍需要臨床大樣本的研究。

有研究表明，AR第一外顯子編碼區(qū)存在著多態(tài)性及微衛(wèi)星序列即重復(fù)的胞嘧啶-腺嘌呤-鳥嘌呤序列（CAG）n、單核苷酸多態(tài)性等基因的改變與子宮內(nèi)膜癌風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)。

Mertens等的研究顯示，子宮內(nèi)膜間質(zhì)及平滑肌細(xì)胞中AR的免疫活性顯著高于腺上皮細(xì)胞，增殖期子宮內(nèi)膜組織中AR的表達(dá)顯著高于分泌期[11]。Ito等在44例（100%）子宮內(nèi)膜樣癌的間質(zhì)細(xì)胞及其中39例（89%）的癌細(xì)胞中檢測到AR呈陽性表達(dá)，Tanaka等研究報(bào)道122例子宮內(nèi)膜樣癌中，其中92例（82%）檢測到了AR受體的表達(dá)[11]。在我們的研究中，AR在增殖期組、單純性增生組、復(fù)雜性增生組中呈高表達(dá)，而在不典型增生組中表達(dá)降低。子宮內(nèi)膜組織中高表達(dá)的AR，可能是雄激素作為雌激素的前體轉(zhuǎn)化為雌激素從而促進(jìn)子宮內(nèi)膜增生癥的發(fā)生發(fā)展，也有學(xué)者認(rèn)為，可能與雄激素的抗細(xì)胞增殖的作用有關(guān)，而Apparao等在體外子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株實(shí)驗(yàn)中，也證實(shí)雙氫睪酮和雌二醇均可上調(diào)AR的表達(dá)[6]。雄激素是否直接影響子宮內(nèi)膜增生癥的發(fā)生，目前仍不十分清楚。不典型增生內(nèi)膜組織中AR表達(dá)下降，可能與局部持續(xù)增高的雌激素微環(huán)境，細(xì)胞應(yīng)激狀態(tài)下，AR構(gòu)型改變，AR轉(zhuǎn)錄活性下降，最終導(dǎo)致雄激素受體信號的缺陷，但具體的調(diào)控機(jī)制尚不十分明確，仍有待于進(jìn)一步研究。

3.2 ARID1a基因突變與表達(dá)缺失與子宮內(nèi)膜增生癥的相關(guān)性

染色質(zhì)重塑，包括DNA的合成、轉(zhuǎn)錄及DNA損傷后的修復(fù)，在細(xì)胞核活動(dòng)中起著非常重要的作用。ARIDla是ATP依賴的染色質(zhì)重塑復(fù)合物的非催化亞基，ARIDla編碼的蛋白為ARIDla蛋白，或者稱為BAF250a蛋白，在腫瘤中頻繁缺失，它的缺失與多種癌癥（包括結(jié)腸癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌等）的發(fā)生密切相關(guān)[12-13]。Werner Henrica MJ等研究表明：在不伴有非典型增生的子宮內(nèi)膜病變組織中未發(fā)現(xiàn)ARID1a蛋白表達(dá)的缺失，16%非典型增生，19%子宮內(nèi)膜腫瘤，28%轉(zhuǎn)移病灶中發(fā)現(xiàn)了ARID1a表達(dá)的缺失[14]。因此，ARID1A的缺失似乎是在子宮內(nèi)膜癌變過程中的早期事件。Ayhan等使用免疫組化檢測與子宮內(nèi)膜癌腫瘤抑制和增殖有關(guān)的兩個(gè)基因PTEN和ARID1A基因，發(fā)現(xiàn)在所有PTEN基因損失的區(qū)域都觀察到了ARID1a基因表達(dá)的缺失，并發(fā)ARID1A和PTEN損失的區(qū)域較只有PTEN損失的區(qū)域觀察到顯著的增殖活性[5]。這些研究結(jié)果表明，ARID1a基因是必不可少看門基因，防止PTEN基因的失活導(dǎo)致子宮上皮細(xì)胞過度增殖，進(jìn)而由子宮內(nèi)膜癌前病變過渡到子宮內(nèi)膜癌的作用。在我們的研究中，不典型子宮內(nèi)膜組織中，ARID1a基因表達(dá)缺失率為19.3%，這與Werner Henrica MJ等的研究結(jié)果一致。同時(shí)，我們在10例ARID1a表達(dá)缺失的組織中發(fā)現(xiàn)有5例AR呈陰性表達(dá)，其可能機(jī)制為子宮內(nèi)膜組織局部持續(xù)高雌激素環(huán)境、炎癥等因素，導(dǎo)致AR發(fā)生甲基化、單核苷酸多態(tài)性等基因改變，而ARID1a基因表達(dá)的缺失，導(dǎo)致AR損傷后的修復(fù)能力降低，最終導(dǎo)致在子宮內(nèi)膜細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化。

雌激素在子宮內(nèi)膜增生癥的發(fā)生發(fā)生中起著至關(guān)重要的作用，但雄激素及其受體與子宮內(nèi)膜增生癥發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)顯著相關(guān)，臨床上對于孕激素治療不敏感的子宮內(nèi)膜增生癥患者，采用聯(lián)合降低雄激素的治療，有可能成為子宮內(nèi)膜增生癥治療的一個(gè)新的思路；ARID1a基因表達(dá)的缺失，是子宮內(nèi)膜惡變發(fā)生發(fā)展中的一個(gè)早期事件；有關(guān)子宮內(nèi)膜增生癥的病因和發(fā)病機(jī)制仍有待于進(jìn)一步的研究。

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本文編輯：劉欣悅

Expressions of ARID1a and sex hormone receptor in Endometrial hyperplasia

YAO Xiu-e1,ZHAO Min2*
(1.The second clinical medical college,Shanxi Medical University,Shanxi Taiyuan 030001,China; 2.Maternal and child health care hospital of Shanxi province Taiyuan ,Shanxi Taiyuan 030013,China)

Objective To investigate the expression of ARID1a,in endometrial hyperplasia and its correlation wits sex hormone receptors.Methods Expressions of ARID1a,ER,PR and AR were detected with immunohistochemistry technic(streptavidin peroxidase-biotin,SP)in 160 cases including 28 of proliferative endometrium,40 of Simple endometrial hyperplasia,40 of Complex endometrial hyperplasia,52 of atypical proliferation.Results （1）The expression of ER,PR and AR receptors exist widely in the proliferative phase endometrium,atypical endometrial tissue,atypical endometrial hyperplasia.The positive expression rate of ER between these groups is not statistically significant;the positive expression rate of PR shows a tendency of decrease with the lowest expression rate appearing in atypical endometrial hyperplasia tissues;differences in the positive expression rate of AR in proliferative endometrium and all typical endometrial tissues had no significant statistical significance with the lowest expression rate existing in the group of atypical hyperplasia,the difference is statistically significant(P=0.018).(2)ARID1a gene has expression both in endometrial glandular epithelial and stromal cell nucleus,and the expression loss rate is 19.2% in atypical endometrial tissues.Compared with other groups, the atypical hyperplasia group has a significant statistical difference(P=0.004).(3)There is no correlation between ARID1a gene and ER,PR,AR.Conclusion Androgen and its receptor are significantly associated with the risk of endometrial hyperplasia.ARID1a gene mutation and expression of endometrial hyperplasia canceration in an early event;The treatment of androgen receptor positive patients with combined reduction of androgen will likely become a new idea for the treatment of endometrial hyperplasia.

Endometrial hyperplasia;Estrogen receptor;Progesterone receptor;Androgen receptor;ARID1a

R737.33

B

ISSN.2095-8803.2017.01.078.04

趙 敏，Email：minzhao22@163.com