人白細(xì)胞抗原B＊1502基因型和年齡對(duì)抽搐或癲癇患兒血同型半胱氨酸濃度的影響

張 春何大可黃曉會(huì)魏 昕馬 婧祁 佳劉 艷徐阿晶卜書(shū)紅

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院1.藥學(xué)部，2.兒神經(jīng)內(nèi)科（上海 200092）

人白細(xì)胞抗原B＊1502基因型和年齡對(duì)抽搐或癲癇患兒血同型半胱氨酸濃度的影響

張 春1何大可2黃曉會(huì)1魏 昕1馬 婧1祁 佳1劉 艷1徐阿晶1卜書(shū)紅1

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院1.藥學(xué)部，2.兒神經(jīng)內(nèi)科（上海 200092）

目的探討具有人白細(xì)胞抗原B*1502(HLA-B*15:02)不同基因型和年齡對(duì)抽搐或癲癇患兒血漿同型半胱氨酸(Hcy )濃度的影響，研究患兒血漿Hcy濃度的影響因素，以減少血漿Hcy增高所致的潛在致病風(fēng)險(xiǎn)。方法選取2015年10月至2016年6月間檢測(cè)HLA-B*15:02基因型的抽搐或癲癇患兒15例，比較不同基因型患兒的血漿Hcy濃度；并將后者對(duì)應(yīng)患兒年齡作線性回歸分析。結(jié)果血漿Hcy平均濃度在未攜帶HLA-B*15:02基因患兒中為(8.38±4.23)μmol/L，在攜帶HLA-B*15:02基因患兒中為(13.03±0.97)μmol/L，攜帶者明顯高于未攜帶者。隨著患兒年齡增加，血漿Hcy濃度有增高趨勢(shì) (r2=0.29, P＜0.05 )。結(jié)論HLA-B*15:02基因攜帶者和較大年齡抽搐或癲癇患兒有發(fā)生血Hcy增高的傾向，增加患兒潛在致病風(fēng)險(xiǎn)。HLA-B*15:02基因型和年齡可預(yù)測(cè)抽搐患兒血漿Hcy濃度變化傾向。

同型半胱氨酸； 人白細(xì)胞抗原B*1502； 抽搐； 癲癇； 兒童

抽搐或癲癇癥狀出現(xiàn)于能引起神經(jīng)系統(tǒng)損傷的疾病，而神經(jīng)系統(tǒng)受損引起的抽搐多與腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)不平衡有關(guān)，同型半胱氨酸( homocysteine, Hcy)的濃度與此有密切關(guān)系[1,2]。Hcy是體內(nèi)活性甲基供體S-腺苷甲硫氨酸循環(huán)的中間代謝產(chǎn)物，同時(shí)也是一種神經(jīng)興奮性毒性氨基酸，當(dāng)其累積過(guò)多時(shí)，可刺激N-甲基-D-天門冬氨酸( N-methyl-D-aspartate, NMDA )受體，致神經(jīng)元異常放電，引起抽搐發(fā)生或癲癇發(fā)作[3]。此外，高Hcy血癥也被認(rèn)為能作用于體內(nèi)凝血系統(tǒng)多個(gè)方面，包括血管壁、血小板及凝血因子等，促進(jìn)血栓形成，導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化等心腦血管事件的發(fā)生[4]。同時(shí)，研究認(rèn)為抽搐或癲癇患兒在治療過(guò)程中所應(yīng)用的抗癲癇藥物丙戊酸鈉、卡馬西平等也能導(dǎo)致體內(nèi)血Hcy增高，從而引發(fā)上述Hcy潛在致病風(fēng)險(xiǎn)[4,5]?？R西平是臨床常用的一線抗癲癇藥物，其不良反應(yīng)的發(fā)生與個(gè)體是否攜帶人白細(xì)胞抗原B*1502( human leukocyte antigen B*15:02, HLA-B*15:02)基因密切相關(guān)[6]，而其同時(shí)會(huì)導(dǎo)致高Hcy血癥。然而，迄今為止尚沒(méi)有抽搐或癲癇患兒血Hcy濃度與HLA-B*15:02基因型的關(guān)聯(lián)性研究。闡明這兩者間的聯(lián)系，分析HLA-B*15:02基因型對(duì)癲癇患兒的意義，將對(duì)抗癲癇藥物的安全有效應(yīng)用有很強(qiáng)的提示意義。因此，本研究旨在探討HLA-B*15:02不同基因型和年齡因素對(duì)抽搐患兒血漿同型半胱氨酸濃度的影響，研究患兒血漿Hcy濃度可能的影響因素，以減少血漿高Hcy所致的潛在致病風(fēng)險(xiǎn)。

1 臨床資料

選取新華醫(yī)院2015年10月至2016年6月間的因抽搐住院或確診為癲癇的患兒15例，均經(jīng)臨床和腦電圖檢查確診，并排除其他影響血同型半胱氨酸水平的疾病，沒(méi)有特殊飲食的患兒。見(jiàn)表1。

表1 患兒一般資料、HLA-B*15:02基因型及血Hcy濃度

取患兒靜脈血3 mL，使用血清分離管分離血清，使用循環(huán)酶法檢測(cè)血漿Hcy。該檢測(cè)由專業(yè)技術(shù)人員操作完成。取靜脈血2 mL，置于EDTA抗凝管中，使用北京華夏時(shí)代科技有限公司提供的測(cè)序反應(yīng)通用試劑盒及熒光分析儀，以熒光原位雜交測(cè)序法檢測(cè)HLA-B*15:02基因型。使用Prism 5.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

15例患兒中，3例診斷為抽搐的患兒，血Hcy平均濃度為 (12.23 ± 0.15) μmol/L；12例診斷為癲癇的患兒，血Hcy平均濃度為 (8.77 ± 4.62) μmol/L；抽搐和癲癇患兒的血Hcy濃度無(wú)明顯差異（P=0.25）。

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果HLA-B*15:02基因型分為兩類：①未攜帶HLA-B*15:02基因患兒，即HLA-B*15:02純合陰性HLA-B*15:02－/－；②攜帶HLA-B*15:02基因患兒，即HLA-B*15:02雜合陽(yáng)性HLA-B*15:02+/－。其中純合陰性患兒12例，占檢測(cè)患兒總數(shù)的80%；雜合陽(yáng)性患兒3例，占檢測(cè)患兒總數(shù)的20%。15例患兒中未檢測(cè)到HLA-B*15:02純合陽(yáng)性攜帶者(HLA-B*15:02+/+)。

HLA-B*15:02－/－患兒的Hcy平均血濃度為(8.38±4.23) μmol/L ( 95%CI： 5.69～11.06 )，HLA-B*15:02+/－患兒為(13.03±0.97) μmol/L（95%CI：10.62～15.45）。在HLA-B*15:02不同基因型患兒中，所有Hcy高于11.06 μmol/L 的患兒分布為未攜帶者有4例，占未攜帶者的33.33% (OR=0.33)，雜合攜帶者3例，占攜帶者的100% (OR=1)。兩種基因型比較，HLA-B*15:02攜帶患兒Hcy血濃明顯高于未攜帶患兒 ，雜合攜帶者發(fā)生Hcy升高的風(fēng)險(xiǎn)是未攜帶者的3倍 (OR=3.03，P＜0.05)，見(jiàn)表2，圖1。

15例患兒，最小年齡2個(gè)月，最大年齡11歲，以患兒血漿Hcy濃度對(duì)患兒年齡作線性回歸發(fā)現(xiàn)隨著患兒年齡增大，血漿Hcy濃度有增高趨勢(shì)，回歸方程為：y=0.652x+7.502；患兒年齡與血Hcy濃度間存在明顯正相關(guān)(r2= 0.29， P＜0.05 )，見(jiàn)圖2。

表2 HLA-B*15:02不同基因型患兒血Hcy濃度升高的相對(duì)風(fēng)險(xiǎn)

圖1 HLA-B*15:02不同基因型患兒血漿Hcy濃度比較

圖2 患兒年齡與血漿Hcy濃度的散點(diǎn)圖

2 討論

引起患兒抽搐的多種病因均能導(dǎo)致腦部神經(jīng)系統(tǒng)損傷，在此過(guò)程中，腦部神經(jīng)遞質(zhì)的不平衡是機(jī)制之一。同時(shí)，該機(jī)制也存在于癲癇患者的發(fā)病與治療過(guò)程中。其中興奮性神經(jīng)遞質(zhì)Hcy發(fā)揮著重要影響。研究證明，抗癲癇藥物丙戊酸鈉、卡馬西平可引起患兒血漿Hcy增多，后者進(jìn)一步刺激腦內(nèi)神經(jīng)元NMDA受體，致其異常放電，導(dǎo)致抽搐或癲癇[7-9]。同時(shí)，血Hcy增高也是引發(fā)體內(nèi)血栓形成、腦卒中、動(dòng)脈粥樣硬化等心腦血管意外事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[10,11]，因此Hcy的血濃度增高存在諸多潛在危害。

同時(shí)，抗癲癇藥物卡馬西平、奧卡西平等的藥物敏感性及不良反應(yīng)與是否攜帶HLA-B*15:02基因關(guān)系密切[12]。因此，研究HLA-B*15:02基因型與抽搐或癲癇患兒血Hcy間的關(guān)系以探討后續(xù)用藥風(fēng)險(xiǎn)及藥物方案的調(diào)整具有重要意義。

本研究比較了抽搐與癲癇患兒的血Hcy濃度，兩者間無(wú)明顯差異。隨后探討了抽搐與癲癇患兒的血Hcy濃度與其HLA-B*15:02基因型的關(guān)系。研究已證明攜帶HLA-B*15:02基因患者對(duì)卡馬西平高敏感，具有Steven-Johnson綜合征和中毒性表皮壞死松解癥的藥物不良反應(yīng)高發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。而本研究發(fā)現(xiàn)HLA-B*15:02陽(yáng)性雜合攜帶者血Hcy明顯高于陰性未攜帶者，提示該基因攜帶者具有發(fā)生血Hcy增高傾向，除需慎用卡馬西平外，在選擇其他抗癲癇藥如丙戊酸鈉時(shí)也需警惕高Hcy血癥的發(fā)生，從而導(dǎo)致癲癇或血栓相關(guān)事件。

此外，本研究發(fā)現(xiàn)在兒童患者中，年齡與血Hcy濃度間也存在明顯相關(guān)性，回歸分析顯示年齡越大的患兒血Hcy有增高趨勢(shì)。提示在兒童患者中，年齡對(duì)血Hcy濃度有明顯影響。在使用抗癲癇藥時(shí)，為了避免血Hcy濃度增高，除需考慮選藥品種外，還需考慮患兒年齡因素。

本研究首次觀察到抽搐或癲癇患兒HLA-B*15:02不同基因型和年齡對(duì)血Hcy濃度的關(guān)系，但不足之處在于樣本量偏少，雖然由于HLA-B*15:02雜合攜帶者在亞裔人群中比例相對(duì)歐美人群偏高，但仍然只占10%～20%左右[6]，與本研究結(jié)果相符，也是本研究中HLA-B*15:02雜合攜帶患兒數(shù)量偏少的原因之一。同時(shí)，由于對(duì)HLA-B*15:02基因型的檢測(cè)開(kāi)展時(shí)間較短，病例數(shù)量積累有限，且研究對(duì)象為兒童這一特殊人群而非所有年齡段人群，研究的人群基數(shù)較小，導(dǎo)致了本研究病例數(shù)量受限，對(duì)研究結(jié)果可能會(huì)有一定影響。因此更全面的結(jié)論尚需依賴周期更長(zhǎng)的大樣本研究。

[1] 郝美美，鄧艷春. 同型半胱氨酸與神經(jīng)系統(tǒng)疾病關(guān)系的研究進(jìn)展 [J]. 臨床神經(jīng)病學(xué)雜志. 2016, 29(1): 66-69.

[2] 劉貝貝，樊海霞，陳彬，等. 高同型半胱氨酸血癥與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的關(guān)系研究進(jìn)展 [J]. 神經(jīng)損傷與功能重建，2016, 11(4): 336-338.

[3] Gorgone G, Caccamo D, Pisani LR, et al. Hyperhomocysteinemia in patients with epilepsy: does it play a role in the pathogenesis of brain atrophy? A preliminary report [J]. Epilepsia, 2009, 50(Suppl 1): 33-36.

[4] Oz O, Gokcil Z, Bek S, et al. Is asymmetric dimethylarginine responsible for the vascular events in patients underantiepileptic drug treatment? [J]. Epilepsy Res, 2009, 87(1): 54-58.

[5] 張其梅，夏杰，鄭錚. 丙戊酸鈉和卡馬西平對(duì)癲癇患者血同型半胱氨酸、葉酸、維生素B12水平的影響[J]. 臨床神經(jīng)病學(xué)雜志, 2012, 25(4): 291-292.

[6] Leckband SG, Kelsoe JR, Dunnenberger HM, et al. Clinical Pharmacogenetics Implementation Consortium guidelines for HLA-B genotype and carbamazepine dosing [J]. Clin Pharmacol Ther, 2013, 94(3): 324-328.

[7] Kolinova M, Dvorakova J, Hladikova E, et al. Moderate hyperhomocysteinemia in patients treated for epilepsy [J]. Prague Med Rep, 2006, 107(2): 227-241.

[8] 江志，張潔，楊理明，等. 癲癇兒童服用丙戊酸鈉或卡馬西平后血同型半胱氨酸的變化[J]. 兒科藥學(xué)雜志, 2012, 18(2): 1-4.

[9] 盧軍，曾其昌，王琴，等. 奧卡西平與丙戊酸鈉對(duì)癲癇患者血清同型半胱氨酸、超敏C 反應(yīng)蛋白、非對(duì)稱性二甲基精氨酸水平及認(rèn)識(shí)功能、生活質(zhì)量影響的比較研究[J]. 實(shí)用心腦肺血管雜志, 2015, 23(12): 121-123.

[10] Sun Y, Chien KL, Hsu HC, et al. Use of serum homocysteine to predict stroke, coronary heart disease and death in ethnic Chinese. 12-year prospective cohort study [J]. Circ J, 2009, 73(8): 1423-1430.

[11] 單嶠，王世勛，李培棟，等. 癲癇患者血漿同型半胱氨酸水平及多維生素補(bǔ)充療法的干預(yù)效果研究[J]. 重慶醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào), 2014, 39(2):197-202.

[12] Amstutz U, Ross CJ, Castro-Pastrana LI, et al. HLA-A 31:01 and HLA-B 15:02 as genetic markers for carbamazepine hypersensitivity in children [J]. Clin Pharmacol Ther, 2013, 94(1): 142-149.

Effect of human leukocyte antigen B*1502 genotype and age on serum homocysteine levels in children with seizures or epilepsy

ZHANG Chun1, HE Dake2, HUANG Xiaohui1, WEI Xin1, MA Jing1, QI Jia1, LIU Yan1, XU Ajing1, BO Shuhong1
(1.Department of Pharmacy, 2. Department of Pediatric Neurology, Xinhua Hospital Affiliated to Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai 200092, China)

ObjectiveTo explore the effect of human leukocyte antigen B* genotype and age on serum homocysteine (Hcy) levels in children with seizures or epilepsy.MethodsFifteen children with seizures or epilepsy in whom HLA-B*15:02 genotype was detected during October 2015 to June 2016 were included. The plasma Hcy concentration in children with different genotypes was compared. The association of Hcy concentration and age was performed by linear-regression analysis.ResultsThe mean concentration of Hcy was 8.38±4.23 μmol/L in children not carrying HLA-B*15:02 gene, which was obviously higher than that in children carrying HLA-B*15:02 gene 13.03±0.97 μmol/L (P＜0.05). The Hcy concentration increased with the age (r2=0.29, P＜0.05).ConclusionsElder children with seizures or epilepsy carrying HLA-B*15:02 gene tend to have higher Hcy concentration and increased potential risk of disease. HLA-B*15:02 gene type and age can predict the changes of Hcy concentration in children with convulsions.

homocysteine; human leukocyte antigen B*15:02; seizures; epilepsy; child

10.3969/j.issn.1000-3606.2017.03.008

2016-07-21)

(本文編輯：鄒 強(qiáng))

上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院基金 (No. 14XJ10033)

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