非動(dòng)員異基因捐獻(xiàn)者粒細(xì)胞的采集和效果分析

徐麗娟 韓麗霞 趙欣欣 奚銘遠(yuǎn) 張美婷 駱 群

?論著?

非動(dòng)員異基因捐獻(xiàn)者粒細(xì)胞的采集和效果分析

徐麗娟 韓麗霞 趙欣欣 奚銘遠(yuǎn) 張美婷 駱 群

目的 了解非動(dòng)員情況下捐獻(xiàn)者粒細(xì)胞采集和輸注的效果，是否可以支持血液病患者在化療骨髓抑制期粒細(xì)胞缺乏的情況下進(jìn)行抗感染治療。方法 采用COM.TEC血細(xì)胞分離機(jī)采集14例捐獻(xiàn)者外周血中性粒細(xì)胞，血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀計(jì)數(shù)產(chǎn)品中粒細(xì)胞數(shù)量；分別將捐獻(xiàn)者粒細(xì)胞輸注給化療后骨髓抑制粒細(xì)胞缺乏的血液病患者，觀察其輸注后白細(xì)胞數(shù)是否升高和或體溫是否正常。 結(jié)果 產(chǎn)品中粒細(xì)胞計(jì)數(shù)能夠達(dá)到1×1010/L的要求，與文獻(xiàn)中提到的經(jīng)集落刺激因子（G-CSF）動(dòng)員后采集的（10.3-14.4）×1010/L相差較大，但粒細(xì)胞缺乏的血液病患者輸注后有效率達(dá)到85.7%。結(jié)論 非動(dòng)員的捐獻(xiàn)者粒細(xì)胞采集可以支持患者的抗感染治療。

中性粒細(xì)胞 粒細(xì)胞缺乏 感染 化療 骨髓抑制

中性粒細(xì)胞也稱中性多形核白細(xì)胞，占血液中白細(xì)胞總數(shù)的50%～70%[1]，是最重要的防御細(xì)胞，也是機(jī)體抵抗病原體入侵的第一道防線。其主要功能是吞噬和殺傷細(xì)胞，包括粘附、趨化、吞噬和殺菌四個(gè)方面。由于攻擊性化療和干細(xì)胞移植等治療手段在臨床的應(yīng)用，有近1/10的患者在治療過(guò)程中出現(xiàn)了骨髓抑制現(xiàn)象，導(dǎo)致患者粒細(xì)胞缺乏，從而引起嚴(yán)重的細(xì)菌或真菌感染[2]。按中性粒細(xì)胞絕對(duì)值可將中性粒細(xì)胞減少嚴(yán)重程度分為三級(jí)，輕度為中性粒細(xì)胞絕對(duì)值（1～2.0）×109/L，中度（0.5～1.0）×109/L，重度＜0.5×109/L。嚴(yán)重的中性粒細(xì)胞減少癥被認(rèn)為是中性粒細(xì)胞缺乏癥[3]?，F(xiàn)就本院移植科血液病患者化療后發(fā)生骨髓抑制導(dǎo)致粒細(xì)胞缺乏后，對(duì)捐獻(xiàn)者未動(dòng)員情況下粒細(xì)胞采集情況和輸注后效果進(jìn)行分析。

對(duì)象與方法

1 捐獻(xiàn)者篩選 捐獻(xiàn)者原則上應(yīng)符合國(guó)家規(guī)定的《獻(xiàn)血者健康檢查標(biāo)準(zhǔn)》：年齡18～55周歲 ；血壓舒張壓60～90 mmHg，收縮壓90～140 mmHg，脈壓差30 mmHg；體重：男≥50 kg，女≥45 kg；Hb：男≥120 g/L，女≥115 g/L；HCT≥0.36，WBC：（4.0～10.0）×109/L；ALT：男≤50 U，女≤45 U；HIV、HCV、TP、HBsAg陰性 。臨床急診需要經(jīng)主治醫(yī)生評(píng)估捐獻(xiàn)者身體狀況后，可適當(dāng)放寬捐獻(xiàn)者年齡要求，同時(shí)粒細(xì)胞采集要求ABO同型，并做交叉配血試驗(yàn)[4]。

2 粒細(xì)胞成品要求 中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)＞1×1010/L。

3 方法

3.1 血細(xì)胞分離機(jī)：COM.TEC德國(guó)費(fèi)森尤斯卡比（中國(guó)）投資有限公司，一次性管路耗材型號(hào)為P1YA，用于粒細(xì)胞采集。

3.2 全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀：日本Sysmex公司XS-800i型，用于粒細(xì)胞計(jì)數(shù)。

3.3 耗材：血液保存液（I）（ACD）（山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品股份有限公司）；輸血用氯化鈉注射液（石家莊四藥有限公司）；16～18 G采血穿刺針（貝朗醫(yī)療上海國(guó)際貿(mào)易有限公司）；葡萄糖酸鈣注射液10 ml（天津金輝藥業(yè)有限公司）；羥乙基淀粉（B. Braun Medical Inc.）。

4 一般資料 2014年5月至今本院移植科14例因化療引起粒細(xì)胞缺乏患者，男性7例，女性7例，年齡17～72歲。均為粒細(xì)胞缺乏達(dá)1周以上出現(xiàn)細(xì)菌或真菌感染、發(fā)燒等癥狀，并且其疾病本身未緩解，不能通過(guò)集落刺激因子使其粒細(xì)胞升高。

5 抗凝劑的使用 采集過(guò)程中將羥乙基淀粉和ACD進(jìn)行1∶1混合作為抗凝劑使用，同時(shí)提高抗凝劑的輸注比率。為使粒細(xì)胞和紅細(xì)胞更好的分離以提高粒細(xì)胞的采集效果，在采集過(guò)程中加入大分子量羥乙基淀粉沉淀紅細(xì)胞。

6 外周血粒細(xì)胞的采集方法 選擇COM.TEC 血細(xì)胞分離機(jī)中“autoMNC”程序，輸入“性別、身高、體重、采前紅細(xì)胞壓積及白細(xì)胞濃度，流速一般設(shè)定為50 ml/min，離心機(jī)轉(zhuǎn)速：1 200 r/ min?？鼓齽┡c全血比例為1∶6?？傃h(huán)血量根據(jù)抗凝劑和羥乙基淀粉的用量來(lái)決定，一般約為8 000 ml。在采集過(guò)程中手動(dòng)將管路從“泵出監(jiān)測(cè)器”中取出，選擇手動(dòng)收集，從淡粉色的細(xì)胞通過(guò)探測(cè)器開始收集，收集量定為10～12 ml。

結(jié) 果

14次采集粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均達(dá)到了1×1010/L的每次用量，根據(jù)患者輸注情況進(jìn)行病案調(diào)查發(fā)現(xiàn)，14例患者中12例的輸注是有效的。在輸注后3～7 d內(nèi)控制了感染，臨床表現(xiàn)為患者不再發(fā)熱和/或白細(xì)胞升高。輸注效果見(jiàn)表1。

表1 粒細(xì)胞輸注效果

討 論

研究表明中性粒細(xì)胞絕對(duì)值＜1.0×109/L時(shí)，患者感染機(jī)會(huì)中度增加；＜0.5×109/L時(shí)，顯著易感；＜0.1×109/L時(shí)，幾乎都有嚴(yán)重感染，且感染時(shí)不能產(chǎn)生正常的炎癥反應(yīng)，感染極易擴(kuò)散[5]。同時(shí)因?yàn)檠翰』颊叽嬖诿庖呷毕荩装l(fā)生敗血癥，且敗血癥難以控制，死亡率極高，所以對(duì)血液病患者來(lái)說(shuō)，改善粒細(xì)胞缺乏必須及時(shí)有效[6]。粒細(xì)胞輸注治療粒細(xì)胞缺乏在理論上是可行的，在提高患者粒細(xì)胞數(shù)量控制感染方面起到積極的作用。粒細(xì)胞輸注的時(shí)機(jī)：①粒細(xì)胞缺乏癥＜0.5×109/L，②伴有嚴(yán)重感染，③高級(jí)抗生素治療48 h無(wú)效。以上三種情況同時(shí)存在，一般不做預(yù)防性輸注[7]。

目前我國(guó)能夠進(jìn)行外周血粒細(xì)胞采集的血細(xì)胞分離機(jī)有多種，血細(xì)胞分離機(jī)收集袋在離心機(jī)外，能隨時(shí)觀察收集效果，調(diào)整采集參數(shù)手動(dòng)收集，因此操作者可觀察細(xì)胞濃縮情況，縮短或延長(zhǎng)每個(gè)循環(huán)的循環(huán)血容量、增加收集次數(shù)，以達(dá)到在相同循環(huán)總血容量的情況下收集更多產(chǎn)品。COM.TEC 血細(xì)胞分離機(jī)在白膜泵出階段是利用細(xì)胞探測(cè)器來(lái)控制白膜收集控制夾的打開與關(guān)閉。根據(jù)血細(xì)胞比重，開始探測(cè)到的細(xì)胞是血小板，然后是白細(xì)胞，白細(xì)胞中粒細(xì)胞比重最大，是和部分年輕紅細(xì)胞混雜在一起的。因此采用人工方法將探測(cè)器中的采血管路取出，當(dāng)白膜部分的血小板和淡粉色的細(xì)胞通過(guò)探測(cè)器，從剛見(jiàn)到紅色的細(xì)胞后開始收集，每循環(huán)收集10～12 ml。

文獻(xiàn)里提到一些采供血機(jī)構(gòu)在單采粒細(xì)胞過(guò)程中應(yīng)用G-CSF動(dòng)員獻(xiàn)血者骨髓儲(chǔ)存池和外周血邊緣池的粒細(xì)胞，促使其釋放，以便提高粒細(xì)胞的單采數(shù)量。使用G-CSF動(dòng)員獻(xiàn)血者，其產(chǎn)量能達(dá)到（10.3～14.4）×1010/L[8]。并且輸注濃縮粒細(xì)胞時(shí)，每天最小劑量應(yīng)為（2.0～3.0）×1010/L，不能＜1×1010/L[9]。

我院采集的這14例粒細(xì)胞都未做動(dòng)員，主要原因：一是粒細(xì)胞在機(jī)體內(nèi)約10 h就會(huì)代謝掉；二是一些捐獻(xiàn)者不愿使用集落刺激因子，同時(shí)考慮到捐獻(xiàn)者白細(xì)胞的突然升高有毛細(xì)血管堵塞的危險(xiǎn)；三是捐獻(xiàn)者產(chǎn)生的干細(xì)胞對(duì)患者來(lái)說(shuō)影響其療效；四是通過(guò)集落刺激因子產(chǎn)生的粒細(xì)胞，其功能是否與正常外周血中的粒細(xì)胞相同是不可知因素；五是過(guò)多的粒細(xì)胞輸入易產(chǎn)生同種抗體、肺浸潤(rùn)和呼吸衰竭。

總之通過(guò)本院移植科采集、輸注的14例粒細(xì)胞來(lái)看，在不動(dòng)員情況下采集的粒細(xì)胞完全可以支持血液病患者化療后骨髓抑制期的抗感染作用。同時(shí)非動(dòng)員的粒細(xì)胞采集對(duì)操作提出了更高要求，為確保一次采集的粒細(xì)胞數(shù)量能夠滿足最小輸注劑量，離心機(jī)最佳的離心速度應(yīng)在1 200 r/ min，通過(guò)手工操作在粉紅色細(xì)胞通過(guò)探測(cè)器后立即收集，每1個(gè)循環(huán)收集10～12 ml，雖然這樣可能會(huì)收集更多的紅細(xì)胞，但確保了粒細(xì)胞的收集效率，縮短了總循環(huán)量和采集時(shí)間，使捐獻(xiàn)者能夠耐受。

1 許文榮，王建中，主編.臨床血液學(xué)檢驗(yàn)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：192.

2 Thomas H. Price. Granulocyte Transfusion Therapy[J]. Journal of Clinical Apheresis，2006，21（1）：65-71.

3 張覓，程虹，劉巍，等.非化療藥物引起的粒細(xì)胞缺乏及其干預(yù)[J]. 藥物流行病學(xué)雜志，2015，24（4）：246.

4 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.血站計(jì)術(shù)操作規(guī)程[S].衛(wèi)醫(yī)發(fā)（2015）95號(hào).

5 寧小毅，李橋川.血液病患者142例院內(nèi)感染敗血癥的臨床分析[J].廣西醫(yī)學(xué)雜志，2014，36（4）：442.

6 戴自英，主編. 實(shí)用內(nèi)科學(xué)[M]. 第8版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996：1700-1701.

7 張之南，郝玉書，主編.血液病學(xué)[M].第2版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2014：551.

8 Caspar CB，Reinhard AS，Burger J，et al. Effective stimulation of donors for granulocyte transfusions with recombinant methionine granulocyte colony stimulating factor[J]. Blood，1993，81（11）：2866.

9 陳會(huì)友，田兆嵩.單采濃縮粒細(xì)胞的臨床應(yīng)用[J]. 中國(guó)輸血雜志，2002，15（6）：437-441.

The Effect of Allo-donor Granulocyte Collection and Transfusion in the Case of Non Mobilization

XU Li-juan，HAN Li-xia，ZHAO Xin-xin，et al.
The 307th Hospital of Chinese People's Liberation Army 100071

Granulocyte Agranulocytosis Infection Chemotherapy Arrest of bone marrow

R331.1+42 R457.1

A

1671-2587（2017）02-0110-04

2016-11-30）

（本文編輯：王虹）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.02.003

100071 北京，解放軍第307醫(yī)院輸血科

徐麗娟（1972–），女，天津人，主管技師，碩士，主要從事單采治療工作，（E-mail）xuziwen047com@sina.com。

駱群，副主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，（Tel）010-66947206。

【Abstract】 Objective To understand the effect of donor granulocyte collection and transfusion in the case of non mobilization，whether it is able to support the anti infection treatment of bone marrow suppression in patients with hematological diseases undergoing chemotherapy. Methods The peripheral blood by using COM.TEC blood cell separator was used to collect neutral granulocyte of 14 donors from peripheral blood.,Donor granulocytes were infused to hematological disease patients with bone marrow suppression after chemotherapy.Thenblood cell counts and body temperature were observed after the infusion. The blood cell counter was used to count number of cells in product. Results The granulocyte count can reach 1×1010/L in the product, but it is much lower than （10.3～14.4）×1010/L after the mobilization of the colony stimulating factor (G-CSF) which is mentioned in the literature. But efficient rate of hematological disease patients with agranulocytosis reached 85.7% after infusion.Conclusion Non mobilization of donor granulocyte acquisition can support the patient's anti infection treatment.