• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    冷鮮雞污染微生物磺胺類和喹諾酮類耐藥基因分析

    2017-04-26 02:38:46何祥祥戴寶玲夏效東肖英平
    關(guān)鍵詞:磺胺類白痢喹諾酮

    何祥祥,楊 華,戴寶玲,夏效東,肖英平,*

    (1.西北農(nóng)林科技大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,陜西 楊凌 712100; 2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所,浙江 杭州 310021; 3.浙江省植物有害生物防控省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地,浙江 杭州 310021)

    冷鮮雞污染微生物磺胺類和喹諾酮類耐藥基因分析

    何祥祥1,2,3,楊 華2,3,戴寶玲2,3,夏效東1,肖英平2,3,*

    (1.西北農(nóng)林科技大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院,陜西 楊凌 712100; 2.浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究所,浙江 杭州 310021; 3.浙江省植物有害生物防控省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地,浙江 杭州 310021)

    動(dòng)物養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展過程中抗生素的長(zhǎng)期使用,導(dǎo)致耐藥菌的快速發(fā)展。這些耐藥菌在動(dòng)物養(yǎng)殖過程中逐漸被抗生素篩選,在動(dòng)物性食品生產(chǎn)鏈中容易被攜帶傳播,對(duì)人類食品安全產(chǎn)生很大的威脅。試驗(yàn)選取浙江省紹興市8個(gè)大型超市和11個(gè)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)銷售的冷鮮雞為檢測(cè)對(duì)象,采用PCR和測(cè)序驗(yàn)證的技術(shù)手段,對(duì)冷鮮雞表面微生物中的2種磺胺類耐藥基因sulⅠ、sulⅡ和8種喹諾酮類基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、oqxA與oqxB進(jìn)行檢測(cè)。在所檢測(cè)的樣品中,檢測(cè)出sulⅠ、sulⅡ、qnrD、qnrS、qepA和oqxB基因,檢出率分別為100%、100%、100%、89.5%、100%和89.5%。并對(duì)所檢出的耐藥基因進(jìn)行測(cè)序和NCBI收錄的耐藥基因序列進(jìn)行Blast比對(duì)驗(yàn)證,比對(duì)結(jié)果同源性分別為100%、99.44%、100%、92.74%、99.82%和100%。試驗(yàn)結(jié)果將為冷鮮雞中耐藥基因的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供有力支持。

    冷鮮雞;細(xì)菌;磺胺類;喹諾酮類;耐藥基因

    目前國(guó)內(nèi)多數(shù)城市如上海、北京和杭州已經(jīng)全面禁止活禽買賣交易[1],冷鮮雞因其肉質(zhì)純熟,適合烹飪和口味鮮美的特點(diǎn)代替了“活殺雞”走向百姓的餐桌[2]。然而,在禽類養(yǎng)殖中抗生素的普遍使用引起了人們較大的關(guān)注[3-6]??咕幬镌跉W洲[7-8]和北美[9]已經(jīng)被廣泛使用了近半個(gè)世紀(jì),在提高肉制品產(chǎn)量的同時(shí)也導(dǎo)致了細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生[10-11]。例如Yildirim等[12]在200份零售的冷鮮雞中分離出68株沙門氏菌,通過對(duì)耐藥基因的檢測(cè),這些沙門氏菌對(duì)青霉素、苯唑西林、克林霉素、萬古霉素、紅霉素和氨芐西林等抗生素具有不同程度的耐藥性,同時(shí)也有半數(shù)以上的沙門氏菌對(duì)四環(huán)素、鏈霉素、新霉素和頭孢霉素產(chǎn)生耐藥性。動(dòng)物性食品中耐藥性基因的出現(xiàn)引起了人們的極大關(guān)注,因?yàn)槟退幮曰蚴峭ㄟ^可移動(dòng)的介質(zhì)比如質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子或染色體[13-14]來傳播,另外抗生素耐藥基因也可以在細(xì)菌之間相互傳播[15]。冷鮮雞在從養(yǎng)殖到宰殺、運(yùn)輸儲(chǔ)藏再到消費(fèi)者餐桌上[16-17]的過程的產(chǎn)業(yè)鏈中也會(huì)攜帶大量的耐藥細(xì)菌,對(duì)食品安全和人們的健康將產(chǎn)生很大的威脅[18]。

    本試驗(yàn)從浙江紹興市19個(gè)不同的農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)和超市分別采冷鮮雞,然后通過直接提取表面微生物的DNA,通過PCR擴(kuò)增耐藥基因的方法,檢測(cè)總細(xì)菌的耐藥性。試驗(yàn)結(jié)果將為冷鮮雞表面微生物的耐藥監(jiān)測(cè)提供有力依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    1.1.1 樣品來源

    19只冷鮮雞樣品于2016年8月6日采自浙江省紹興市的8個(gè)大型超市和11個(gè)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng),編號(hào)為1~19。

    1.1.2 儀器與試劑

    PCR擴(kuò)增儀(美國(guó)bio-rad公司),凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)bio-rad公司),微量核酸蛋白分析儀(Thermo Fisher公司)。BPW培養(yǎng)基(杭州微生物試劑有限公司),微生物基因組DNA提取試劑盒(Zymo Research Fungal/Bacterial DNA MiniPrepTM)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 樣品處理

    將從市場(chǎng)上采集來的冷鮮雞放置于無菌袋中,按照每500 g冷鮮雞加入500 mLBPW沖洗液,密封后于搖床上振蕩(200 r·min-1)15~20 min,然后取50 mL沖洗下來的BPW溶液于37 ℃烘箱,培養(yǎng)12 h。

    1.2.2 基因組DNA提取

    將增菌后的BPW沖洗液按照微生物基因組DNA提取試劑盒(Zymo Research Fungal/Bacterial DNA MiniPrepTM)說明書,提取總細(xì)菌DNA。然后用微量核酸蛋白質(zhì)分析儀(Nanodrop)對(duì)所提取的DNA進(jìn)行含量和純度(D260/D280)的測(cè)定。

    1.2.3 耐藥基因的PCR擴(kuò)增

    本試驗(yàn)從磺胺類和喹諾酮類耐藥基因中共選取了10種耐藥基因,其中包括2種磺胺類基因(sulⅠ、sulⅡ)和8種喹諾酮類基因(qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、oqxA和oqxB)。所用引物參照文獻(xiàn)[19],見表1。PCR擴(kuò)增反應(yīng)程序?yàn)?5 ℃,5 min預(yù)變性,然后94 ℃,30 s,58 ℃,30 s;72 ℃,1 min,共32個(gè)循環(huán);最后16 ℃保存。擴(kuò)增反應(yīng)后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳并成像。

    表1 PCR反應(yīng)引物

    Table 1 PCR primers used in this study

    目的基因Targetgene引物序列(5’-3’)Primersequence產(chǎn)物長(zhǎng)度Length/bpsulⅠF:CGCACCGGAAACATCGCTGCACR:TGAAGTTCCGCCGCAAGGCTCG163sulⅡF:TCCGGTGGAGGCCGGTATCTGGR:CGGGAATGCCATCTGCCTTGAG191qnrAF:AGAGGATTTCTCACGCCAGGR:TGCCAGGCACAGATCTTGAC580qnrBF:GGATGAAATTCGCCACTGR:TTTGCGCGCCAGTCGAA264qnrCF:GGGTTGTACATTTATT-GAATCGR:CACCTACCCATTTATTTTCA307qnrDF:CGAGATCAATTTACGGGGAA-TAR:AACAAGCTGAAGCGCCTG465qnrSF:GCAAGTTCATTGAACAGGGTR:TCTAAACCGTCGAGTTCGGCG428qepAF:CCAGCTCGGCAACTTGATACR:ATGCTCGCCTTCCAGAAAA570oqxAF:CTCGGCGCGATGATGCTR:CCACTCTTCACGGGAGACGA392oqxBF:TCCTGATCTCCATTAACGCCCAR:ACCGGAACCCATCTCGATGC131

    1.2.4 檢出耐藥基因的測(cè)序和序列比對(duì)

    將目的條帶割膠后送至杭州浩基生物公司,對(duì)PCR產(chǎn)物切膠回收,加尾后和pGM-Simple-T Fast Vector進(jìn)行連接,轉(zhuǎn)化到感受態(tài)細(xì)胞DH5α,篩選陽(yáng)性克隆進(jìn)行測(cè)序。將返回的測(cè)序結(jié)果通過NCBI網(wǎng)站(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast)比對(duì)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 基因組DNA提取和耐藥基因檢測(cè)結(jié)果

    通過對(duì)浙江省某市超市和農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)上共19只冷鮮雞的表面微生物提取總DNA如圖1,然后以總DNA為模板,對(duì)10種耐藥基因的檢測(cè),共檢測(cè)出6種耐藥基因如表2和圖2。其中包括2種磺胺類耐藥基因(sulⅠ、sulⅡ)和4種喹諾酮類耐藥基因(qnrD、qnrS、qepA、oqxB)。

    2.2 被檢出的耐藥基因測(cè)序比對(duì)結(jié)果

    將測(cè)序結(jié)果使用NCBI網(wǎng)站(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast)的BLAST進(jìn)行序列同源性比對(duì),發(fā)現(xiàn)檢測(cè)到的耐藥基因PCR產(chǎn)物與以往文獻(xiàn)報(bào)道的耐藥基因有較高的同源性。在BLAST中進(jìn)行的序列比對(duì)同源性結(jié)果如表3。

    M,DNA Marker(DL5000); 1~8分別為來自大型超市的樣品M, DNA ladder; 1-8, Samples from supermarkets圖1 基因組DNA電泳圖Fig.1 Electrophoretic results of genome DNA

    表2 耐藥基因的PCR檢測(cè)結(jié)果

    Table 2 The PCR results of antibiotic genes

    耐藥基因Drugresistancegene檢出率Detectionrate/%超市樣品Samplesfromsupermarket農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)樣品Samplesfromfarmersmarket磺胺類sulⅠ100100SulfonamidessulⅡ100100喹諾酮類qnrA00QuinolonesqnrB00qnrC00qnrD100100qnrS10081.8qepA100100oqxA00oqxB87.590.9

    M: DNA marker(DL5000); 1~8:來自大型超市的樣品M: DNA ladder; 1-8: Samples from supermarkets圖2 耐藥基因電泳結(jié)果Fig.2 Electrophoretic results of antibiotic resistance gene

    表3 耐藥基因序列同源性比對(duì)結(jié)果

    Table 3 The results of antibiotic resistance gene sequences comparing to ones who have been deposited into the GenBank

    耐藥基因DrugresistancegeneNCBI中基因序列號(hào)AccessionnumberinGenBank相似度Similarity/%sulⅠJN003421100sulⅡHQ44116999.44qnrDHM056769100qnrSHQ64066192.74qepAFJ74412199.82oqxBHQ674771100

    3 結(jié)論與討論

    由于抗生素的大量使用,導(dǎo)致家禽養(yǎng)殖中細(xì)菌耐藥性的提高。岳磊等[20]對(duì)廣東地區(qū)分離得到的84株雞源腸桿菌進(jìn)行藥敏檢測(cè),結(jié)果表明,這些雞源腸桿菌對(duì)氟羅沙星(98.8%),恩諾沙星(84.5%)等喹諾酮類抗生素產(chǎn)生不同程度的抗性?;前奉愃幬镌诩仪蒺B(yǎng)殖中,主要被用來治療和預(yù)防雞白痢。然而近些年的廣泛使用,逐漸造成雞白痢沙門氏菌對(duì)磺胺類藥物的耐藥性[21]。董洪燕等[22]對(duì)江蘇東臺(tái)地區(qū)分離得到的33株雞白痢沙門氏菌檢測(cè),94.4%的菌株含有耐藥基因sulⅠ。寧家寶等[23]對(duì)珠江三角洲地區(qū)分離到的69株雞白痢沙門氏菌進(jìn)行檢測(cè),其中sulⅠ和sulⅡ基因的檢出率分別為33.3%和79.7%。

    本試驗(yàn)所選取的2個(gè)磺胺類耐藥基因和8個(gè)喹諾酮類耐藥基因,具有一定的代表性。這些耐藥基因在家禽類的養(yǎng)殖中較為常見,對(duì)于細(xì)菌耐藥基因在環(huán)境中的傳播、擴(kuò)散具有一定的指示作用。本試驗(yàn)沒有采用細(xì)菌的分離培養(yǎng)的方法,而是直接對(duì)冷鮮雞表面總細(xì)菌進(jìn)行DNA的提取,對(duì)具有代表性的磺胺類和喹諾酮類耐藥基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增和電泳,共有6種基因被檢測(cè)出來,經(jīng)過序列比對(duì)后,所檢出的基因相似度均在92.74%以上,說明檢測(cè)結(jié)果可靠。其中包括2種磺胺類耐藥基因(sulⅠ、sulⅡ)和3種喹諾酮類耐藥基因(qnrS、qnrD、qepA、oqxB)。從電泳圖中亮度可以看出,sulⅠ、sulⅡ、qnrD、qnrS和oqxB基因在樣本間的差異不大,qepA在樣品間的差異較大。這可能與樣品采自不同市場(chǎng)有關(guān)。而其他5個(gè)喹諾酮類耐藥基因(qnrA、qnrB、qnrC、oqxA、oqxB)均未檢出。

    細(xì)菌的耐藥性與耐藥基因產(chǎn)生的關(guān)系。微生物的耐藥基因的產(chǎn)生一方面來源于微生物固有的耐藥基因,另一方面來源于自身基因突變或通過微生物之間的的接合、轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)等相互作用而獲得[24-25]。細(xì)菌的抗生素耐藥基因主要有三種作用機(jī)制,第一種是通過產(chǎn)生抗生素的水解酶,使抗生素失去活性或分解。比如aac(6’)-Ib-cr可以編碼滅活酶,使喹諾酮類抗生素滅活而失去活性[26]。第二種是通過改變抗生素作用的靶點(diǎn),降低抗生素與細(xì)菌的結(jié)合能力,這種方式比較普遍。比如四環(huán)素耐藥基因tetM、tetW、tetO、tetQ介導(dǎo)的耐藥機(jī)制就是通過產(chǎn)生的核糖體保護(hù)蛋白,抑制核糖體與四環(huán)素的相互作用[27]。第三種機(jī)制是通過改變細(xì)菌膜的通透性而形成藥物外排系統(tǒng),將藥物外排,使得菌體內(nèi)抗生素達(dá)不到有效作用濃度。比如tetC等基因介導(dǎo)的耐藥機(jī)制[27]。

    綜合本試驗(yàn)對(duì)磺胺類和喹諾酮類耐藥基因的檢測(cè)結(jié)果,可以得出家禽養(yǎng)殖場(chǎng)的耐藥基因可能會(huì)通過微生物攜帶到冷鮮雞的表面,對(duì)消費(fèi)者的健康會(huì)產(chǎn)生一定的影響。另一方面,養(yǎng)殖場(chǎng)抗生素殘留和耐藥基因產(chǎn)生的相關(guān)性有待進(jìn)一步研究,這對(duì)于分析耐藥基因的產(chǎn)生是由于自然因素還是人為因素導(dǎo)致的,意義重大。

    [1] 胡衛(wèi)中, 周自明. 消費(fèi)者對(duì)冷鮮雞支付意愿的影響因素研究[J]. 中國(guó)畜牧雜志, 2016, 52(4):48-51. HU W Z, ZHOU Z M. Factors influencing consumer’s willingness to pay for chilled chicken[J].ChineseJournalofAnimalScience, 2016, 52(4):48-51. (in Chinese with English abstract)

    [2] 范京輝, 張永華. 冷鮮雞的質(zhì)量要求及其影響因素[J]. 杭州農(nóng)業(yè)與科技, 2014(3):23-25. FAN J H, ZHANG Y H. Chilled chicken quality and its influencing factors[J].HangzhouAgriculturalScienceandTechnology, 2014(3):23-25. (in Chinese)

    [3] TEUBER M. Spread of antibiotic resistance with food-borne pathogens [J].Cellular&MolecularLifeSciences, 1999, 56(9/10): 755-763.

    [4] SCHWARZ S, KEHRENBERG C, WALSH T R. Use of antimicrobial agents in veterinary medicine and food animal production [J].InternationalJournalofAntimicrobialAgents, 2001, 17(6): 431-437.

    [5] NORMARK B H, NORMARK S. Evolution and spread of antibiotic resistance [J].JournalofInternalMedicine, 2002, 252(2): 91-106.

    [6] TURNIDGE J. Antibiotic use in animals—prejudices, perceptions and realities [J].JournalofAntimicrobialChemotherapy, 2004, 53(1): 26-27.

    [7] WEGENER H C, AARESTRUP F M, JENSEN L B, et al. Use of antimicrobial growth promoters in food animals andEnterococcusfaeciumresistance to therapeutic antimicrobial drugs in Europe[J].EmergingInfectiousDiseases, 1999, 5(3): 329-335.

    [8] DRITZ S S, TOKACH M D, GOODBAND R D, et al. Effects of administration of antimicrobials in feed on growth rate and feed efficiency of pigs in multisite production systems[J].JournaloftheAmericanVeterinaryMedicalAssociation, 2002, 220(11): 1690-1695.

    [9] National Research Council. The use of drugs in food animals, benefits and risks[M]. Washington DC: National Academy Press, 1999.

    [10] PHILLIPS I, CASEWELL M, COX T, et al. Does the use of antibiotics in food animals pose a risk to human health? A critical review of published data[J].JournalofAntimicrobialChemotherapy, 2004, 53(1): 28-52.

    [11] LU K, ASANO R, DAVIES J. Antimicrobial resistance gene delivery in animal feeds[J].EmergingInfectiousDiseases, 2004, 10(4): 679-683.

    [12] YILDIRIM Y, GONULALAN Z, PAMUK S, et al. Incidence and antibiotic resistance ofSalmonellaspp. on raw chicken carcasses[J].FoodResearchInternational, 2011, 44(3):725-728.

    [13] SALYERS A A, SHOEMAKER N B, STEVENS A M, et al. Conjugative transposons: an unusual and diverse set of integrated gene transfer elements[J].MicrobiologicalReviews, 1995, 59(4): 579-590.

    [14] ROWE-MAGNUS D A, GUEROUT A M, PLONCARD P, et al. The evolutionary history of chromosomal super-integrons provide sanancestry for multiresistant integrons[J].ProceedingsoftheNationalAcademyofSciencesoftheUnitedStatesofAmerica, 2001, 98(2): 652-657.

    [15] TEALE C J. Antimicrobial resistance and the food chain[J].JournalofAppliedMicrobiology, 2002, 92(S1): 85-89.

    [16] HAYES J R, ENGLISH L L, CARTER P J, et al. Prevalence and antimicrobial resistance ofEnterococcusspecies isolated from retail meats[J].Applied&EnvironmentalMicrobiology, 2003, 69(12): 7153-7160.

    [17] FRANZ C M, STILES M E, SCHLEIFER K H, et al. Enterococci in food-a conundrum for food safety[J].InternationalJournalofFoodMicrobiology, 2003, 88(2/3): 105-122.

    [18] DONABEDIAN S M, THAL L A, HERSHBERGER E, et al. Molecular characterization of gentamicin-resistant enterococci in the United States: evidence of spread from animals to humans through food[J].JournalofClinicalMicrobiology, 2003, 41(3): 1109-1113.

    [19] 李娟.養(yǎng)豬場(chǎng)廢水、周邊土壤中抗生素及耐藥基因污染狀況的研究[D]. 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué),2012. LI J. The levels of pollution about antibiotic residues and antibiotic resistance genes(ARGs) in swine feedlot wastewater and surrounding lands[D]. Beijing: China Agricultural University, 2012.

    [20] 岳磊, 蔣紅霞, 劉健華,等. 雞源腸桿菌質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類耐藥基因檢測(cè)[J]. 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué), 2009, 42(8):2966-2971. YUE L, JIANG H X, LIU J H, et al. Detection of plasmid-mediated quinolone resistance in clinical isolates of enterobacteriaceae from avian[J].ScientiaAgriculturaSinica, 2009, 42(8):2966-2971. (in Chinese with English abstract)

    [21] 潘志明, 焦新安, 劉學(xué)賢,等. 雞白痢沙門氏菌耐藥性的變化趨勢(shì)[J]. 中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào), 1999(4):305-307. PAN Z M, JIAO X A, LIU X X, et al. Changes of drug resistance of salmonella pullorum[J].ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicine, 1999(4):305-307. (in Chinese with English abstract)

    [22] 董洪燕, 繆曉斌, 李鑫,等. 雞白痢沙門菌分離株的耐藥性及磺胺類耐藥機(jī)制研究[J]. 中國(guó)家禽, 2010, 32(9):29-33. DONG H Y, MIU X B, LI X, et al. Drug resistance pattern ofSalmonellapullorumisolates and mechanism of sulfonamides resistance[J].ChinaPoultry, 2010, 32(9):29-33. (in Chinese with English abstract)

    [23] 寧家寶, 陳建紅, 張濟(jì)培,等. 雞白痢沙門菌的耐藥性及磺胺類耐藥基因的研究[J]. 中國(guó)家禽, 2014, 36(3):18-20. NING J B, CHEN J H, ZHANG J P, et al. Drug resistance pattern and resistance genes for sulfonamides ofSalmonellapullorum[J].ChinaPoultry, 2014, 36(3):18-20. (in Chinese with English abstract)

    [24] CHOPRA I, ROBERTS M. Tetracycline antibiotics: mode of action, applications, molecular biology, and epidemiology of bacterial resistance[J].Microbiology&MolecularBiologyReviews, 2001,65(2):232-260.

    [25] ZHANG X X, ZHANG T, FANG H H P. Antibiotic resistance genes in water environment[J].AppliedMicrobiologyandBiotechnology, 2009, 82(3):397-414.

    [26] ROBICSEK A, STRAHILEVITZ J, JACOBY G A, et al. Fluoroquinolone-modifying enzyme: a new adaptation of a common aminoglycoside acetyltransferase[J].NatureMedicine, 2006, 12(1):83-88.

    [27] DE WASCH K, OKERMAN L, CROUBELS S, et al. Detection of residues of tetracycline antibiotics in pork and chicken meat: correlation between results of screening and confirmatory tests [J].Analyst, 1998, 123(12):2737-2741.

    (責(zé)任編輯 張 韻)

    Detection of the antibiotic genes of sulfonamides and quinolones of bacteria in refrigerated chicken

    HE Xiangxiang1,2,3, YANG Hua2,3, DAI Baoling2,3, XIA Xiaodong1, XIAO Yingping2,3,*

    (1.CollegeofFoodScienceandEngineering,NorthwestA&FUniversity,Yangling712100,China;2.InstituteofQualityandStandardforAgro-products,ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences,Hangzhou310021,China;3.StateKeyLaboratoryBreedingBaseforZhejiangSustainablePestandDiseaseControl,ZhejiangAcademyofAgriculturalSciences,Hangzhou310021,China)

    The long-term use of antibiotics in the animal farming industry has caused rapid expansion of drug resistant bacteria. These drug resistant bacteria are screened during the process of animal farming, and are easily transmitted in the animal production chain, which is a huge threat to human’s food safety. In this study, we aimed at testing the safety of refrigerated chicken collected from eight supermarkets and eleven agricultural markets in Shaoxing city, Zhejiang Province. We detected the antibiotic genes of sulfonamides and quinolones of surface microorganisms of the samples by PCR reaction and sequencing. We detectedsulⅠ,sulⅡ,qnrD,qnrS,qepAandoqxBin the samples and the detection rate was 100%, 100%, 100%, 89.5%, 100% and 89.5%, respectively. We also sequenced the antibiotic genes with the sequences in NCBI and the coincidence rate was 100%, 99.44%, 100%, 92.74%, 99.82% and 100%, respectively. This study will provide effective support for risk assessment of antibiotic genes in the refrigerated chicken.

    refrigerated chicken; bacteria; sulfonamides; quinolones; drug-resistance genes

    http://www.zjnyxb.cn何祥祥,楊華,戴寶玲,等. 冷鮮雞污染微生物磺胺類和喹諾酮類耐藥基因分析[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2017,29(4): 555-559.

    10.3969/j.issn.1004-1524.2017.04.06

    2016-11-07

    浙江省公益技術(shù)運(yùn)用研究項(xiàng)目(2016C32073);浙江省植物有害生物防控重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室——省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地(2010DS700124-ZM1608)

    何祥祥(1991—),男,河南洛陽(yáng)人,碩士研究生,研究方向?yàn)槭称房茖W(xué)。E-mail:xianghe2009@126.com

    *通信作者,肖英平,E-mail: ypxiaozju@126.com

    S879.2

    A

    1004-1524(2017)04-0555-05

    浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)ActaAgriculturaeZhejiangensis, 2017,29(4): 555-559

    猜你喜歡
    磺胺類白痢喹諾酮
    雞磺胺類藥物中毒的原因、臨床表現(xiàn)、診斷和防治措施
    關(guān)注氟喹諾酮類藥品的嚴(yán)重不良反應(yīng)
    雞白痢的防控
    廣東飼料(2016年6期)2016-12-01 03:43:30
    無氟喹諾酮類抗菌藥研究進(jìn)展
    無氟喹諾酮:奈諾沙星
    雛雞白痢的診斷與防治
    一起仔豬黃白痢的治療與預(yù)防
    仔豬黃白痢防治初探
    氟喹諾酮類藥物臨床常見不良反應(yīng)觀察
    雛雞磺胺類藥物中毒的診治
    九九爱精品视频在线观看| eeuss影院久久| 美女国产视频在线观看| 欧美另类一区| 国模一区二区三区四区视频| 性色av一级| 人妻 亚洲 视频| 熟女电影av网| 亚洲成人中文字幕在线播放| 搡老乐熟女国产| 大香蕉97超碰在线| 亚洲国产精品国产精品| 可以在线观看毛片的网站| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产一区二区三区av在线| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | .国产精品久久| 日本免费在线观看一区| 成人亚洲精品一区在线观看 | 国产免费视频播放在线视频| 欧美日本视频| 赤兔流量卡办理| 国产午夜精品一二区理论片| 精品一区二区三区视频在线| 久久6这里有精品| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| av免费在线看不卡| 嫩草影院精品99| 免费观看性生交大片5| 一级毛片电影观看| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲国产精品专区欧美| 精品久久国产蜜桃| 亚洲综合色惰| 精品一区二区免费观看| 日韩av免费高清视频| 一级片'在线观看视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 亚洲国产最新在线播放| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 少妇 在线观看| 久久久久九九精品影院| 毛片一级片免费看久久久久| 亚洲国产精品成人综合色| a级毛片免费高清观看在线播放| 国产黄a三级三级三级人| 一边亲一边摸免费视频| 国产成人91sexporn| 久久精品国产自在天天线| 日韩三级伦理在线观看| 日本爱情动作片www.在线观看| 日本欧美国产在线视频| av女优亚洲男人天堂| 成年免费大片在线观看| 97在线人人人人妻| 91狼人影院| 免费av观看视频| 国产高清不卡午夜福利| 男女啪啪激烈高潮av片| 一区二区三区精品91| 少妇丰满av| 精品久久久久久久久av| 日日摸夜夜添夜夜爱| 人妻少妇偷人精品九色| 免费黄网站久久成人精品| 午夜免费男女啪啪视频观看| 亚洲第一区二区三区不卡| 欧美最新免费一区二区三区| av网站免费在线观看视频| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 婷婷色综合大香蕉| 亚洲av免费在线观看| eeuss影院久久| 又大又黄又爽视频免费| 99久久精品热视频| 国产成人免费观看mmmm| 日韩三级伦理在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 亚洲精品色激情综合| 高清日韩中文字幕在线| 亚洲国产av新网站| av播播在线观看一区| 亚洲第一区二区三区不卡| 白带黄色成豆腐渣| 免费av不卡在线播放| 免费观看在线日韩| 国产精品一区二区性色av| 亚洲最大成人中文| 人人妻人人看人人澡| 看免费成人av毛片| .国产精品久久| 亚洲av.av天堂| 亚洲综合精品二区| 最近最新中文字幕大全电影3| 精品熟女少妇av免费看| 精品午夜福利在线看| 色婷婷久久久亚洲欧美| 男女无遮挡免费网站观看| 日韩欧美 国产精品| 亚洲欧洲日产国产| 亚洲精品日本国产第一区| 日韩电影二区| freevideosex欧美| 免费大片18禁| 亚洲精品456在线播放app| 国产成人精品福利久久| 亚洲欧洲国产日韩| 亚洲综合精品二区| 精品一区二区三卡| 精品人妻偷拍中文字幕| 激情 狠狠 欧美| 热re99久久精品国产66热6| 看免费成人av毛片| 免费av毛片视频| 春色校园在线视频观看| 国产成人精品一,二区| 国内精品美女久久久久久| 九色成人免费人妻av| 99热6这里只有精品| 欧美人与善性xxx| 婷婷色综合大香蕉| av国产久精品久网站免费入址| 日本一本二区三区精品| 亚洲精品aⅴ在线观看| 国产av不卡久久| 亚洲成人久久爱视频| 男女那种视频在线观看| 国产探花极品一区二区| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 毛片女人毛片| 久热这里只有精品99| 免费看a级黄色片| 欧美激情在线99| 久久久久久久久久久丰满| av.在线天堂| 一边亲一边摸免费视频| 青春草国产在线视频| 天天一区二区日本电影三级| 国产 一区精品| 亚洲av成人精品一二三区| 精品久久久精品久久久| 成人综合一区亚洲| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 校园人妻丝袜中文字幕| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 成年女人看的毛片在线观看| 黑人高潮一二区| 插阴视频在线观看视频| 国产v大片淫在线免费观看| 中文资源天堂在线| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 草草在线视频免费看| 亚洲自偷自拍三级| av在线亚洲专区| 男女那种视频在线观看| 99久久九九国产精品国产免费| av网站免费在线观看视频| 国产黄频视频在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 日韩一区二区三区影片| 人人妻人人看人人澡| 欧美精品一区二区大全| 精品国产三级普通话版| 啦啦啦在线观看免费高清www| 久久97久久精品| 99久久精品国产国产毛片| 国产美女午夜福利| 国产高清三级在线| 久久久欧美国产精品| 亚洲欧美成人精品一区二区| av天堂中文字幕网| 永久网站在线| 一本色道久久久久久精品综合| 一级毛片我不卡| 亚洲精品一区蜜桃| 色综合色国产| 午夜日本视频在线| 日本黄大片高清| 国产一区二区在线观看日韩| 国产男女内射视频| 国产精品熟女久久久久浪| 国产视频内射| 看黄色毛片网站| 91久久精品电影网| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 偷拍熟女少妇极品色| 大码成人一级视频| 免费观看无遮挡的男女| 成人无遮挡网站| 国内精品宾馆在线| 久久久久久久久久久丰满| 秋霞伦理黄片| 伊人久久精品亚洲午夜| 精品视频人人做人人爽| 久热这里只有精品99| 久久久久久久久久人人人人人人| kizo精华| 国产爱豆传媒在线观看| 日韩中字成人| 亚洲成人中文字幕在线播放| 99久久精品热视频| 深爱激情五月婷婷| 一级黄片播放器| 91狼人影院| 欧美精品一区二区大全| 一区二区av电影网| 久久精品久久精品一区二区三区| 成年免费大片在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 精品熟女少妇av免费看| 美女主播在线视频| 久久久久久久午夜电影| 天天躁日日操中文字幕| 欧美 日韩 精品 国产| av在线亚洲专区| 午夜福利高清视频| av免费在线看不卡| 色播亚洲综合网| 成人二区视频| 男女无遮挡免费网站观看| 久久久亚洲精品成人影院| 超碰av人人做人人爽久久| 国产综合懂色| 亚洲成人精品中文字幕电影| 好男人在线观看高清免费视频| 久久久久国产网址| 国产成人福利小说| 亚洲av在线观看美女高潮| 亚洲精品亚洲一区二区| 六月丁香七月| 免费看不卡的av| 亚洲国产精品专区欧美| 三级国产精品片| 免费观看av网站的网址| 观看美女的网站| 日韩电影二区| 亚洲美女视频黄频| 人妻少妇偷人精品九色| 成人亚洲欧美一区二区av| 国产精品精品国产色婷婷| 高清在线视频一区二区三区| 免费高清在线观看视频在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国产成人福利小说| 国产乱人偷精品视频| 国产黄频视频在线观看| 在线 av 中文字幕| 99久久九九国产精品国产免费| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲天堂国产精品一区在线| av播播在线观看一区| 久久久久网色| 三级经典国产精品| 久久ye,这里只有精品| 日本一本二区三区精品| eeuss影院久久| 亚洲精品成人av观看孕妇| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 天堂网av新在线| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 精品久久久久久电影网| 国产淫片久久久久久久久| 亚洲成色77777| 一级毛片久久久久久久久女| 欧美潮喷喷水| 亚洲欧洲国产日韩| 久久精品久久久久久久性| 中文字幕亚洲精品专区| 亚洲精品日韩在线中文字幕| 99久久精品国产国产毛片| 五月开心婷婷网| 成人漫画全彩无遮挡| 真实男女啪啪啪动态图| 国产一区二区在线观看日韩| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 午夜福利网站1000一区二区三区| 好男人视频免费观看在线| 亚洲在久久综合| 男女国产视频网站| 日韩视频在线欧美| 久久久久久伊人网av| 国产精品蜜桃在线观看| 国产极品天堂在线| 麻豆成人午夜福利视频| av天堂中文字幕网| 亚洲,一卡二卡三卡| 人人妻人人看人人澡| 国产亚洲91精品色在线| av在线app专区| 日韩伦理黄色片| 性色av一级| 男女边摸边吃奶| 嫩草影院入口| 国产探花极品一区二区| 日韩强制内射视频| 日韩视频在线欧美| 日韩大片免费观看网站| 高清毛片免费看| 亚洲自拍偷在线| 国产美女午夜福利| av在线蜜桃| 亚洲国产最新在线播放| 色综合色国产| 亚洲精品久久午夜乱码| 人妻 亚洲 视频| 啦啦啦在线观看免费高清www| 新久久久久国产一级毛片| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 99热这里只有是精品在线观看| 日韩人妻高清精品专区| 成年人午夜在线观看视频| 老司机影院毛片| 一二三四中文在线观看免费高清| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 亚洲欧洲日产国产| 欧美97在线视频| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 国产 一区精品| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 黄色配什么色好看| 深爱激情五月婷婷| 日韩在线高清观看一区二区三区| 国产黄a三级三级三级人| 久久久久久久亚洲中文字幕| 七月丁香在线播放| 国产久久久一区二区三区| 久久99蜜桃精品久久| 国产黄色视频一区二区在线观看| 寂寞人妻少妇视频99o| 97热精品久久久久久| 久久久久久久久久久免费av| 免费观看无遮挡的男女| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 欧美性感艳星| 欧美日本视频| 国产高清国产精品国产三级 | 男女边摸边吃奶| 国产 精品1| 成人毛片a级毛片在线播放| 大香蕉97超碰在线| 精品熟女少妇av免费看| 美女cb高潮喷水在线观看| 精品国产露脸久久av麻豆| 欧美日韩国产mv在线观看视频 | 国产成人免费观看mmmm| 精品人妻一区二区三区麻豆| 一区二区av电影网| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 日韩伦理黄色片| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | tube8黄色片| 国产成人免费观看mmmm| videos熟女内射| 99热网站在线观看| 久久精品国产亚洲av天美| 久久精品国产自在天天线| 一级av片app| 国产精品福利在线免费观看| 日韩一区二区三区影片| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产精品国产三级国产专区5o| 2022亚洲国产成人精品| 51国产日韩欧美| 日韩av在线免费看完整版不卡| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 我的老师免费观看完整版| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲电影在线观看av| 亚洲va在线va天堂va国产| 在线a可以看的网站| 最后的刺客免费高清国语| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 精品人妻熟女av久视频| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 久久久久国产精品人妻一区二区| 日韩av不卡免费在线播放| 国产精品一区www在线观看| 亚洲精品aⅴ在线观看| 亚洲精品日本国产第一区| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 亚洲av免费高清在线观看| 国产午夜福利久久久久久| 久久久色成人| 交换朋友夫妻互换小说| 久久久久国产精品人妻一区二区| 2022亚洲国产成人精品| 超碰97精品在线观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 男人狂女人下面高潮的视频| 欧美日韩视频精品一区| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 亚洲av成人精品一二三区| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 爱豆传媒免费全集在线观看| 男女无遮挡免费网站观看| 97在线视频观看| 在线播放无遮挡| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 99久久九九国产精品国产免费| av卡一久久| 国产老妇女一区| 99久久精品国产国产毛片| 麻豆久久精品国产亚洲av| 亚洲国产色片| 男女边摸边吃奶| 色视频www国产| 精品人妻视频免费看| 特大巨黑吊av在线直播| 亚洲国产精品专区欧美| 国产日韩欧美在线精品| 国国产精品蜜臀av免费| 在线播放无遮挡| 天美传媒精品一区二区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲高清免费不卡视频| 欧美xxⅹ黑人| 国产 精品1| 国产亚洲5aaaaa淫片| 91精品国产九色| 草草在线视频免费看| 国产色爽女视频免费观看| 在线观看三级黄色| 国产伦精品一区二区三区四那| 国产精品精品国产色婷婷| 另类亚洲欧美激情| 一边亲一边摸免费视频| 亚洲av成人精品一区久久| 欧美xxⅹ黑人| 搞女人的毛片| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 高清在线视频一区二区三区| 日韩欧美精品v在线| 一本一本综合久久| 亚洲电影在线观看av| 校园人妻丝袜中文字幕| 国产伦在线观看视频一区| 欧美少妇被猛烈插入视频| 九九爱精品视频在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 久久久久国产精品人妻一区二区| 成年女人看的毛片在线观看| 日韩免费高清中文字幕av| 看十八女毛片水多多多| 3wmmmm亚洲av在线观看| 色视频www国产| 超碰97精品在线观看| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 91精品伊人久久大香线蕉| 国产成人freesex在线| 搡老乐熟女国产| 人人妻人人看人人澡| 国产视频首页在线观看| 久久久精品免费免费高清| 精品久久久久久久久av| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久99精品国语久久久| 视频中文字幕在线观看| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久| 久久国产乱子免费精品| 午夜爱爱视频在线播放| 我的老师免费观看完整版| 毛片女人毛片| 国产av码专区亚洲av| 天天躁日日操中文字幕| 99精国产麻豆久久婷婷| 最后的刺客免费高清国语| 成人亚洲精品一区在线观看 | www.色视频.com| 午夜精品国产一区二区电影 | 在线观看免费高清a一片| 久久鲁丝午夜福利片| 成人漫画全彩无遮挡| 日韩成人伦理影院| 一边亲一边摸免费视频| 国产成人精品婷婷| 一区二区三区精品91| 乱系列少妇在线播放| av网站免费在线观看视频| 美女内射精品一级片tv| 18+在线观看网站| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产久久久一区二区三区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲欧美中文字幕日韩二区| 你懂的网址亚洲精品在线观看| 美女内射精品一级片tv| 波野结衣二区三区在线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 国产毛片在线视频| 综合色av麻豆| 夜夜爽夜夜爽视频| 精品一区二区免费观看| 国产在线一区二区三区精| 26uuu在线亚洲综合色| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 少妇丰满av| 久久久久久久国产电影| 亚洲精品成人久久久久久| 99热全是精品| 日本与韩国留学比较| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产精品成人在线| 亚洲欧美日韩另类电影网站 | 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 国产91av在线免费观看| 亚洲熟女精品中文字幕| 韩国av在线不卡| 久久99精品国语久久久| 韩国av在线不卡| 街头女战士在线观看网站| 女人被狂操c到高潮| 亚洲自拍偷在线| 婷婷色av中文字幕| 看非洲黑人一级黄片| 成人鲁丝片一二三区免费| 一区二区三区精品91| 日本黄色片子视频| freevideosex欧美| 麻豆乱淫一区二区| 日日啪夜夜撸| 免费黄色在线免费观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 亚洲精品国产av蜜桃| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 亚洲国产成人一精品久久久| 男女下面进入的视频免费午夜| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 搡女人真爽免费视频火全软件| 亚洲av男天堂| 青春草国产在线视频| 亚洲欧美精品专区久久| 性色av一级| 成人黄色视频免费在线看| 国产精品伦人一区二区| 免费播放大片免费观看视频在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 成年人午夜在线观看视频| 久久精品国产亚洲av涩爱| 一级毛片久久久久久久久女| 欧美高清成人免费视频www| 亚洲av电影在线观看一区二区三区 | 欧美人与善性xxx| 在线观看美女被高潮喷水网站| 精品少妇黑人巨大在线播放| 69av精品久久久久久| 99视频精品全部免费 在线| 高清欧美精品videossex| 在线看a的网站| 99热这里只有是精品在线观看| 国产黄色免费在线视频| 久久精品夜色国产| 中文字幕av成人在线电影| 国产成人aa在线观看| av在线观看视频网站免费| 女人被狂操c到高潮| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产日韩欧美在线精品| 亚洲欧洲日产国产| 国产精品不卡视频一区二区| 国产成人精品婷婷| 成年女人在线观看亚洲视频 | 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 欧美性感艳星| 日韩,欧美,国产一区二区三区| 校园人妻丝袜中文字幕| 色综合色国产| 一本一本综合久久| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 一级av片app| 国产精品久久久久久精品电影| av在线app专区| 麻豆国产97在线/欧美| 免费av观看视频| 国产精品女同一区二区软件| 不卡视频在线观看欧美| 欧美成人a在线观看| 国产精品一区二区性色av| 亚洲成人久久爱视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 国产黄色视频一区二区在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区| 亚洲人成网站在线播| 日韩三级伦理在线观看| 少妇的逼水好多| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品.久久久| 亚洲最大成人手机在线| 神马国产精品三级电影在线观看| 91精品国产九色| 最近最新中文字幕免费大全7| 一级爰片在线观看| 麻豆国产97在线/欧美| 在线精品无人区一区二区三 | 亚洲在线观看片| 亚洲内射少妇av| 尾随美女入室| av卡一久久| 国产免费福利视频在线观看| 狂野欧美激情性bbbbbb| 日本午夜av视频| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 国产成人精品婷婷| 特级一级黄色大片| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 国产高潮美女av| 国产一级毛片在线|