酸棗仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金5味中藥對(duì)對(duì)氯苯丙氨酸致失眠模型大鼠睡眠作用的影響*

李峰杰，何 萍，趙 樂，郝 偉，李貽奎

（中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院李連達(dá)院士研究室，北京 100091）

·實(shí)驗(yàn)研究·

酸棗仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金5味中藥對(duì)對(duì)氯苯丙氨酸致失眠模型大鼠睡眠作用的影響*

李峰杰，何 萍，趙 樂，郝 偉，李貽奎△

（中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院李連達(dá)院士研究室，北京 100091）

目的觀察酸棗仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金5味中藥對(duì)失眠模型大鼠睡眠作用的影響。方法 大鼠腹腔注射對(duì)氯苯丙氨酸（PCPA）混懸液制備大鼠失眠模型。將造模成功大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、地西泮組、酸棗仁組、石菖蒲組、夜交藤組、百合組、郁金組，另設(shè)空白對(duì)照組。地西泮組（1 g／kg）、酸棗仁組（18 g／kg）、石菖蒲組（12 g／kg）、夜交藤組（18 g／kg）、百合組（14.4 g／kg）、郁金組（12 g／kg）大鼠連續(xù)7 d給予相應(yīng)濃度藥液，模型對(duì)照組和空白對(duì)照組連續(xù)7 d給予生理鹽水灌胃。給藥期間，觀察大鼠一般狀態(tài)；給藥結(jié)束后，觀察大鼠體質(zhì)量變化、睡眠潛伏期、總睡眠時(shí)間。結(jié)果 地西泮組、酸棗仁組、夜交藤組、百合組、郁金組、石菖蒲組大鼠的睡眠潛伏期明顯短于模型對(duì)照組，其中地西泮組、酸棗仁組、夜交藤組、百合組大鼠的睡眠潛伏期有顯著性縮短（P＜0.01）；地西泮組、酸棗仁組、百合組、郁金組大鼠的睡眠持續(xù)時(shí)間明顯長于模型對(duì)照組，其中地西泮組大鼠的睡眠持續(xù)時(shí)間延長最顯著（P＜0.01），酸棗仁組、百合組、郁金組有延長趨勢(shì)。結(jié)論 酸棗仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金單味藥對(duì)改善失眠大鼠模型睡眠作用具有一定效果，但尚需進(jìn)一步深入研究。

失眠；大鼠；酸棗仁；石菖蒲；夜交藤；百合；郁金；對(duì)氯苯丙氨酸

失眠有3個(gè)癥狀特點(diǎn)，即入睡困難，睡眠不深且易驚醒，早醒且醒后疲乏或缺乏清醒感。西醫(yī)主要依靠化學(xué)藥物進(jìn)行治療，如苯二氮 類、抗抑郁藥、巴比妥類等，雖有一定療效，但易成癮，產(chǎn)生依賴性，長期應(yīng)用還會(huì)產(chǎn)生一定的耐藥性或不良反應(yīng)，出現(xiàn)健忘、注意力不集中、無力、情緒低落等現(xiàn)象。目前研究表明，中藥治療失眠不良反應(yīng)小，無藥物依賴性和成癮性。本研究中選擇臨床常用的具有失眠治療作用的5種單味中藥——酸棗仁、石菖蒲、夜交藤、百合、郁金對(duì)失眠模型大鼠睡眠的作用進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，旨在為臨床中醫(yī)藥治療失眠提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物與試藥

1.1.1 動(dòng)物

Wistar大鼠，雄性，清潔級(jí)，100只，體質(zhì)量為150～170 g，購于京華阜康科技股份有限公司，大鼠飼養(yǎng)于中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院普通動(dòng)物房。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為SYXK（京）2009-0001。飼養(yǎng)溫度21～26℃，相對(duì)濕度40%～70%，10／14 h明暗交替照明。

1.1.2 試藥及制備

對(duì)氯苯丙氨酸（PCPA，美國 Sigma公司，批號(hào)為SHBG8045V）。

地西泮（北京益民藥業(yè)有限公司，批號(hào)為20150903），取8片地西泮（20 mg），加入200 mL生理鹽水，制備質(zhì)量濃度為0.1 g／L的水溶液。

酸棗仁（河北百草康神藥業(yè)有限公司，批號(hào)為1606011），精密稱取酸棗仁378 g，加5倍量蒸餾水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1.8 g／mL。

石菖蒲（河北百草康神藥業(yè)有限公司，批號(hào)為1601012），精密稱取石菖蒲252 g，加5倍量蒸餾水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1.2 g／mL。

夜交藤（河北百草康神藥業(yè)有限公司，批號(hào)為1605021），精密稱取夜交藤378 g，加5倍量蒸餾水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1.8 g／mL。

百合（河北百草康神藥業(yè)有限公司，批號(hào)為1606011），精密稱取百合302.4 g，加5倍量蒸餾水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1.44 g／mL。

郁金（河北百草康神藥業(yè)有限公司，批號(hào)為1601012），精密稱取郁金252 g，加5倍量蒸餾水，浸泡1 h，煎煮2次，第1次30 min，第2次20 min，濾過，合并濾液，濾液濃縮至1.2 g／mL。

1.2 造模

1.2.1 造模方法

將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，大鼠自由進(jìn)食飼料和水。3 d后稱定體質(zhì)量，隨機(jī)分成空白對(duì)照組和造模組。造模組腹腔注射PCPA混懸液，連續(xù)注射2 d，PCPA臨用前按大鼠體質(zhì)量，用量350 mg／kg，用弱堿性生理鹽水配置成混懸液備用，空白對(duì)照組腹腔注射等體積弱堿性生理鹽水，第1次腹腔注射36 h后，大鼠出現(xiàn)晝夜節(jié)律缺失，日間與夜晚皆活動(dòng)不斷。戊巴比妥鈉翻正試驗(yàn)，空白對(duì)照組與造模組睡眠潛伏期、總睡眠時(shí)間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示造模成功。

1.2.2 造模成功的判定

第1次腹腔注造模藥36 h后，空白對(duì)照組和造模組均腹腔注射戊巴比妥鈉50 mg／kg（預(yù)試驗(yàn)測(cè)得引起100.00%大鼠睡眠的最小閾劑量），提起大鼠尾巴，將大鼠腹部朝上放在墊塊上。記錄大鼠的睡眠潛伏期及睡眠持續(xù)時(shí)間，以翻正反射消失為發(fā)生睡眠，以翻正反射恢復(fù)為覺醒。如果懷疑翻正反射是否確定復(fù)原，于第1次翻正后馬上重新背位平躺，如在1 min之內(nèi)又自動(dòng)翻過來則前1次的時(shí)間即為復(fù)原時(shí)間，否則以第2次翻過來的時(shí)間為準(zhǔn)。空白對(duì)照組與造模組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），表示造模成功。詳見表1和圖1。

表1 兩組大鼠造模結(jié)束時(shí)戊巴比妥鈉翻正試驗(yàn)結(jié)果比較（±s，min）

表1 兩組大鼠造模結(jié)束時(shí)戊巴比妥鈉翻正試驗(yàn)結(jié)果比較（±s，min）

注：與空白對(duì)照組比較，*P＜0.01。表2同。

組別空白對(duì)照組（n＝11）造模組（n＝75）睡眠潛伏期3.27±0.65 5.48±1.02*睡眠持續(xù)時(shí)間89.45±11.69 72.08±7.25*

圖1 大鼠造模結(jié)構(gòu)戊巴比妥鈉翻正試驗(yàn)柱狀圖

1.3 動(dòng)物分組及給藥

空白對(duì)照組(11只)大鼠連續(xù)7 d給予生理鹽水灌胃。將造模成功的大鼠分為7組，其中模型對(duì)照組、地西泮組各10只，酸棗仁組、石菖蒲組、夜交藤組、百合組、郁金組各11只。模型對(duì)照組大鼠腹腔注射PCPA后，連續(xù)7 d給予生理鹽水灌胃；地西泮組(1 g／kg)、酸棗仁組(18 g／kg)、石菖蒲組(12 g／kg)、夜交藤組(18 g／kg)、百合組(14.4 g／kg)、郁金組(12 g／kg)，大鼠腹腔注射PCPA后，分別連續(xù)7 d灌胃相應(yīng)藥液。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 一般狀態(tài)

觀察大鼠的一般情況，包括精神狀態(tài)、皮毛顏色、取食量、飲水量、對(duì)外界刺激的反應(yīng)、死亡情況等。

體質(zhì)量變化：分別于分組給藥前和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱定體質(zhì)量，觀察其增加量。

1.4.2 睡眠潛伏期、總睡眠時(shí)間

第1次腹腔注射造模藥36 h后，各組均腹腔注射戊巴比妥鈉50 mg／kg（預(yù)試驗(yàn)測(cè)得引起100.00%大鼠睡眠的最小閾劑量），提起大鼠尾巴，將大鼠腹部朝上放在墊塊上。記錄大鼠的睡眠潛伏期及睡眠持續(xù)時(shí)間，以翻正反射消失為發(fā)生睡眠，以翻正反射恢復(fù)為覺醒。如懷疑翻正反射是否真正復(fù)原，于第1次翻正后立即重新背位平躺，如在1 min內(nèi)又自動(dòng)翻過來則前1次的時(shí)間即為恢復(fù)時(shí)間，否則以第2次翻過來的時(shí)間為準(zhǔn)。從給藥到翻正反射消失的時(shí)間為睡眠潛伏期，從翻正反射消失到恢復(fù)的時(shí)間為總的睡眠時(shí)間。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用獨(dú)立樣本 t檢驗(yàn)。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般狀態(tài)

空白對(duì)照組大鼠精神狀態(tài)良好，活動(dòng)機(jī)靈，反應(yīng)敏捷，毛發(fā)有光澤，體質(zhì)量明顯增加；模型對(duì)照組大鼠精神亢奮，毛硬粗糙且豎起無光澤，易激惹，飲食量有所減少，消瘦；各中藥組和陽性藥組大鼠精神狀態(tài)、活動(dòng)及反應(yīng)情況不如空白對(duì)照組大鼠。

在給藥結(jié)束后，進(jìn)行戊巴比妥翻正試驗(yàn)注射戊巴比妥后，部分組別出現(xiàn)大鼠死亡和翻正反射未消失，具體為：空白對(duì)照組死亡1只，1只翻正反射未消失；模型對(duì)照組死亡1只；地西泮組1只翻正反射未消失；夜交藤組死亡1只，1只翻正反射未消失；郁金組死亡1只，2只翻正反射未消失；石菖蒲組死亡1只，1只翻正反射未消失。以上大鼠均不計(jì)入試驗(yàn)結(jié)果。

2.2 體質(zhì)量增加量

結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組和各給藥組大鼠體質(zhì)量增加量均低于空白對(duì)照組，其中模型對(duì)照組與空白對(duì)照組差異顯著(P＜0.01)；與模型組比較，各給藥組大鼠體質(zhì)量增加量均高于模型組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。詳見表2和圖2。

表2 各組大鼠試驗(yàn)結(jié)束時(shí)體質(zhì)量增加情況（±s，g）

表2 各組大鼠試驗(yàn)結(jié)束時(shí)體質(zhì)量增加情況（±s，g）

組別空白對(duì)照組（n＝9）模型對(duì)照組（n＝9）地西泮組（n＝9）酸棗仁組（n＝11）夜交藤組（n＝9）百合組（n＝11）郁金組（n＝8）石菖蒲組（n＝9）體質(zhì)量增加量59.89±5.78 38.33±8.35*48.56±15.11 47.36±12.67 51.33±14.15 41.73±21.74 42.50±23.54 53.22±18.55

2.3 睡眠潛伏期、總睡眠時(shí)間

結(jié)果表明，與模型對(duì)照組比較，地西泮組、酸棗仁組、夜交藤組、百合組、郁金組、石菖蒲組的睡眠潛伏期均縮短，其中地西泮組、酸棗仁組、夜交藤組、百合組有顯著性縮短（P＜0.01）；與模型對(duì)照組比較，地西泮組、酸棗仁組、百合組、郁金組的睡眠持續(xù)時(shí)間均延長，其中地西泮組延長最顯著（P＜0.01）。詳見表3和圖3。

表3 各組大鼠給藥結(jié)束后戊巴比妥鈉翻正試驗(yàn)結(jié)果比較（±s，min）

表3 各組大鼠給藥結(jié)束后戊巴比妥鈉翻正試驗(yàn)結(jié)果比較（±s，min）

注：與空白對(duì)照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01；與模型對(duì)照組相比，＃P＜0.01。

組別空白對(duì)照組（n＝9）模型對(duì)照組（n＝9）地西泮組（n＝9）酸棗仁組（n＝11）夜交藤組（n＝9）百合組（n＝11）郁金組（n＝8）石菖蒲組（n＝9）睡眠潛伏期2.67±0.71 3.67±1.23**2.44±0.53＃2.36±0.51＃2.56±0.53＃2.45±0.69＃3.25±0.89 3.11±0.78睡眠持續(xù)時(shí)間106.89±12.23 81.44±13.22*115.89±13.72＃109.00±48.21 83.00±14.90*107.09±28.08 102.88±31.17 76.56±7.54**

3 討論

對(duì)氯苯丙氨酸大鼠失眠模型是目前公認(rèn)的經(jīng)典動(dòng)物失眠模型。造模過程主要是給大鼠連續(xù)2 d腹腔注射一定量的PCPA混懸液，PCPA為5-羥色胺(5-HT)合成抑制劑，可選擇性地作用于色氨酸羥化酶，抑制酶活性，足量給予時(shí)所致失眠可持續(xù)2周之久[1]。因此，PCPA混懸液的制備決定造模的成敗。

有研究顯示，用弱堿性生理鹽水溶解PCPA可得PCPA混懸液[2]。但本課題組在試驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，用弱堿性生理鹽水溶解PCPA后，PCPA完全浮在生理鹽水上層，生理鹽水中只有極少量的PCPA懸浮，達(dá)不到腹腔注射要求。分析原因，可能是在本研究條件下，PCPA在弱堿性生理鹽水溶解性不夠，需添加助溶劑幫助溶解PCPA。因此，本課題組先用二甲基亞砜（DMSO）溶解PCPA，后用生理鹽水溶解，得到了PCPA懸浮液，達(dá)到了腹腔注射的要求。

圖2 各組大鼠試驗(yàn)結(jié)束時(shí)體質(zhì)量增加量

圖3 各組大鼠給藥結(jié)束后戊巴比妥鈉翻正試驗(yàn)柱狀圖

本研究中，預(yù)試驗(yàn)測(cè)得引起100.00%大鼠睡眠的最小閾劑量為50 mg／kg，但給藥結(jié)束后進(jìn)行戊巴比妥翻正試驗(yàn)時(shí)，部分組別大鼠出現(xiàn)翻正反射未消失及死亡現(xiàn)象。通過注射預(yù)試驗(yàn)測(cè)定的戊巴比妥劑量(50 mg／kg)，仍有部分大鼠翻正反射未消失，可能與大鼠第1次注射戊巴比妥后出現(xiàn)戊巴比妥耐藥有關(guān)；部分大鼠出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，可能與大鼠個(gè)體差異相關(guān)。因此，以后再進(jìn)行此類研究時(shí)，最好將每組大鼠預(yù)設(shè)只數(shù)多出幾只，以免樣本數(shù)量達(dá)不到預(yù)先設(shè)定數(shù)量，導(dǎo)致因樣本量較少而產(chǎn)生試驗(yàn)誤差。

酸棗仁，味甘、酸，性平，歸心、肝、膽經(jīng)，有養(yǎng)心益肝、安神、斂汗之功效[3]，屬于養(yǎng)心安神藥。在治療失眠的中藥中排名第一，其用藥頻次和頻率遠(yuǎn)高于其他中藥，是失眠治療的代表中藥，為多數(shù)醫(yī)家在處方時(shí)選用[4]。本研究結(jié)果顯示，酸棗仁可顯著縮短睡眠潛伏期（P＜0.01），且有延長睡眠持續(xù)時(shí)間趨勢(shì)。

夜交藤，也叫首烏藤，味甘、微苦，性平，歸心、肝經(jīng)，有養(yǎng)血安神、祛風(fēng)通絡(luò)之功效[3]，屬于養(yǎng)心安神藥。因?yàn)橐菇惶偕朴陴B(yǎng)血，故最宜于血虛所致失眠。國醫(yī)大師朱良春認(rèn)為，安神中藥以夜交藤的催眠作用最佳[5]。本研究中，夜交藤可顯著縮短睡眠潛伏期（P＜0.01）。

百合，味甘，性微寒，歸肺、心、胃經(jīng)，具有養(yǎng)陰潤肺、清心安神之功效[3]。百合臨床常作為主要藥物組方治療各種類型的失眠癥狀[6-8]。本研究結(jié)果顯示，百合可顯著縮短睡眠潛伏期（P＜0.01），且有延長睡眠持續(xù)時(shí)間趨勢(shì)。

郁金，味辛、苦，性寒，歸肝、膽、心經(jīng)，有活血止痛、行氣解郁、清心涼血之功效[3]。有醫(yī)師將郁金作為主藥進(jìn)行組方治療失眠[9-10]，效果明顯。本研究中，郁金對(duì)睡眠潛伏期無明顯作用，但有延長睡眠持續(xù)時(shí)間趨勢(shì)。

石菖蒲，味辛、苦，性溫，歸心、胃經(jīng)，有開竅醒神、化濕和胃、寧神益志之功效[3]。有學(xué)者選取失眠作為研究病種，利用“中醫(yī)臨床科研信息共享系統(tǒng)”數(shù)據(jù)倉庫存儲(chǔ)的辨證論治失眠實(shí)際診療數(shù)據(jù)，采用復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)等數(shù)據(jù)挖掘方法，開展多醫(yī)師辨證論治失眠的有效治療中藥的研究，發(fā)現(xiàn)失眠有效核心藥物的主體構(gòu)成有酸棗仁、石菖蒲等[11]。本研究中，郁金對(duì)睡眠潛伏期和睡眠持續(xù)時(shí)間均無顯著作用，可能與本試驗(yàn)條件、試驗(yàn)樣本數(shù)量較少及試驗(yàn)誤差有關(guān)。

綜上所述，酸棗仁、夜交藤、百合、郁金等單味藥對(duì)改善失眠模型大鼠的睡眠作用具有一定效果，或可縮短睡眠潛伏期或延長睡眠持續(xù)時(shí)間，對(duì)治療失眠有一定效果，尚需進(jìn)一步深入研究。

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Effect of Semen Ziziphi Spinosae，Acorus Tatarinowii，Caulis Ploygoni Multiflori，Bulbus Lilii，Radix Curcumae on the Sleeping of Insomnia Rat M odels

Li Fengjie，He Ping，Zhao Le，Hao Wei，Li Yikui
（The Academician Research Laboratory of Li Lianda，Xiyuan Hospital CACMS，Beijing，China 100091）

Objective To explore the effect of Semen Ziziphi Spinosae，Acorus Tatarinowii，Caulis Ploygoni Multiflori，Bulbus Lilii，Radix Curcumae on the sleeping of insomnia rat models.M ethods Intraperitoneal injection of PCPA was applied to establish the model of insomnia rats.The successful model rats were randomly divided into the model control group，the positive control group，the Diazepam group（1 g／kg），the Ziziphi Spinosae group（18 g／kg），the Acorus Tatarinowii group（12 g／kg），the Caulis Ploygoni Multiflori group （18 g／kg），the Bulbus Lilii group（14.4 g／kg），and the Radix Curcumae group（12 g／kg）.In addition，a blank control group was set.The rats of Diazepam group，Ziziphi Spinosae group，Acorus Tatarinowii group，Caulis Ploygoni Multiflori group，Bulbus Lilii group，Radix Curcumae group were given corresponding concentration solution for 7 d，and the blank control group and the model control group were given normal saline for 7 d.During the administration period，the rats were observed.After the administration，the changes of body weight，sleep latency and total sleep time were observed.Results Compared with the model control group，the sleep latency of every drug administration group reduced；and the sleeplatency of Diazepam group，Ziziphi Spinosae group，Acorus Tatarinowii group，Caulis Ploygoni Multiflori group reduced obviously（P＜0.01）.The total sleep time of Diazepam group，Ziziphi Spinosae group，Caulis Ploygoni Multiflori group，Bulbus Lilii group increased.And tatarinowii group increased obviously（P＜0.01）.Conclusion Single medication of Semen Ziziphi Spinosae，Acorus Tatarinowii，Caulis Ploygoni Multiflori，Bulbus Lilii，Radix Curcumae has a certain effect on improving sleep function in insomnia rats，but further study is sill needed.

insomnia；rat；Semen Ziziphi Spinosae；Acorus Tatarinowii；Caulis Ploygoni Multiflori；Bulbus Lilii；Radix Curcumae；PCPA

R285.5；R282.71

A

1006-4931(2017)06-0001-04

2017-01-08)

10.3969／j.issn.1006-4931.2017.06.001

國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目[81573958]。

李峰杰，男，博士研究生，助理研究員，研究方向?yàn)橹兴幩幚韺W(xué)，（電子信箱）lfj1210＠126.com?！?/p>

李貽奎，男，研究員，主任醫(yī)師，研究方向?yàn)橹兴幩幚韺W(xué)，（電子信箱）lyikui＠163.com。