格雷夫斯病患者血漿CGRP和NPY水平變化的研究

王 攀，蔣茂燕，李 彬，錢 凱，蔣智鋼

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 核醫(yī)學(xué)科，貴州 遵義 563099；2.遵義醫(yī)學(xué)院 公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 遵義 563099)

臨床醫(yī)學(xué)研究

格雷夫斯病患者血漿CGRP和NPY水平變化的研究

王 攀1，蔣茂燕1，李 彬1，錢 凱1，蔣智鋼2

(1.遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院 核醫(yī)學(xué)科，貴州 遵義 563099；2.遵義醫(yī)學(xué)院 公共衛(wèi)生學(xué)院，貴州 遵義 563099)

目的 探討格雷夫斯病(Graves's disease，GD)患者血漿中神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y, NPY)和降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide, CGRP)水平及其與甲狀腺激素之間的關(guān)系，為GD的診治尋找新的診療指標(biāo)。方法 收集GD患者80例，分為3組：①治療前組：未接受治療的患者；②緩解組：甲硫咪唑片治療后緩解的患者；③治愈組：甲硫咪唑片治療后達(dá)到治愈標(biāo)準(zhǔn)的患者，采用放射免疫分析方法檢測各組中CGRP、NPY水平變化，并與其FT3、FT4、TSH、TRAb進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果 血漿中CGRP、NPY水平治療前組(51.1±11.1ng/L、825.1±41.9ng/L)和緩解組(106.3±12.8ng/L、630.8±84.5ng/L)明顯不同于治愈組(144.3±12.3ng/L、138.1±24.4ng/L)，將3組的數(shù)據(jù)進(jìn)行兩兩比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；在治療后組中FT3、FT4、TSH恢復(fù)到正常時，而CGRP、NPY還處于異常水平；CGRP、NPY分別與組間對應(yīng)的FT3、FT4、TRAb、TSH進(jìn)行線性回歸分析。結(jié)果顯示3組FT3、FT4、TRAb、TSH與CGRP和NPY均相關(guān)，同時CGRP、TSH與GD嚴(yán)重程度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)(R= -0.933，-0.944，P= 0.000，0.000)，NPY、FT3、FT4、TRAb則表現(xiàn)為正相關(guān)(R=0.926，0.943，0.930，0.943，P=0.000，0.000，0.000，0.000)。結(jié)論 血漿中CGRP、NPY與GD密切相關(guān)，CGRP在GD中顯著降低，而NPY顯著增高，有望成為GD防治的診療指標(biāo)。

格雷夫斯?。唤碘}素基因相關(guān)肽；神經(jīng)肽；相關(guān)性

格雷夫斯病(Graves’s disease,GD)是彌漫性甲狀腺腫大伴甲狀腺激素分泌過多引發(fā)的器官特異性自身免疫性疾病[1]。甲狀腺的功能主要受到下丘腦-垂體-甲狀腺軸的調(diào)節(jié)[2]。然而，早在1980年Ahren B報道甲狀腺濾泡細(xì)胞周圍有肽能神經(jīng)系統(tǒng)存在[3]，其對GD調(diào)節(jié)或與甲狀腺相關(guān)激素之間可能存在一定關(guān)系，其機(jī)制是否與CGRP、NPY有關(guān)，但目前存在爭議，需要深入研究。本文通過檢測GD患者血漿中神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y, NPY )和降鈣素基因相關(guān)肽( calcitonin gene-related peptide, CGRP )水平，探討二者與GD患者外周血游離三碘甲狀腺原氨酸(Free triiodothyronin，F(xiàn)T3)、游離甲狀腺素(Free thyroxine，F(xiàn)T4)及促甲狀腺激素(Thyroid-stimulating hormone，TSH)，甲狀腺激素受體抗體(Thyroid-stimulating hormone receptor antibody， TRAb)關(guān)系的報道如下。

1 對象與方法

1.1 標(biāo)本采集 收集2012年1月至2014年1月確診為GD患者，診斷標(biāo)準(zhǔn)嚴(yán)格按照最新版《131碘治療格雷夫斯病甲亢指南》[4]，并通過規(guī)范治療痊愈門診患者共計80例[男性29例，女性51例，年齡20～64(36.5±14.3)歲]，將研究對象隨機(jī)分為3組：①治療前組：未接受治療的患者；②緩解組：甲硫咪唑片治療9月后緩解的患者；③治愈組：甲硫咪唑片治愈(持續(xù)治療2年后，甲亢臨床表現(xiàn)消失，F(xiàn)T3、FT4、TSH、TRAb恢復(fù)正常)的患者[4]。

1.2 檢測儀器與方法 采集空腹靜脈血2 mL，注入含有10%EDTA二鈉和抑肽酶40 μL的試管中混勻。4 ℃ 4 000 rpm離心10 min，分離血漿放置-60 ℃冰箱保存待檢。采用放射免疫方法(radioimmunoassay,RIA)檢測CGRP和NPY水平，試劑由北京尚柏生物醫(yī)學(xué)技術(shù)(北京)有限公司提供，檢測儀器為中國醫(yī)科大中佳公司提供GC-2010儀；化學(xué)光免疫分析法(chemiluminscence immunoassay,CLIA)檢測FT3、FT4、TSH水平，儀器為ADVIA Centaur XP，試劑和儀器均由西門子公司提供；電化學(xué)發(fā)光免疫分析法(electrochemluminescence immunoassay,ECLI)檢測TRAb水平，儀器為Cobas e 601，試劑和儀器由羅氏公司提供。所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判斷 隨機(jī)抽取本院體檢健康者20例，排除自身免疫性疾病、感染、糖尿病、神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)疾病等。檢測外周血CGRP和NPY水平，確定生物參考區(qū)間，取95%的可信區(qū)間，CGRP為111.3 ～ 167.5ng/L，≤ 111.3 ng/L為陽性；NPY為71.8 ～142.6 ng/L，≥ 142.6ng/L為陽性。

2 結(jié)果

2.1 3組外周血CGRP和NPY水平 治療前組和緩解組中的CGRP水平顯著低于治愈組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而 NPY水平顯著高于治愈組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。從時間上看，在緩解組中FT3、FT4、TSH恢復(fù)到正常，而CGRP、NPY還處于異常水平(見表1)。

組別CGRP(ng/L)NPY(ng/L)FT3(pmol/L)FT4(pmol/L)TSH(uIU/mL)TRAb(IU/L)治愈144.3±12.3138.1±24.44.2±1.315.4±4.1 2.6±0.81.1±0.3緩解106.3±12.8a630.8±84.5a5.6±1.517.8±5.3 0.8±0.12.4±1.1治療前51.1±11.1b825.1±41.9b10.7±2.233.7±6.50.05±0.0016.9±2.3F586.7411545.97016.55121.34025.65214.110P0.0010.0010.0210.0090.0250.013

vs治愈組aP<0.05；vs緩解組bP<0.05。

2.2 組內(nèi)CGRP、NPY水平與FT3、FT4、TRAb、TSH之間的相互關(guān)系 將治療前組、緩解組及治愈組中的CGRP和NPY分別與組內(nèi)對應(yīng)的的FT3、FT4、TRAb、TSH進(jìn)行線性回歸分析，回歸系數(shù)分別為(R=0.881、-0.922、0.924、0.905和0.901、-0.894、0.935、0.913)，結(jié)果顯示在治療前組、緩解組及痊愈組中FT3、FT4、TRAb、TSH對于CGRP和NPY均表現(xiàn)密切相關(guān)。

2.3 各指標(biāo)與GD嚴(yán)重程度的相關(guān)性分析 指定GD治愈組疾病嚴(yán)重程度為1，緩解組為2，治療前組為3，探討疾病嚴(yán)重程度分別與 CGRP、NPY、FT3、FT4、TSH、TRAb等指標(biāo)的相關(guān)性，CGRP、TSH與GD病嚴(yán)重程度呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)，NPY、FT3、FT4、TRAb則表現(xiàn)為正相關(guān)(見表2)。

表2 各指標(biāo)與GD疾病嚴(yán)重程度的相關(guān)性(Spearman等級相關(guān))

指標(biāo)疾病嚴(yán)重程度相關(guān)系數(shù)(rs)PCGRP-0.933<0.001NPY0.926<0.001FT30.943<0.001FT40.930<0.001TRAb0.943<0.001TSH-0.944<0.001

3 討論

GD是常見的內(nèi)分泌疾病[5]，發(fā)病原因尚不完全清楚[6]。有研究報道甲狀腺中分布有多種肽能神經(jīng)，包括神經(jīng)肽能神經(jīng)、P物質(zhì)能神經(jīng)和腦腸肽能神經(jīng)[7]。而CGRP和NPY均屬于神經(jīng)肽能物質(zhì)類[8-9]。目前國內(nèi)外研究神經(jīng)肽能神經(jīng)主要集中在神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)[10]。1983年Rosenfeld等應(yīng)用分子生物技術(shù)就發(fā)現(xiàn)一種感覺神經(jīng)來源的CGRP樣物質(zhì)，主要包括α-CGRP、β-CGRP和胰淀素亞單位，在人甲狀腺、垂體中均含有豐富的表達(dá)[11]。有報道CGRP對甲狀腺髓樣癌診斷有很好的敏感性和特異性[12]；NPY是含有36個氨基酸的神經(jīng)活性肽，參與多系統(tǒng)調(diào)節(jié)作用，主要由交感神經(jīng)末梢釋放，起著神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)調(diào)節(jié)及神經(jīng)內(nèi)分泌的作用[13]。

本文研究結(jié)果顯示：治療前、緩解組中的CGRP水平顯著降低，NPY水平顯著增高，與文獻(xiàn)報道一致[14-15]；筆者觀察到組別間CGRP和NPY比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，CGRP水平隨著疾病的恢復(fù)不斷上調(diào)，NPY正好相反，隨著疾病的恢復(fù)不斷下調(diào)，具有很好的敏感性；同時發(fā)現(xiàn)緩解組外周血FT3、FT4、TSH恢復(fù)到正常水平而CGRP、NPY依然處于異常狀態(tài)，只有在疾病完全恢復(fù)的的情況下才回歸正常水平。這可能是CGRP、NPY伴隨GD患者臨床表現(xiàn)的存在而持續(xù)存在，并且與GD發(fā)病、病程及轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，具有很好的靈敏度，可望成為GD診療的新指標(biāo)。

治療前、緩解組及治愈組中的CGRP、NPY分別與組內(nèi)對應(yīng)的的FT3、FT4、TRAb、TSH進(jìn)行線性回歸分析，結(jié)果均具有很好的相關(guān)性，CGRP、NPY與FT3、FT4、TRAb、TSH之間存在緊密的聯(lián)系；在嚴(yán)重程度研究中GD與CGRP水平變化呈現(xiàn)為負(fù)相關(guān)關(guān)系，我們分析認(rèn)為心率不斷加快、心率失常及心衰加重時，CGRP表現(xiàn)為進(jìn)行性下降，可能是CGRP通過調(diào)節(jié)細(xì)胞內(nèi)Ca2+的內(nèi)流增加而發(fā)揮作用，使得甲狀腺細(xì)胞CGRP的分泌減少[16]；同時CGRP又可以影響免疫功能，與T淋巴細(xì)胞上CGRP受體結(jié)，可通過增加細(xì)胞內(nèi)cAMP水平而抑制自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)的活性導(dǎo)致GD易感性加強(qiáng)[16]。NPY與GD嚴(yán)重程度則表現(xiàn)為正相關(guān)關(guān)系，分析為隨疾病加重不斷上升，或許是NPY參與GD發(fā)病的調(diào)節(jié)作用，在調(diào)節(jié)神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)過程中收縮血管、加強(qiáng)血管平滑肌對神經(jīng)刺激調(diào)節(jié)血液循環(huán)，影響激素分泌的生物學(xué)功能，引起甲狀腺激素分泌的調(diào)節(jié)改變的結(jié)果[17]。在GD狀態(tài)下，機(jī)體通過血管收縮介質(zhì)NPY的增多與血管舒張素介質(zhì)CGRP的減少，控制甲狀腺激素進(jìn)入血液循環(huán)，使機(jī)體在病理過程中發(fā)揮自身穩(wěn)定的調(diào)節(jié)功能[18]。

總之，血漿CGRP、NPY水平變化與GD的發(fā)病、嚴(yán)重程度及轉(zhuǎn)歸均密切相關(guān)，可望成為臨床診療GD使用的新指標(biāo)，但其間的相互影響機(jī)制還有待深入研究。

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[收稿2016-10-31;修回2016-12-10]

(編輯：王福軍)

Study on the changes in the levels of plasma CGRP and NPY in patients with Graves's disease

WangPan1，JiangMaoyan1，LiBin1，QianKai1，JiangZhigang2

(1.Department of Nuclear Medicine,Affiliated Hospital of Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099, China;2.School of Public Health, Zunyi Medical University, Zunyi Guizhou 563099,China)

Objective The aim of this study was to investigate the relationship among the levels of CGRP, NPY, and thyroid hormones in plasma of patients with Graves's disease (GD).Methods 80 definite GD patients were designated as prior treatment group when they had not been treated with methimazole and as post-treatment group after treatment, at last as cured group after cure. The levels of CGRP and NPY in all groups were detected by radioimmunoassay, and the relationship with FT3, FT4, TRAb, and TSH was analyzed.Results The contents of CGRP in the prior treatment, post-treatment, and cured group were (51.1±11.1, 106.3±12.8, 144.3±12.3)ng/L, and the contents of NPY were (825.1±41.9, 630.8±84.5, 138.1±24.4)ng/L respectively. There were significant differences (P<0.05) among the three groups. The levels of CGRP and NPY were returned to normal more slowly than FT3, FT4 and TSH in the post-treatment group. The linear regression analysis results showed that FT3, FT4, TRAb and TSH should be related to CGRP and NPY. CGRP and TSH were negatively correlated with the severity of GD (R= -0.933，-0.944，P= 0.000，0.000), and NPY, FT3, FT4, TRAb were positively correlated with GD (R=0.926，0.943，0.930，0.943，P=0.000，0.000，0.000，0.000).Conclusion CGRP and NPY could be associated with GD and reflect the changes of thyroid hormone regularly. It is suggested that CGRP and NPY would be considered as diagnostic indexes for GD.

Graves's disease；calcitonin gene-related peptide；neuropeptide Y；correlation

貴州省科學(xué)技術(shù)廳聯(lián)合基金資助項(xiàng)目(NO：黔科合LH字[2015]7470)。

R581.1

A

1000-2715(2017)01-0072-03