不同麻醉方式對(duì)大鼠高眼壓模型眼壓值的影響

龐國(guó)龍，孫河

不同麻醉方式對(duì)大鼠高眼壓模型眼壓值的影響

龐國(guó)龍1，孫河2

目的為測(cè)量大鼠高眼壓模型的眼壓選擇理想的麻醉方式。方法將構(gòu)建成功后的高眼壓模型大鼠30只，運(yùn)用隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為水合氯醛組10只，七氟烷組10只，倍諾喜組10只；各組均給與相應(yīng)組的麻醉藥物進(jìn)行麻醉后，分別在第8、11、14、17、20、24、27、30 d的上午10點(diǎn)用Tono-pen-avia眼壓計(jì)進(jìn)行眼壓測(cè)量，每只大鼠測(cè)量5次，取平均值。結(jié)果水合氯醛組和七氟烷組的眼壓值在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)，結(jié)果基本相似，而倍諾喜組眼壓值在相應(yīng)的時(shí)間點(diǎn)較其他兩組眼壓值偏高，即水合氯醛組與七氟烷組在七個(gè)眼壓監(jiān)測(cè)點(diǎn)眼壓差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；倍諾喜組眼壓同其他兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），因此認(rèn)為倍諾喜組的眼壓值高于實(shí)際眼壓值，水合氯醛組與七氟烷組眼壓值更接近真實(shí)眼壓值。結(jié)論三種麻醉方式中，七氟烷麻醉簡(jiǎn)便易行，測(cè)量的眼壓值可靠性高，可在測(cè)眼壓時(shí)選用。

麻醉方式；眼壓；高眼壓模型；Tono-pen-avia眼壓計(jì)

在我國(guó)青光眼是僅次于白內(nèi)障的第二大致盲性眼病[1]，由高眼壓導(dǎo)致的視神經(jīng)不可逆損害和視野缺損，嚴(yán)重影響了青光眼患者的生產(chǎn)和生活，因此研究青光眼的發(fā)病機(jī)制、機(jī)理以及治療尤為迫切。研究青光眼疾病需要有理想的模型做基礎(chǔ)，廣大眼科科研工作者研究出了多種方法構(gòu)建青光眼模型，例如鞏膜靜脈結(jié)扎[2]，基因青光眼鼠模型，前房注入微球[3]或是復(fù)方卡波姆[4]等。然而，對(duì)于模型眼壓的測(cè)量，各研究團(tuán)隊(duì)都運(yùn)用各自的麻醉方式，對(duì)于各種麻醉方式對(duì)眼壓的準(zhǔn)確性是否有影響，還沒(méi)有相關(guān)的研究報(bào)告，本文基于此進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)對(duì)照，研究不同麻醉方式測(cè)量出的大鼠高眼壓模型的眼壓值是否有差異。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與儀器藥品

SPF級(jí)SD大鼠（北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號(hào)：SCXK-（京）2012-0001）40只，7～9周齡，雌雄各半，體重范圍為（221.20± 15.30）g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)。Tono-penavia眼壓計(jì)（美國(guó)Mentor公司）。

1.2 造模方法及分組

造模方法參照以往實(shí)驗(yàn)[4]，通過(guò)前房注射10 μL復(fù)方卡波姆溶液構(gòu)建高眼壓模型，右眼為模型眼，左眼作對(duì)照眼，造模不成功的大鼠以及模型質(zhì)量差的剔除實(shí)驗(yàn)（對(duì)包括大鼠的體重、精神狀態(tài)、角膜情況、前房情況、死亡情況等進(jìn)行觀(guān)察，如果術(shù)后大鼠出現(xiàn)前房積膿、滲出、積血等情況，則將該大鼠從研究中剔除。大鼠角膜在造模后呈現(xiàn)輕度水腫，房水輕度混濁，屬于正常反應(yīng)；對(duì)于角膜水腫程度明顯，前房炎癥嚴(yán)重的大鼠模型給予剔除）。剩余造模成功大鼠共30只，運(yùn)用隨機(jī)數(shù)字法隨機(jī)分為水合氯醛組10只，七氟烷組10只，倍諾喜組10只。

1.3 觀(guān)察指標(biāo)

選擇在造模后第8、11、14、17、20、24、27、30 d，每日上午10點(diǎn)運(yùn)用Tono-pen-avia眼壓計(jì)觸壓角膜測(cè)量大鼠眼壓，每只眼測(cè)量5次，取平均值；其中水合氯醛組按照10%水合氯醛3.8 ml/kg腹腔注射；七氟烷組在七氟烷密閉空間內(nèi)吸入30 s；倍諾喜組則給予鼠眼點(diǎn)眼3次每次1滴后進(jìn)行測(cè)量。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS18.0（漢化版）軟件進(jìn)行分析。多組間的比較采用單因素方差分析，計(jì)量資料采用x±s表示，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 三組動(dòng)物一般情況比較

麻醉后三組大鼠的精神狀態(tài)：倍諾喜組的大鼠處于清醒狀態(tài)；七氟烷組的大鼠處于昏睡狀態(tài)；水合氯醛組則處于輕度昏迷。三組大鼠的麻醉持續(xù)時(shí)長(zhǎng)分別為：倍諾喜組30分鐘；七氟烷組2～3分鐘；水合氯醛組60～180分鐘。麻醉后三組大鼠在體重變化上沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。三組大鼠在麻醉后的死亡率沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（預(yù)實(shí)驗(yàn)中死亡率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，水合氯醛組＞七氟烷組＞倍諾喜組，因此正式實(shí)驗(yàn)中請(qǐng)謹(jǐn)慎掌握運(yùn)用麻醉的劑量和時(shí)間）。

2.2 麻醉方式與眼壓

經(jīng)單因素方差分析，除時(shí)間點(diǎn)30 d以外的其他時(shí)間點(diǎn)，倍諾喜組（P＜0.05）同其他兩組相比均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，而水合氯醛組同七氟烷組之間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；在30 d這個(gè)時(shí)間點(diǎn)各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（表1）。

表1三組高眼壓模型大鼠在不同時(shí)間點(diǎn)的眼壓值（mmHg）

注：除30 d外，其他時(shí)間倍諾喜組與另兩組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而水合氯醛組與七氟烷組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；30 d時(shí)各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）

3 討論

實(shí)驗(yàn)中選擇哪種麻醉方式進(jìn)行測(cè)眼壓，對(duì)實(shí)驗(yàn)的成功、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性等，至關(guān)重要。如何才能高效、準(zhǔn)確、安全的進(jìn)行眼壓測(cè)量？這種麻醉方式既不能讓測(cè)眼壓浪費(fèi)太久的時(shí)間，又要使眼壓值盡可能的準(zhǔn)確，還不能因?yàn)槁樽韺?dǎo)致大鼠大量的死亡。鑒于以上原因我們選擇了表面麻醉、氣體麻醉、液體注射麻醉進(jìn)行比較，以期找到盡可能理想的麻醉方式。

通過(guò)實(shí)驗(yàn)我們可以看出，倍諾喜麻醉組眼壓值高于其他兩組，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明倍諾喜麻醉后測(cè)量的眼壓值要高于實(shí)際值，其準(zhǔn)確性略差；水合氯醛組和七氟烷組眼壓值無(wú)明顯差別，更貼近實(shí)際眼壓值，其準(zhǔn)確性較高。但是水合氯醛組和七氟烷組哪個(gè)麻醉方式對(duì)測(cè)眼壓這個(gè)常規(guī)的檢查更適合呢？

水合氯醛為催眠藥、抗驚厥藥。消化道或直腸給藥均能迅速吸收，1小時(shí)達(dá)高峰，維持4～8小時(shí)。脂溶性高，易通過(guò)血腦屏障，分布全身各組織。催眠劑量30分鐘內(nèi)即可誘導(dǎo)入睡，催眠作用溫和，不縮短REMS睡眠時(shí)間，無(wú)明顯后遺作用。催眠機(jī)理可能與巴比妥類(lèi)相似，引起近似生理性睡眠，無(wú)明顯后作用。較大劑量有抗驚厥作用，大劑量可引起昏迷和麻醉，抑制延髓呼吸及血管運(yùn)動(dòng)中樞，導(dǎo)致死亡。曾作為基礎(chǔ)麻醉的輔助用藥，麻醉前、手術(shù)前和睡眠腦電圖檢查前用藥，可鎮(zhèn)靜和解除焦慮，使相應(yīng)的處理過(guò)程比較安全和平穩(wěn)。實(shí)驗(yàn)中采用腹腔注射，通過(guò)血液循環(huán)進(jìn)入大腦，發(fā)揮鎮(zhèn)靜催眠作用，使模型全身進(jìn)入安靜狀態(tài)，此時(shí)測(cè)量的眼壓能夠客觀(guān)反映出模型的真實(shí)眼壓值。

吸入用七氟烷用于成人和兒科患者的院內(nèi)手術(shù)及門(mén)診手術(shù)的全身麻醉的誘導(dǎo)和維持，實(shí)驗(yàn)中通過(guò)模型大鼠呼吸道吸入，再通過(guò)血液循環(huán)進(jìn)入全身各部位發(fā)揮麻醉鎮(zhèn)靜作用，同樣使模型大鼠全身處于安靜狀態(tài)，使得眼壓值貼近真實(shí)眼壓值。

雖然以上兩種麻醉鎮(zhèn)靜藥物均為全身麻醉鎮(zhèn)靜藥物[5]，但是都有各自不同的特點(diǎn)：（1）水合氯醛腹腔注射，位置選擇要嚴(yán)格，不能打進(jìn)腸管及內(nèi)臟，否則模型大鼠就會(huì)腹脹或死亡，嚴(yán)重影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，同時(shí)劑量一定要在預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)找到最佳劑量值，防止模型大鼠死亡數(shù)量過(guò)大；（2）水合氯醛麻醉時(shí)間長(zhǎng)，大約1～3個(gè)小時(shí)，適合長(zhǎng)時(shí)間對(duì)模型進(jìn)行干預(yù)處理；測(cè)量完眼壓后模型一定要單獨(dú)放置，防止被同一籠內(nèi)早醒的模型吃掉。（3）吸入用七氟烷為呼吸道吸入麻醉，吸入時(shí)間要控制好，時(shí)間稍久就會(huì)導(dǎo)致模型死亡，太短則不能達(dá)到麻醉效果，這個(gè)要在實(shí)驗(yàn)中逐漸摸索。（4）七氟烷麻醉時(shí)間短，一般為1～3分鐘，適合短時(shí)間的干預(yù)處理。

究其差異性產(chǎn)生的原因，我們總結(jié)為以下幾點(diǎn)：（1）倍諾喜為表面麻醉藥物，僅對(duì)角膜或粘膜產(chǎn)生麻醉作用，模型其他部位均能正常感知。（2）水合氯醛和七氟烷均為全身麻醉藥物，麻醉成功后，模型全身處于麻醉狀態(tài)，意識(shí)不清晰，不能正常感知，這時(shí)的眼壓不受任何其它因素的干擾，能準(zhǔn)確地體現(xiàn)真實(shí)的眼壓水平。（3）倍諾喜僅對(duì)角膜進(jìn)行麻醉，模型的其他感知都存在，因此測(cè)量時(shí)模型的對(duì)抗情緒導(dǎo)致眼壓值偏高。（4）倍諾喜麻醉時(shí)要對(duì)模型用手對(duì)身體進(jìn)行按壓，一定程度上存在將眼壓提高的可能性。

綜上所述，水合氯醛和吸入七氟烷這兩種麻醉鎮(zhèn)靜藥物，在測(cè)眼壓過(guò)程中，測(cè)量值基本符合真實(shí)眼壓值，倍諾喜作為表麻藥物，不能對(duì)模型全身肢體及情緒進(jìn)行控制，其測(cè)出值偏高，因此，在高眼壓實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜏y(cè)眼壓過(guò)程中，不建議采用表麻藥物作為測(cè)眼壓的麻醉方式，以防止眼壓值偏高，影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，綜合本實(shí)驗(yàn)來(lái)看，測(cè)眼壓的三種麻醉方式中，七氟烷麻醉簡(jiǎn)便易行，測(cè)出的眼壓值準(zhǔn)確性高，推薦在測(cè)眼壓時(shí)選用。

[1]Quigley HA，Broman AT.The number of people with glaucoma world-wild in 2010 and 2020[J].Br J Ophthalmol，2006，90（3）：262-267.

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[5]龐國(guó)龍.基于疏肝通竅法對(duì)青光眼視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞保護(hù)通路激活的實(shí)驗(yàn)研究[D].黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)：2014.

Influence of different anesthetic methods on intraocular pressure in intraocular hypertension rat model

PANG Guolong，SUN He.
Taian City Center Hospital，Taian271000，China

OBJECTIVE To find the ideal way of anesthesia for measurement of intraocular pressure in intraocular hypertension rat model.METHODS After high intraocular pressure model establishment，30 experimental rats were randomly divided into chloral hydrate group（10 rats），sevoflurane group（10 rats），Benoxil group（10 rats），and rats in each group were anesthetized with corresponding drugs.Then their intraocular pressures were detected with Tono-pen avia tonography at 10 o'clock of 8th，11th，17th，20th，24th，27thand 30thday after anesthesia. Each time，intraocular pressure was presented by the average value of five-times’result.RESULTS The intraocular pressures of 8th，11th，17th，20th，24th，27thand 30thday after anesthesia in chloral hydrate group and sevoflurane group were similar，while result of Benoxil group was higher than the other two groups.In other words，there was no significant difference between chloral hydrate group and sevoflurane group at seven time point（P＞0.05）;while differences between Benoxil group and other two groups had statistical difference（P＜0.05）.Thus，intraocular pressure of Benoxil group was higher than actual result while it of chloral hydrate group and sevoflurane group was more approximate to actual result.CONCLUSIONS Among the three kinds of anesthesia，sevoflurane anesthesia was easy to perform and reliable in result，thus it should be preferred in intraocular pressure measurement.

anesthesia;intraocular pressure;high intraocular pressure model;Tono-pen-avia

R775.9；R285.5

A

1002-4379（2017）01-0008-03

10.13444/j.cnki.zgzyykzz.2017.01.002

山東省自然科學(xué)基金聯(lián)合專(zhuān)項(xiàng)（ZR2015HL112）

1山東省泰安市中心醫(yī)院，泰安271000 2黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，哈爾濱154000

龐國(guó)龍，E-mail：pglltt1982@163.com