赤蒼藤醇提物的急性毒性及對小鼠高尿酸血癥的影響

黃元河+黎星星+潘喬丹+黎為能+黃一能

【摘要】目的：探討赤蒼藤醇提物的急性毒性及對高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平的影響。方法：采用最大耐受劑量法評價(jià)赤蒼藤醇提物對小鼠的急性毒性；通過氧嗪酸鉀灌胃復(fù)制高尿酸血癥動物模型，赤蒼藤和別嘌醇干預(yù)治療，檢測小鼠血清尿酸值和血清肌酐水平。結(jié)果：赤蒼藤醇提物灌胃小鼠的最大給藥量為400 g（生藥）/kg，該劑量對小鼠心臟、肝臟、脾臟、腎臟均無顯著影響。赤蒼藤高、中、低劑量醇提物均能顯著降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸濃度（P<001），并能顯著抑制高尿酸血癥小鼠血清肌酐水平的升高（P<001）。結(jié)論：赤蒼藤醇提物毒性低，對高尿酸血癥小鼠具有良好的治療作用，對小鼠腎臟具有保護(hù)作用，臨床用藥安全。

【關(guān)鍵詞】排毒菜；赤蒼藤；急性毒性；高尿酸血癥

【中圖分類號】R2855【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】B【文章編號】1007-8517（2017）05-0052-03

痛風(fēng)（gout）是由于嘌呤類物質(zhì)代謝紊亂，產(chǎn)生尿酸過多和（或）尿酸排泄減少[1]，血尿酸濃度持續(xù)增高導(dǎo)致尿酸鹽結(jié)晶沉積軟組織所致的一組代謝性疾病，而高尿酸血癥是痛風(fēng)最重要的生化基礎(chǔ)[2]。目前，治療痛風(fēng)的化學(xué)藥物效果明顯，如秋水仙堿和別嘌呤醇，不良反應(yīng)較多，常見惡心、嘔吐、腹瀉、過敏反應(yīng)、肝腎損害等[2]。赤蒼藤（當(dāng)?shù)亟小芭哦静恕保┦菑V西西南地區(qū)靖西、那坡、德?？h一帶壯族人們常用排毒利尿的野生蔬菜，因食用后排臭尿而得名。筆者采集“排毒菜”的原植物經(jīng)鑒定確認(rèn)為鐵青樹科（Olacaceae）赤蒼藤屬（Erythropalum）赤蒼藤（Erythropalum scandens Bl）。赤蒼藤為多年生常綠大型木質(zhì)藤本植物，具有較高的食用、藥用及園林綠化觀賞價(jià)值，主產(chǎn)于云南、貴州、廣西、廣東等地[3]。赤蒼藤根中含酚性成分，樹脂及三萜，樹脂的主要成分為蘇門樹脂酸、桂皮酸松柏醇酯，具有清熱解毒、明目赤膽之功效，用于肝膽赤熱、黃膽、尿頻、尿急、尿痛和小便不利等癥，是治療痛風(fēng)的最佳藥理食療[4]。為科學(xué)合理地利用和開發(fā)赤蒼藤資源，尋找安全、有效、經(jīng)濟(jì)的抗高尿酸血癥藥物，本研究以腹腔注射尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀建立尿酸酶缺乏型高尿酸血癥小鼠模型，研究赤蒼藤醇提物對高尿酸小鼠血清尿酸水平和血清肌酐水平的影響，其研究結(jié)果為開發(fā)赤蒼藤食用、藥用價(jià)值具有重要的意義。

1儀器與材料

11動物SPF級昆明種小鼠，體重18～23g，雌雄不限，來源于右江民族醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（桂）2014-0010。

12儀器旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；UV1800紫外-可見分光光度計(jì)（北京瑞利分析儀器公司）；制冷泵與真空泵一體機(jī)（鄭州世紀(jì)雙科實(shí)驗(yàn)儀器有限公司）；循環(huán)水式多用正空泵（鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司）。

13材料別嘌呤醇片（重慶青陽藥業(yè)有限公司）；氧嗪酸鉀鹽（Aladdin公司）；尿酸測定試劑盒、肌酐測定試劑盒（南京建成生物工程研究所）。

2方法

21赤蒼藤醇提物的制備取赤蒼藤莖葉干燥粉末，加入適量的75%乙醇加熱回流，抽濾，收集濾液?；亓?次，將3次回流所得濾液混合后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，將濃縮液冷凍干燥，得浸膏。各樣品組溶液在配制時(shí)均按生藥量計(jì)算。

22急性毒性測定因預(yù)實(shí)驗(yàn)無法測出赤蒼藤醇提取物的半數(shù)致死量（LD50），故進(jìn)行最大耐受量（MTD）的測定[5]。昆明種小鼠，雌雄各半，共10只。選擇人口服1025 g/d劑量的30倍為最大耐受量，折算為小鼠給藥劑量，按生藥量計(jì)算為40g/kg。實(shí)驗(yàn)前12 h禁食，每天灌胃2次，每次間隔6 h，藥容積均為10 mL/kg。灌胃后每日觀察1次，注意觀察記錄動物毒性反應(yīng)及死亡數(shù)，灌胃前后體重變化，共觀察14 d，對于所有的試驗(yàn)動物進(jìn)行尸檢，取心、肝、脾、肺、腎、等作大體觀察，稱質(zhì)量，做臟器系數(shù)分析。

23對高尿酸血癥小鼠的影響60只雄性昆明種小鼠隨機(jī)分為6組（每組10只），分為正常對照組、模型對照組（陰性對照）、別嘌醇組（陽性對照，10 mg/kg）、赤蒼藤醇提物低劑量組（750 mg生藥/kg）、中劑量（1500 mg生藥/kg）、高劑量組（3000 mg生藥/kg）、除正常對照組外，其余各組每天腹腔注射尿酸酶抑制劑氧嗪酸鉀（給藥量250 mg/kg，給藥容積為10 mL/kg）塑造小鼠高尿酸血癥模型并于造模2h后開始灌胃給藥，給藥容積為15 ml/kg，正常對照組和高尿酸血癥模型組（陰性對照）給予等量生理鹽水，連續(xù)給藥7d。第8天摘眼球采血，在4℃冰箱放置2h后離心20 min，3000 r/min分離血清，取上層澄清液按試劑盒說明測定血清尿酸及肌酐水平。

24統(tǒng)計(jì)學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS170軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，采用（x±s）表示，組間比較采用獨(dú)立t檢驗(yàn)，多組間比較采用方差分析，P<005表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

31赤蒼藤醇提取物對小鼠的急性毒性赤蒼藤醇提取物的小鼠最大耐受量試驗(yàn)的14d中，小鼠均表現(xiàn)正常，均未見死亡。14d中，灌胃后所有受試小鼠的毛色均光潔，其飲食、活動和大小便均正常，其眼、鼻和口腔均無異常分泌物，同時(shí)也未出現(xiàn)不良情況。灌胃前小鼠體重與灌胃后第5、10、12、14天后小鼠體重?zé)o明顯變化。見表1。14d后處死所有小鼠，解剖后，觀察受試小鼠的心、肝、脾、肺、腎和胃等臟器，均未見異常改變，臟器系數(shù)與正常組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>005）。見表2。

32對高尿酸血癥小鼠血清尿酸和肌酐水平的影響與正常組相比較，高尿酸血癥模型組血清尿酸顯著升高（P<001），說明建模成功。與高尿酸血癥模型組相比較，赤蒼藤醇提物各劑量組和別嘌呤醇組均能顯著降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平（P<001），并隨著赤蒼藤醇提物生藥量增加降尿酸作用呈現(xiàn)增強(qiáng)的趨勢。低劑量組的血清尿酸稍高于別嘌醇藥物治療組的，但中、高劑量組的血清尿酸水平低于別嘌醇藥物治療組及正常組的，說明中、高劑量組能降低高尿酸血癥小鼠血清尿酸水平在正常值以下。血清肌酐水平是評價(jià)腎功能的重要因子，腎功能損傷導(dǎo)致肌酐排泄障礙，從而引起機(jī)體肌酐水平的升高[6]。因此血清肌酐水平越高，表示腎功能越差。與正常組相比較，高尿酸血癥模型組小鼠血清肌酐水平均顯著升高（P<001），表明高尿酸血癥小鼠腎功能下降。與模型組相比較，赤蒼藤醇提物各劑量組和別嘌呤醇組均能抑制高尿酸血癥小鼠血清肌酐的升高。見表3。

4討論

高尿酸血癥與痛風(fēng)、高血壓、心血管疾病、腎臟疾病等有緊密的聯(lián)系[7]。高尿酸血癥可引起痛風(fēng)性急性關(guān)節(jié)炎反復(fù)發(fā)作、痛風(fēng)石性關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)畸形，更可累及腎臟引起慢性間質(zhì)性腎炎和腎結(jié)石等。加強(qiáng)對高尿酸血癥的研究，尋找防治痛風(fēng)等疾病防治藥物，具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義。本實(shí)驗(yàn)使用氧嗪酸鉀制造高尿酸血癥模型，其原理是氧嗪酸鉀能抑制動物體內(nèi)尿酸酶活性，使動物體內(nèi)的尿酸不能分解，造成血清尿酸生成增多的動物模型[8]。該模型在國際上使用較為普遍，可用于評價(jià)藥物的抗高尿酸血癥和痛風(fēng)的作用[9]。研究結(jié)果表明，赤蒼藤醇提物經(jīng)口給藥小鼠的最大給藥量為400g（生藥）/kg 時(shí)，小鼠體重及心臟、肝臟、脾臟、肝臟、腎臟系數(shù)均無顯著影響，證明赤蒼藤醇提取物無明顯急性毒性作用。

赤蒼藤醇提物各劑量組均能夠顯著降低高尿酸血癥小鼠的血清尿酸水平，降低高尿酸血癥小鼠體內(nèi)肌酐濃度，說明赤蒼藤醇提物是通過提高小鼠的腎功能，增加尿酸排泄來降低小鼠體內(nèi)尿酸水平，表明赤蒼藤將有可能成為預(yù)防和治療高尿酸血癥的新選擇。采用中藥化學(xué)成分預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法[10]及薄層色譜法對赤倉藤的主要化學(xué)成分進(jìn)行初步研究，結(jié)果提示赤蒼藤醇提取物中可能有香豆素類、黃酮類、酚類、三萜類、多糖等物質(zhì)，赤蒼藤醇提物的降尿酸作用為今后研究該植物的基礎(chǔ)物質(zhì)奠定基礎(chǔ)。

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