mTOR活化對(duì)抗β2GPI抗體/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞組織因子表達(dá)的影響*

夏龍飛，巨紅妹，周紅，王婷

(1.江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江 212013；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院檢驗(yàn)科，石家莊 050000)

·研究生園地·

mTOR活化對(duì)抗β2GPI抗體/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞組織因子表達(dá)的影響*

夏龍飛1,2，巨紅妹2，周紅1，王婷1

(1.江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江 212013；2.河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院檢驗(yàn)科，石家莊 050000)

目的 探討雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在抗β2糖蛋白I(β2GPI)/β2GPI復(fù)合物誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞組織因子(TF)表達(dá)中的作用。方法 用抗β2GPI抗體/β2GPI和β2GPI/IgG-APS處理THP-1細(xì)胞，mTOR抑制劑雷帕霉素(100 nmol/L)進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗(yàn)；收集細(xì)胞總RNA和蛋白質(zhì)，實(shí)時(shí)定量PCR(RT-qPCR)和TF活性試劑盒分別檢測(cè)THP-1細(xì)胞中TFmRNA表達(dá)水平及其活性，western blot檢測(cè)THP-1細(xì)胞中mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、p38、p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表達(dá)情況。結(jié)果 抗β2GPI抗體/β2GPI和β2GPI/IgG-APS復(fù)合物均能明顯增加THP-1細(xì)胞TFmRNA和TF活性以及mTOR磷酸化水平(P均<0.05)；雷帕霉素能明顯降低抗β2GPI抗體/β2GPI和β2GPI/IgG-APS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞TF的表達(dá)水平以及mTOR磷酸化的效應(yīng)(P均<0.05)，也能明顯地削弱p38、ERK1/2和NF-κB p65的磷酸化水平(P均<0.05)，而對(duì)JNK的磷酸化水平無(wú)抑制效應(yīng)(P>0.05)。結(jié)論 抗β2GPI抗體/β2GPI復(fù)合物能夠刺激THP-1細(xì)胞mTOR的活化，并能影響TF的表達(dá)。

抗磷脂綜合征；雷帕霉素靶蛋白；抗β2GPI抗體/β2GPI復(fù)合物；組織因子；雷帕霉素

抗磷脂綜合征(antiphospholipid syndrome，APS)是一種非器官特異性自身免疫性疾病，血栓形成是最重要的病理基礎(chǔ)和臨床表現(xiàn)[1]。研究表明，血清中高滴度的抗磷脂抗體(尤其是抗β2GPI抗體)可與β2GPI結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞和單核細(xì)胞表達(dá)組織因子(tissue factor，TF)，增加血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)[2-3]。研究表明，哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白復(fù)合物(the mammalian target of rapamycin complex，mTORC)通路在APS內(nèi)皮血管壁炎癥激活導(dǎo)致血管損傷的過(guò)程中起著關(guān)鍵作用[4]?？赏ㄟ^(guò)西羅莫司或雷帕霉素抑制mTOR來(lái)預(yù)防或縮小血管損傷后新內(nèi)膜的形成[5]。mTORC通路的激活在aPL/抗β2GPI抗體誘導(dǎo)血栓形成和激活內(nèi)皮細(xì)胞的過(guò)程中發(fā)揮重要作用[6]。然而，抗β2GPI抗體/β2GPI復(fù)合物能否在體外引起單核細(xì)胞內(nèi)mTOR的活化目前尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本研究旨在探討抗β2GPI抗體/β2GPI復(fù)合物能否誘導(dǎo)mTOR的活化，并分析mTOR對(duì)THP-1細(xì)胞TF表達(dá)的影響，以期為APS血栓形成的防治提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 主要材料和試劑 人單核細(xì)胞系THP-1(中科院上海研究所)；RPMI 1640 培養(yǎng)基(美國(guó)Gibco公司)；胎牛血清(美國(guó)Hyclone公司)；細(xì)胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)板(美國(guó)Corning公司)；雷帕霉素和MTT試劑(美國(guó)Sigma公司)；Trizol試劑(美國(guó)Invitrogen公司)；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒和定量PCR試劑盒(南京諾唯贊生物公司)；TF活性試劑盒(美國(guó)Assaypro公司)；RIPA裂解液(江蘇碧云天公司)；兔抗人mTOR、p-mTOR、p38、p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、NF-κB p65和p-NF-κB p65抗體(美國(guó)CST公司)；兔抗人β-actin抗體和HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG(美國(guó)Bioworld公司)；ECL顯色試劑(美國(guó)Millipore公司)；非特異性同型對(duì)照抗體R-IgG(武漢博士德公司)；兔抗人β2GPI多克隆抗體、來(lái)自APS患者的IgG(IgG-APS)和β2GPI均由本實(shí)驗(yàn)室制備；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 THP-1細(xì)胞培養(yǎng) 用RPMI 1640培養(yǎng)基(含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素、100 U/mL鏈霉素)培養(yǎng)THP-1細(xì)胞，置于37 ℃、5% CO2、飽和濕度的培養(yǎng)箱中溫育及傳代，取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的第3～8代的細(xì)胞用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

1.3 THP-1細(xì)胞處理

1.3.1 刺激實(shí)驗(yàn) 將狀態(tài)良好的THP-1細(xì)胞(1×106/孔)接種于6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，37 ℃、5% CO2條件下培養(yǎng)24 h，吸棄培養(yǎng)液， PBS洗滌3次，每孔加入2 mL無(wú)血清培養(yǎng)基饑餓過(guò)夜，吸棄上清液， PBS洗滌3次，用BSA(100 μg/mL)/抗-β2GPI抗體(10 μg/mL)、β2GPI(100 μg/mL)/R-IgG (10 μg/mL)、β2GPI(100 μg/mL)/抗β2GPI抗體(10 μg/mL)、β2GPI(100 μg/mL)/IgG-APS(250 μg/mL)和LPS(500 ng/mL)等刺激物處理細(xì)胞45 min、1 h 、2 h或6 h；以不加刺激物作為陰性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3.2 抑制實(shí)驗(yàn) 取上述THP-1細(xì)胞，用雷帕霉素(100 nmol/L)預(yù)處理16 h，再用β2GPI/抗β2GPI抗體、β2GPI/IgG-APS和LPS等刺激物刺激細(xì)胞1、2或6 h，刺激物濃度同上。以不加刺激物作為陰性對(duì)照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.4 MTT檢測(cè) 取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的THP-1細(xì)胞(1×104/孔)接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，常規(guī)培養(yǎng)24 h后，吸棄培養(yǎng)液，滅菌預(yù)冷的PBS洗滌3次，100 μL無(wú)血清培養(yǎng)基饑餓過(guò)夜，用濃度分別為20、40、80、100、200及500 nmol/L的雷帕霉素(Rapamycin)處理細(xì)胞24 h，每孔加入MTT溶液(5 mg/mL)20 μL，培養(yǎng)4 h，吸棄孔內(nèi)的液體，PBS洗滌3次，每孔加入二甲亞砜(DMSO)200 μL，37 ℃溫育5 min，光學(xué)顯微鏡下觀察孔內(nèi)所有結(jié)晶物徹底溶解后，在酶聯(lián)儀上讀取吸光度(A490 nm)值。

1.5 RNA的提取及逆轉(zhuǎn)錄 收集刺激物處理2 h的THP-1細(xì)胞(1×106/孔)至1.5 mL無(wú)RNA酶的EP管中，按Trizol試劑說(shuō)明書(shū)提取細(xì)胞總RNA，核酸定量?jī)x測(cè)定RNA濃度，取RNA純度(A260/280 nm)約為2.0的樣本用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，置-20 ℃保存。按逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明書(shū)操作將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，樣本置-20℃保存。

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR 根據(jù)GenBank中TF(NM_001178096.1)和β-actin(NM_001101.3)基因的序列，用Primer Premier 5.0軟件設(shè)計(jì)引物，并送上海生工公司合成。TF上游引物序列：5′-TCAGGTGATCCACCCACCTT-3′，下游引物序列：5′-GCACCCAATTTCCTTCCATTT-3′，退火溫度60 ℃，產(chǎn)物片段大小132 bp；β-actin上游引物序列：5′-CACGAAACTACCTTCAACTCC-3′，下游引物序列：5′-CATACTCCTGCTTGCTGATC-3′，退火溫度56 ℃，產(chǎn)物片段大小262 bp。PCR總反應(yīng)體系20 μL，包括AceQ?qPCR SYBR?Green Master Mix 10 μL，10 mol/L上、下游引物各0.5 μL，模板1.0 μL，滅菌ddH2O補(bǔ)足至20 μL。反應(yīng)參數(shù)：95℃ 預(yù)變性3 min；95℃ 30 s、60℃(TF)/56℃(β-actin)30 s，72 ℃ 30 s，共40個(gè)循環(huán)；72 ℃ 5 min。用CFX Manager軟件分析Ct值，經(jīng)內(nèi)參基因β-actin校正，采用2-△△Ct法計(jì)算目的基因的相對(duì)表達(dá)水平。計(jì)算公式：△Ct=Ct目的基因-Ct內(nèi)參基因，△△Ct=△Ct刺激組-△Ct對(duì)照組。

1.7 western blot檢測(cè) 收集處理45 min和1 h的THP-1細(xì)胞(1×106/孔)于1.5 mL EP 管中，加入100 μL RIPA裂解液，于冰上裂解1 h，4 ℃、12 000×g離心10 min，取蛋白質(zhì)裂解液上清至EP 管中，BCA法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，加入適量5×laoding buffer震蕩混勻，于100 ℃煮沸10 min，置-20 ℃保存。目的蛋白經(jīng)10% SDS-PAGE電泳(80 V電泳2～3 h，再以300 mA轉(zhuǎn)膜4 h)轉(zhuǎn)印至PVDF膜上；PVDF膜經(jīng)50 g/L脫脂牛奶封閉1 h；用TBS/T洗膜，分別加入兔抗人mTOR、p-mTOR、p38、p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、NF-κB p65或p-NF-κB p65抗體(均為1∶1 000稀釋)及兔抗人β-actin抗體(1∶2 500稀釋)4 ℃過(guò)夜；脫色搖床上TBS/T洗膜15 min，重復(fù)3次；加入HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG二抗(1∶2 000稀釋)室溫溫育1 h；脫色搖床上TBS/T洗膜15 min，重復(fù)3次；用ECL發(fā)光液進(jìn)行定影顯色，分子成像系統(tǒng)掃描條帶并讀取灰度值，計(jì)算磷酸化蛋白的灰度值與總蛋白灰度值的比值。

1.8 TF活性檢測(cè) 取處理6 h的THP-1細(xì)胞(1×106/孔)，用NP40裂解液冰上裂解1 h后，4 ℃、12 000×g離心10 min，取上清液，按照TF活性試劑盒說(shuō)明書(shū)檢測(cè)TF活性。酶聯(lián)儀檢測(cè)吸光度(A405 nm)值，結(jié)果以pmol/L表示。

2 結(jié)果

2.1 THP-1細(xì)胞TFmRNA 和TF活性的表達(dá) 與對(duì)照組相比，β2GPI/抗β2GPI抗體、β2GPI/IgG-APS和LPS刺激均能使TFmRNA表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=31.14，P<0.01,見(jiàn)圖1A)；TF活性也均明顯升高(F=34.59，P<0.01,見(jiàn)圖1B)。而同型抗原/抗體對(duì)照組的β2GPI/R-IgG和BSA/抗β2GPI抗體未能引起THP-1細(xì)胞TFmRNA 和TF活性的升高(P>0.05)。

注: 1，陰性對(duì)照組；2，抗β2GPI抗體/ BSA同型抗原對(duì)照組；3，β2GPI/R-IgG同型抗體對(duì)照組；4，β2GPI/抗β2GPI抗體刺激組；5，β2GPI/IgG-APS刺激組；6，LPS陽(yáng)性對(duì)照；*，與對(duì)照組比較，P<0.01。

圖1 不同條件下THP-1細(xì)胞TFmRNA 和TF活性的表達(dá)

2.2 western blot檢測(cè)THP-1細(xì)胞mTOR及p-mTOR蛋白的表達(dá) 結(jié)果表明，β2GPI/抗β2GPI抗體能明顯增強(qiáng)THP-1細(xì)胞mTOR磷酸化的水平并呈時(shí)間依賴(lài)性，在45 min時(shí)達(dá)到高峰(F=46.68，P<0.01，見(jiàn)圖2A)；與陰性對(duì)照組、BSA/抗β2GPI抗體和β2GPI/R-IgG對(duì)照組相比，β2GPI/抗β2GPI抗體和β2GPI/IgG-APS均能明顯增加p-mTOR的表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=89.71，P<0.01，見(jiàn)圖2B)。

注: 1，陰性對(duì)照組；2，抗β2GPI抗體/ BSA同型抗原對(duì)照組；3，β2GPI/R-IgG同型抗體對(duì)照組；4，β2GPI/抗β2GPI抗體刺激組；5，β2GPI/IgG-APS刺激組；6，LPS陽(yáng)性對(duì)照； A圖：*，與0 min比較，P<0.01；B圖：*，與陰性對(duì)照組比較，P<0.01。

圖2 β2GPI/抗β2GPI抗體和β2GPI/IgG-APS對(duì)THP-1細(xì)胞p-mTOR蛋白水平的影響

2.3 MTT和western blot檢測(cè)THP-1細(xì)胞活性以及mTOR和p-mTOR蛋白水平 MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同濃度的雷帕霉素均未影響THP-1細(xì)胞的活性(F=1.752,P>0.05，見(jiàn)圖3A)。western blot結(jié)果表明，雷帕霉素抑制mTOR磷酸化水平的最佳濃度為100 nmol/L(F=60.43，P<0.05，見(jiàn)圖3B)，且100 nmol/L累帕霉素抑制mTOR磷酸化水平的最佳時(shí)間點(diǎn)為16 h(F=19.59，P<0.05，見(jiàn)圖3C)。

注：與β2GPI/抗β2GPI抗體刺激組比較， *，P<0.05。

圖3 雷帕霉素對(duì)THP-1細(xì)胞mTOR磷酸化水平的影響

2.4 熒光定量PCR和TF活性試劑盒檢測(cè)THP-1細(xì)胞TFmRNA和TF活性 結(jié)果表明，雷帕霉素能顯著抑制抗β2GPI抗體/β2GPI、APS-IgG/β2GPI和LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞TFmRNA的表達(dá)(圖4A)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t分別為5.392、15.81、6.730，P均<0.05)；TF活性也被明顯抑制(圖4B)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t分別為7.017、3.525、6.149，P均<0.05)。

注：1，陰性對(duì)照組；2， β2GPI/抗β2GPI抗體刺激組；3，β2GPI/IgG-APS刺激組；4，LPS陽(yáng)性對(duì)照組；與無(wú)雷帕霉素處理組比較，*，P<0.05。

圖4 雷帕霉素對(duì)THP-1細(xì)胞表達(dá)TF的影響

2.5 western blot檢測(cè)THP-1細(xì)胞各信號(hào)通路蛋白的表達(dá) 雷帕霉素能夠明顯降低抗β2GPI/β2GPI和β2GPI/IgG-APS刺激THP-1細(xì)胞p38(t分別為4.294、2.919、4.762，P均<0.05，見(jiàn)圖5A)、ERK1/2(t分別為12.80、4.847、5.906，P均<0.05，見(jiàn)圖5B)和NF-κB p65(t分別為3.190、5.118、2.480，P均<0.05，見(jiàn)圖5D)的磷酸化水平，而對(duì)JNK的磷酸化水平無(wú)抑制效應(yīng)(t分別為0.388 1、0.513 5和0.556 7，P均>0.05，見(jiàn)圖5C)。

注： 1，陰性對(duì)照組；2， β2GPI/抗β2GPI抗體刺激組；3，β2GPI/IgG-APS刺激組；4，LPS陽(yáng)性對(duì)照組；*，與無(wú)雷帕霉素處理組比較，P<0.05。

圖5 雷帕霉素對(duì)Toll樣受體4下游信號(hào)分子蛋白的影響

3 討論

研究表明，抗β2GPI抗體在APS血栓形成的病理機(jī)制中發(fā)揮重要的作用，但具體機(jī)制尚不清楚[1-2]。大量的文獻(xiàn)證實(shí)，在患者體內(nèi)改變構(gòu)象的β2GPI作為抗原可與致病性抗β2GPI抗體形成復(fù)合物，再與血液?jiǎn)魏思?xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞表面受體結(jié)合，激活靶細(xì)胞，促使其分泌并釋放TF和大量的炎癥因子，從而增加血栓形成的風(fēng)險(xiǎn)[7-8]。本實(shí)驗(yàn)證實(shí)β2GPI/抗β2GPI抗體和β2GPI/IgG-APS均能夠誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)TFmRNA和增強(qiáng)TF活性，與我們前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致[9]。 近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，抗β2GPI抗體能通過(guò)激活PI3K-AKT-mOTR途徑引起血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，從而形成血栓[10]。關(guān)于β2GPI/抗β2GPI抗體能否引起單核細(xì)胞mTOR的活化鮮有報(bào)道。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)β2GPI/抗β2GPI抗體和β2GPI/IgG-APS均能夠明顯增加mTOR的磷酸化水平，并具有時(shí)間依賴(lài)性和特異性。

此外，本研究利用mTOR的特異性抑制劑雷帕霉素進(jìn)行干預(yù)實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步分析mTOR是否參與了抗β2GPI抗體/β2GPI誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)TF的過(guò)程。結(jié)果發(fā)現(xiàn)雷帕霉素能夠有效地抑制mTOR的磷酸化水平，且能夠顯著降低抗β2GPI抗體/β2GPI、APS-IgG/β2GPI和LPS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞TFmRNA和TF活性的表達(dá)水平，表明mTOR參與了抗β2GPI抗體/β2GPI誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞表達(dá)TF的過(guò)程。另有研究發(fā)現(xiàn)，雷帕霉素能通過(guò)抑制mTOR活化來(lái)上調(diào)LPS誘導(dǎo)單核細(xì)胞TF的表達(dá)[11]，這與本研究結(jié)果相反。我們推測(cè)原因是mTOR在LPS誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)TF的過(guò)程中具有雙刃劍的作用，又或者是雷帕霉素對(duì)LPS誘導(dǎo)單核細(xì)胞表達(dá)TF呈現(xiàn)劑量效應(yīng)，均需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)。

MAPKs和NF-κB在aPL誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)TF的過(guò)程中發(fā)揮重要的作用[12-14]，但mTOR與TLR4下游信號(hào)分子MAPKs和NF-κB之間是否交聯(lián)反應(yīng)目前還不得而知。研究顯示，雷帕霉素能通過(guò)下調(diào)MAPKs和NF-κB的活化來(lái)抑制TLR2誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)[15]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雷帕霉素能夠明顯降低抗β2GPI抗體/β2GPI和β2GPI/IgG-APS誘導(dǎo)THP-1細(xì)胞p38、ERK1/2和NF-κB p65的磷酸化水平，但對(duì)JNK的磷酸化水平無(wú)抑制作用。本研究結(jié)果表明mTOR與TLR4/MAPKs/NF-κB通路之間是存在交聯(lián)反應(yīng)的，但具體是怎樣的調(diào)控關(guān)系還需要進(jìn)一步研究。本研究存在的不足之處：(1)未選擇合適的mTOR活化標(biāo)志物(如p70S6K、S6、el-F4E和4E-BP)；(2)未排除FcγRs、TLR2等受體的影響；(3)未設(shè)置其他對(duì)照(如抗β2GPI抗體的Fc片段)；(4)未深入分析mTOR影響單核細(xì)胞TF表達(dá)的具體機(jī)制。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)mTOR能通過(guò)調(diào)控p38、ERK1/2和NF-κB的活化，影響抗β2GPI抗體/β2GPI誘導(dǎo)單核細(xì)胞TF的表達(dá)，提示抑制mTOR信號(hào)分子的藥物可用于防治APS血栓形成的潛在靶點(diǎn)。

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(本文編輯：許曉蒙)

Effects of mTOR activation on anti-β2GPI/β2GPI-stimulated tissue factor expression in THP-1 cells

XIALong-fei1,2,JUHong-mei2,ZHOUHong1,WANGTing1

(1.SchoolofMedicine,JiangsuUniversity,Zhenjiang212013,Jiangsu; 2.DepartmentofLaboratoryMedicine,TheFourthHospitalofHebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050000,Hebei,China)

Objective To investigate the role of mammalian target of rapamycin(mTOR) in the expression of tissue factor(TF) from THP-1 cells induced by β2GPI/anti-β2GPIcomplex. Methods The THP-1 cells were treated with both β2GPI/anti-β2GPI and β2GPI/IgG-APS(β2GPI/IgG from APS patients) complexes. Rapamycin(100 nmol/L), the mTOR inhibitor, was used to exert the intervention experiment. The total RNA and proteins of the THP-1 cells were collected for detection. The mRNA expression level and activity of TF in THP-1 cells were detected by real-time quatitative PCR(RT-qPCR) and TF activity kit respectively. western blot was used to determine the levels of mTOR and phosphorylated-mTOR(p-mTOR), and p38, p-p38, ERK1/2, p-ERK1/2, JNK, p-JNK, NF-κB p65 and p-NF-κB p65 in THP-1 cells were determined simultaneously. Results Both β2GPI/anti-β2GPI and β2GPI/IgG-APS complexes chould significantly upregulate the mRNA expression and activity of TF, and the phosphorylation levels of mTOR in THP-1 cells(P<0.05). Rapamycin markedly attenuated the mRNA expression and activity of TF and mTOR phosphorylation induced by β2GPI/anti-β2GPI and β2GPI/IgG-APS complexes(P<0.05), and also inhibited the phosphorylation levels of p38, ERK1/2 and NF-κB p65 in THP-1 cells induced by β2GPI/anti-β2GPI and β2GPI/IgG-APS complexes(P<0.05), but did not showed effects on the phosphorylation of c-Jun NH2-terminal protein kinase(JNK)(P>0.05). Conclusion mTOR could be activated by β2GPI/anti-β2GPI complexes in THP-1 cells and play a crucial role for β2GPI/anti-β2GPI-induced TF expression in THP-1 cells.

antiphospholipid syndrome; mammalian target of rapamycin(mTOR); anti-β2GPI/β2GPI complex; tissue factor; rapamycin

10.13602/j.cnki.jcls.2017.03.17

國(guó)家自然科學(xué)基金(81370614)。

夏龍飛，1987年生，男，博士研究生，主要從事血栓與止血方面的研究。

周紅，教授，博士研究生導(dǎo)師，E-mail:hongzhou@ujs.edu.cn。

R593.2

A

2017-01-28)