卡式微柱凝膠技術(shù)在ABO、RH（D）血型鑒定中的應(yīng)用

李金輝+黃秋燕+胡志愿+何秀琴+蘇丹+李豪柏

摘要：目的 探討卡式微柱凝膠技術(shù)在ABO、RH（D）血型鑒定中的主要應(yīng)用。方法 對(duì)英德市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科采集的45558例病人血液標(biāo)本同時(shí)采用卡式微柱凝膠法與傳統(tǒng)手工操作法進(jìn)行血型鑒定檢測(cè)。結(jié)果 卡式微柱凝膠法正確率為100%，手工法正確率為99%。兩種方法比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 卡式微柱凝膠法操作標(biāo)準(zhǔn)化，結(jié)果判定清晰準(zhǔn)確，具有很大的臨床應(yīng)用價(jià)值，值得推廣和應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：血型鑒定；手工操作法；卡式微柱凝膠法；

Application of Card Microsphere Gel in ABO， RH （D） Blood Type Identification

LI Jin-hui，HUANG Qiu-yan，HU Zhi-yuan，HE Xiu-qin，SU Dan，LI Hao-bai

（Yingde City People's Hospital Laboratory of Guangdong Province，Yingde 513000，Guangzhou，China）

Abstract：Objective To investigate the main application of card microcolumn gel technique in ABO and RH（D）blood group identification.Methods Blood samples were collected from 45558 patients collected by Yingde City People 's Hospital，and the blood type was detected by the method of card micro-column gel method and traditional manual method.Results The correct rate of card microcolumn gel was 100%，and the correct rate was 99%. There was no significant difference between the two methods（P>0.05）.Conclusion Cartridge microcolumn gel method is standardized，and the result is clear and accurate.It has great clinical value and worthy of popularization and application.

Key words：Blood type identification；Manual method；Card microcolumn gel method

血型鑒定在急診搶救、手術(shù)治療、貧血治療、獻(xiàn)血和輸血前檢查等過程中是不可缺少的試驗(yàn)，血型鑒定是否正確無誤，與臨床輸血是否安全有效息息相關(guān)。它的正確與否關(guān)系到病人生命安危。目前在國(guó)內(nèi)中小型醫(yī)院大多數(shù)采用手工操作法鑒定血型，由于手工操作法鑒定不易標(biāo)準(zhǔn)化，且干擾因素較多，觀察結(jié)果主觀性強(qiáng)，造成血型錯(cuò)檢時(shí)有發(fā)生。近年來卡式微柱凝膠ABO、RH（D）血型抗原試驗(yàn)在血型鑒定方面由于操作簡(jiǎn)單、易于標(biāo)準(zhǔn)化和判定結(jié)果清晰準(zhǔn)確在各級(jí)醫(yī)院推廣應(yīng)用普及。我院檢驗(yàn)科于2012年6月開始采用微柱凝膠法和傳統(tǒng)手工操作法進(jìn)行血型鑒定，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)道如下：

1資料與方法

1.1一般資料 全部病例血液標(biāo)本來自我院2015年1月～2016年5月住院及門診患者45558例，采集待檢者靜脈血液2ml，用常規(guī)EDTA-K2抗凝，分別進(jìn)行手工操作法和卡式微柱凝膠ABO、RH（D）血型抗原檢測(cè)法血型鑒定。

1.2儀器 離心機(jī)：采用中山市生科試劑儀器有限公司提供專用離心機(jī)。

1.3試劑

1.3.1卡式微柱凝膠ABO、RH（D）血型抗原鑒定試劑 中山市生科試劑儀器有限公司生產(chǎn)。

1.3.2手工鑒定操作法試劑 ABO 正定型抗-A、抗-B血清為上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)提供，RH（D）試劑為長(zhǎng)春博德生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.4鑒定方法

1.4.1卡式微柱凝膠ABO、RH（D）血型抗原檢測(cè)法 按中山市生科試劑儀器有限公司提供的說明書進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)操作和判讀結(jié)果。

1.4.1.1制備1%待檢紅細(xì)胞生理鹽水。

1.4.1.2撕開檢測(cè)卡的封膜，于A、B、D、Control微柱管反應(yīng)腔中加入1%待檢RBC生理鹽水懸浮液各50 ul。

1.4.1.3檢測(cè)卡置專用離心機(jī)，1800 r/min，2 min，2500 r/min， 1 min。

1.4.1.4取出判定結(jié)果 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)如下；凝集的紅細(xì)胞被排阻在具有三維空間網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠表層或凝膠顆粒間隙之中，判定為陽(yáng)性結(jié)果，表示待檢紅細(xì)胞含有相應(yīng)血型抗原；RBC全部沉積于凝膠孔腔底部，判定為陰性結(jié)果，表示待測(cè)待檢紅細(xì)胞不含有相應(yīng)血型抗原。

1.4.2手工操作 按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》[1]規(guī)定進(jìn)行。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)數(shù)資料結(jié)果用率表示，統(tǒng)計(jì)方法采用？字2檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

將上述兩種方法的鑒定結(jié)果進(jìn)行比較，如果所檢測(cè)血型結(jié)果不符合者，將標(biāo)本血液紅細(xì)胞用生理鹽水離心洗滌3次，再用兩種方法重復(fù)測(cè)定檢查，統(tǒng)計(jì)出正確百分率。

3討論

微柱凝膠技術(shù)是1994年獲得美國(guó)FDA批準(zhǔn)的一項(xiàng)免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，其特異性、靈敏度試驗(yàn)、重復(fù)性、穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果符合其性能指標(biāo)要求。目前已在歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家作為常規(guī)性檢測(cè)技術(shù)廣泛應(yīng)用于臨床[2-3]?？ㄊ轿⒅z法是抗原抗體反應(yīng)與凝膠分子篩技術(shù)相結(jié)合的產(chǎn)物。通過調(diào)節(jié)葡聚糖凝膠的濃度來控制分子篩孔徑大小，使分子篩只允許單個(gè)紅細(xì)胞通過，從而達(dá)到分離凝集紅細(xì)胞和游離紅細(xì)胞的目的。即將紅細(xì)胞和血清加在凝膠的上部反應(yīng)離心以后，凝集紅細(xì)胞將受到凝膠的阻礙而停留在凝膠的上部或凝膠中，則證明發(fā)生凝集反應(yīng)為陽(yáng)性，反之，所有紅細(xì)胞都停留在凝膠腔底部，證明未發(fā)生凝集反應(yīng)，則可判為凝集反應(yīng)陰性。

卡式微柱凝膠ABO、RH（D）血型抗原檢測(cè)法采用標(biāo)準(zhǔn)化定量操作，最大限度減少了實(shí)驗(yàn)室操作人員的主觀性，隨意性，重復(fù)性好，由于采用了凝膠分子篩技術(shù)， 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)，大大提高了血型鑒定技術(shù)的靈敏度，安全性。將凝集紅細(xì)胞與游離紅細(xì)胞分離開，使試驗(yàn)結(jié)果一目了然，避免了鏡下的主觀影響和人為因素失誤。所需檢測(cè)標(biāo)本量少，大約為手工法用血量的1/2～1/4，尤其適用于新生兒、大面積燒傷等患者標(biāo)本不易抽取采集血液的待檢測(cè)者?？ㄊ轿⒅z法操作簡(jiǎn)便，省去繁瑣的洗滌紅細(xì)胞過程，不再擔(dān)心抗人球蛋白抗體被中和而產(chǎn)生假陰性影響導(dǎo)致血型鑒定錯(cuò)誤發(fā)生。便于保存，一般置室溫可保存數(shù)月至1年，還可進(jìn)行拍照攝像取證提供永久記錄，以備發(fā)生血型鑒定差錯(cuò)和發(fā)生醫(yī)療糾紛時(shí)查找原始資料方便核查。

綜上所述，鑒于卡式微柱凝膠法具有以上的優(yōu)點(diǎn)，雖然成本相對(duì)較高，但具有很大的臨床應(yīng)用價(jià)值，值得推廣和應(yīng)用。

參考文獻(xiàn)：

[1]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程[M].第3版.南京：東南大學(xué)出版社，2006：135.

[2]Titlestad K，Georgsen J，Andersen H，et al.Detection of irregular red cell antibodies：more than 3 years of experience with a gel technique and pooled screening cells[J].Vox Sanguinis，1997，73（4）：246.

[3]Langston M M，Lynn P J，Cipolone K M，et al.Evaluation of the gel system for ABO grouping and D typing[J].Transfusion，1999，39（3）：300-305.編輯/雷華