高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方黃芪顆粒中黃芪苷的含量

杜麗+薛利東

摘 要：本文采用高校液相測(cè)定了復(fù)方黃芪顆粒中黃芪苷的含量，固定相為：安捷倫Cl8（4.6mm×250mm，5um），乙腈-水（23∶77）（用冰醋酸調(diào)pH至3.85）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為346nm，流速1.0mL·min-1，柱溫：30℃。黃芪苷在50～500μg·mL-1范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。黃芪苷的平均回收率為99.5%，RSD為0.73%（n=6）；此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方黃芪顆粒中黃芪苷的含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞：復(fù)方黃芪顆粒；黃芪苷；含量

黃芪為復(fù)方黃芪顆粒主要成分之一。黃芪具有補(bǔ)氣固表，利尿托毒，排膿，斂瘡生肌的功效。黃芪常用于氣虛乏力，便血崩漏，表虛自汗，食少便溏，久瀉脫肛，癰疽難潰，久潰不斂，中氣下陷，血虛萎黃，內(nèi)熱消渴等。但食積停滯，表實(shí)邪盛，氣滯濕阻，癰疽初起或潰后熱毒尚盛等實(shí)證，以及陰虛陽(yáng)亢者，均須禁服黃芪?！端幤坊x》記載："若氣有余，表邪旺，腠理實(shí)，三焦火動(dòng)，宜斷戒之。至於中風(fēng)手足不遂，痰壅氣閉，始終皆不加。"現(xiàn)在藥理研究表明黃芪具有增強(qiáng)機(jī)體免疫功能、調(diào)節(jié)血壓、抗病毒性心肌炎、增強(qiáng)造血功能、改善物質(zhì)代謝、增強(qiáng)性腺功能、抗應(yīng)激、延緩衰老、保肝、抗?jié)兊茸饔肹1-5]。黃芪臨床常用于高血壓病、缺血性心臟病、銀屑病、糖尿病、幽門(mén)螺旋桿菌陽(yáng)性胃潰瘍、慢性鼻炎、急性腎小球腎炎、骨質(zhì)疏松等。本文采用高校液相測(cè)定了復(fù)方黃芪顆粒中黃芪苷的含量。

1 儀器與試藥

HH-601超級(jí)恒溫水浴（江蘇金壇市億通電子有限公司）；海能LC7000四元低壓梯度系統(tǒng)（濟(jì)南海能儀器股份有限公司）；屹譜儀器U-1810準(zhǔn)雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（屹譜儀器制造（上海）有限公司）；UV-6雙光束掃描型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海美譜達(dá)儀器有限公司）；舜宇恒平AE電子天平（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司）；Histoon Lab I-05實(shí)驗(yàn)室超純水機(jī)（科爾頓（中國(guó)）有限公司）；10升數(shù)控型超聲波清洗器（天津市瑞普電子儀器公司）。黃芪苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。乙腈（河南巴福斯化工產(chǎn)品有限公司）、乙醇（河南巴福斯化工產(chǎn)品有限公司）、磷酸（淄博豐倉(cāng)化工有限公司）、甲醇（天津威賽諾科技發(fā)展有限公司）、冰醋酸（濟(jì)南英出化工科技有限公司）、磷酸氫二鈉（濟(jì)南英出化工科技有限公司）、三乙胺（河南巴福斯化工產(chǎn)品有限公司）。

2 含量測(cè)定

2.1 色譜條件：依據(jù)查閱文獻(xiàn)及考查的結(jié)果 ，確定色譜條件如下。色譜柱為安捷倫Cl8規(guī)格為（4.6 mm×250 mm，5um）；乙腈-水（23∶77）（用冰醋酸調(diào)pH至3.85）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為346nm。理論板數(shù)按黃芪苷峰計(jì)算應(yīng)不得低于2000。

2.2 供試品溶液的制備

取復(fù)方黃芪顆粒，研細(xì)，精密稱(chēng)取，加60毫升50%乙醇溶液超聲處理0.5小時(shí)，放冷，濾過(guò)，濾液置100ml量瓶中，用50%乙醇溶液分次洗滌容器和殘?jiān)匆簽V人同一量瓶中，加50%乙醇溶液至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3 對(duì)照品溶液的制備

精密稱(chēng)取黃芪苷對(duì)照品約5mg，用流動(dòng)相溶解并稀釋成每1ml中含200μg的溶液，作為對(duì)照溶液。

2.4 陰性溶液的制備

依照處方取五味子、補(bǔ)骨脂、女貞子等，按樣品制備工藝制成陰性對(duì)照樣品，照供試品溶液的制備方法制成陰性液，依上述方法測(cè)定，結(jié)果在黃芪苷出峰處陰性液無(wú)色譜峰，結(jié)果陰性試驗(yàn)沒(méi)有干擾，表明本方法專(zhuān)屬性良好。

2.5 準(zhǔn)曲線的制備

制備濃度為50、100、150、200、250、300、350、400、450、500μg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別精密吸取10μL注入HPLC，記錄色譜圖。以峰面積積分值A(chǔ)（μg）為橫坐標(biāo)，進(jìn)樣量為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。試驗(yàn)表明，黃芪苷對(duì)照品在50～500μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下制備對(duì)照品溶液，精密吸取黃芪苷對(duì)照品溶液10μL重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積積分值，對(duì)照品峰面積積分值的RSD為0.76%。結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn)

稱(chēng)取同一批的復(fù)方黃芪顆粒樣品6份，按測(cè)定方法項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，測(cè)定含量，并計(jì)算樣品的RSD值，結(jié)果RSD為0.65%，結(jié)果表明此方法的重現(xiàn)性良好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

依照2.3項(xiàng)下供試品制備方法制備供試品溶液，分別在0，2，4，8小時(shí)精密吸取供試品溶液注入液相色譜儀，進(jìn)樣測(cè)定，供試品黃芪苷峰面積積分值的RSD為0.73%。結(jié)果表明黃芪苷至少在8小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

2.9 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收試驗(yàn)，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱(chēng)定，分精密添加一定量的黃芪苷對(duì)照品，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測(cè)定含量（同時(shí)測(cè)定樣品含量），計(jì)算回收率。6次測(cè)定的平均回收率為99.5%，RSD為0.73%。

2.10 樣品含量測(cè)定

依照上述含量測(cè)定方法，測(cè)定復(fù)方黃芪顆粒三批樣品中黃芪苷的含量，含量為3.26mg/袋、3.16mg/袋、3.34mg/袋。

3 討論

分別考察乙腈-水（23∶77）（用冰醋酸調(diào)pH至3.85），甲醇-水-冰醋酸（28∶72∶0.1），水-甲醇-三乙胺（60∶40：0.01），乙腈-0.08%磷酸溶液（20：80），磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鈉二水合物15.04g、磷酸氫二鈉0.0627g，加水溶解并稀釋至1000ml，調(diào)節(jié)pH值至4.5）一甲醇（70：30）不同比例的流動(dòng)相，結(jié)果以乙腈-水（23∶77）（用冰醋酸調(diào)pH至3.85）為流動(dòng)相，供試品各峰分離效果最好，故選用乙腈-水（23∶77）（用冰醋酸調(diào)pH至3.85）為流動(dòng)相。此方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于復(fù)方黃芪顆粒中黃芪苷的含量測(cè)定。復(fù)方黃芪顆粒中黃芪苷的含量應(yīng)為標(biāo)示量的95%-105%。

參考文獻(xiàn)

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