葡聚糖凝膠色譜法測定鹽酸頭孢替安中聚合物

張立娟

摘 要：本文采用高效液相測定了鹽酸頭孢替安中聚合物的含量，固定相為葡聚糖凝膠Sephadex G-10柱（300mm×15mm），流動相A為pH7.0的0.05mol/L磷酸鹽緩沖液[0.05mol/L磷酸氫二鈉溶液：0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液（60：40）]，流動相B為水；流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為254nm。頭孢替唑鈉質(zhì)量濃度在10.0～320.0mg/mL范圍內(nèi)與聚合物峰面積之間線性關(guān)系良好。鹽酸頭孢替安樣品溶液的質(zhì)量濃度在10.0～40.0mg/mL范圍內(nèi)與聚合物峰面積之間線性關(guān)系良好。此方法簡便、準確、重現(xiàn)性好，可用于鹽酸頭孢替安中聚合物的含量測定。

關(guān)鍵詞：鹽酸頭孢替安；含量；高效液相

鹽酸頭孢替安適應(yīng)癥為主要用于對本品敏感的普通變形桿菌，葡萄球菌屬、流感桿菌、克雷白桿菌屬、腸道菌屬、大腸桿菌、肺炎球菌、枸櫞酸桿菌屬、奇異變形桿菌，雷特格氏變形桿菌，摩根氏變形桿菌等所致下列感染：膿胸，膽管炎，燒傷感染，骨髓炎，膽囊炎，膀胱炎，敗血癥，化膿性關(guān)節(jié)炎，支氣管炎，術(shù)后感染，肺化膿癥，尿路炎，前列腺炎，腦脊膜炎，子宮內(nèi)膜炎，前庭大腺炎、中耳炎、副鼻竇炎等[1]。高分子化合物是由千百個原子彼此以共價鍵結(jié)合形成相對分子質(zhì)量特別大、具有重復(fù)結(jié)構(gòu)單元的有機化合物，也稱為高分子、大分子等。由于高分子多是由小分子通過聚合反應(yīng)而制得的，因此也常被稱為聚合物或高聚物。樣品相對分子質(zhì)量的差異進行分離的凝膠色譜法具有明顯的優(yōu)勢。因此本文采用高效液相法對制劑中聚合物進行含量測定，為鹽酸頭孢替安的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

ULABO 實驗室溫度控制器（優(yōu)萊博技術(shù)（北京）有限公司）； 實驗室用高純水制備器（北京科譽興業(yè)科技發(fā)展有限公司）；SCQ？-8201B全不銹鋼數(shù)控加熱超聲波清洗機（上海聲彥超聲波儀器有限公司）；EX1700S-HPLC超高效液相色譜儀（上海伍豐科學儀器有限公司）；PA225型DCPA卓越電子分析天平（上海金鵬分析儀器有限公司）；R-1001-VN旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；UV2800雙光束紫外可見分光光度計（四川匯巨儀器設(shè)備有限公司）。鹽酸頭孢替安對照品（中國藥品生物制品檢定所提供）。甲醇（北京京科瑞達科技有限公司）、乙腈（廣州自力色譜科儀有限公司）、冰醋酸（廣州自力色譜科儀有限公司）、磷酸氫二鈉（天津市正化化工公司）、磷酸二氫鈉（北京京科瑞達科技有限公司）、三乙胺（天津市正化化工公司）、磷酸（北京京科瑞達科技有限公司）。

2 含量測定

2.1 色譜條件

色譜柱為葡聚糖凝膠Sephadex G-10柱（300mm×15mm），流動相A為pH7.0的0.05mol/L磷酸鹽緩沖液[0.05mol/L磷酸氫二鈉溶液：0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液（60：40）]，流動相B為水；流速為1.0mL/min，柱溫為30℃，檢測波長為254nm[2-5]。

2.2 供試品溶液的制備

精密量取鹽酸頭孢替安適量，置10mL量瓶中，加水適量，超聲處理5分鐘，放置至室溫，加水稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，即得。

2.3 對照品溶液的制備

精密稱取鹽酸頭孢替安對照品適量，用水配置成每1mL溶液中含鹽酸頭孢替安0.1mg。

2.4 標準曲線的制備

制備濃度為10.0、20.0、40.0、80.0、160.0、320.0mg·mL-1的頭孢替唑鈉對照品溶液，分別吸取上述對照品溶液注入HPLC，以流動相B為流動相進行測定，記錄色譜圖，以吸收峰面積對質(zhì)量濃度進行線性回歸，得標準曲線方程。試驗表明，頭孢替唑鈉質(zhì)量濃度在10.0～320.0mg·mL-1范圍內(nèi)與聚合物峰面積之間線性關(guān)系良好。制備濃度為10.0、15.0、20.0、25.0、30.0、35.0、40.0mg·mL-1的頭孢替唑鈉樣品溶液，分別吸取上述對照品溶液注入HPLC，以流動相A為流動相進行測定，記錄色譜圖，以吸收峰面積對樣品質(zhì)量濃度進行線性回歸，得線性方程。結(jié)果表明鹽酸頭孢替安樣品溶液的質(zhì)量濃度在10.0～40.0mg/mL范圍內(nèi)與聚合物峰面積之間線性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗

精密吸取鹽酸頭孢替安對照品溶液，以流動相B為流動相連續(xù)進樣5次測定峰面積積分值，對照品峰面積積分值的RSD為0.96%。結(jié)果表明，本方法具有良好的精密度。

2.6 重現(xiàn)性試驗

分別稱取同批鹽酸頭孢替安樣品6份，依照含量測定項下方法，測定含量，并計算樣品的RSD值為1.32%。結(jié)果表明，此含量測定方法的重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗

取鹽酸頭孢替安樣品，分別在0，2，4，8小時注入高效液相色譜儀，以流動相A為流動相，進樣測定。結(jié)果表明聚合物質(zhì)量分數(shù)隨著時間增加很快，因此樣品溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配。

2.8 回收率試驗

采用加樣回收試驗，取已知含量的同一批供試品各6份，精密稱定，分精密添加一定量的聚合物，按供試品制備所述方法制備供試品溶液，測定含量（同時測定樣品含量），計算回收率。6次測定的平均回收率為98.1%，RSD為1.22%。

2.9 樣品含量測定

依照上述含量測定方法，測定鹽酸頭孢替安三批樣品中聚合物的含量，結(jié)果三批樣品的含量分別為0.15%、0.16%、0.18%。

3 討論

本實驗還對實驗溫度進行了考察，分別采用15攝氏度、20攝氏度、25攝氏度、30攝氏度、35攝氏度進行實驗。結(jié)果發(fā)現(xiàn)溫度升高對分離度影響較大，當溫度由15℃升高到25℃過程中分離度變化較大，當溫度由25℃升高到35℃過程中分離度變化較小，所以選擇30攝氏度為實驗溫度。本文對鹽酸頭孢替安中的聚合物進行含量測定的試驗方法，結(jié)果表明該法不受其它成分的干擾，分離度好，精密度、重現(xiàn)性佳，可用于鹽酸頭孢替安中聚合物的含量測定。聚合物的含量應(yīng)小于0.5%。

參考文獻

[1]韓彬，劉立濤，邵振俊，柏楊，周黎明.進口頭孢替安酯體內(nèi)外抗菌作用的實驗研究[J].四川生理科學雜志，2016（02）.

[2]任鳳英，李強，楊晨，黎鵬，秦川蓉.RP-HPLC法測定鹽酸頭孢替安酯的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].國外醫(yī)藥（抗生素分冊），2012（06）.

[3]常明，周冉，鄖海麗，胡瑞省，張占飛，孟小龍，呂磊.注射用鹽酸頭孢替安高分子聚合物測定方法研究[J].中國抗生素雜志，2014（08）.

[4]唐群星，劉明東，顏有儀，葉懿，王智慧，詹蘭芬，廖林川.HPLC-MS/MS分析鹽酸頭孢替安酯中未知雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)[J].四川大學學報（醫(yī)學版），2013（03）.

[5]周順光，楊定勇，李勇，李榮東.反相高效液相色譜法測定鹽酸頭孢替安酯含量及有關(guān)物質(zhì)[J].中南藥學，2011（10）.