糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體2和血小板反應(yīng)性蛋白-1的表達(dá)

王云楓 連 續(xù) 郭常秀 李 娟

(牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院內(nèi)分泌科，黑龍江 牡丹江 157000)

糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體2和血小板反應(yīng)性蛋白-1的表達(dá)

王云楓 連 續(xù) 郭常秀 李 娟1

(牡丹江醫(yī)學(xué)院附屬紅旗醫(yī)院內(nèi)分泌科，黑龍江 牡丹江 157000)

目的 檢測(cè)糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、VEGF受體(VEGFR)-2和血小板反應(yīng)性蛋白(TSP)-1的水平，分析其臨床意義。方法 48例2型糖尿病(T2DM)伴有視網(wǎng)膜病變患者作為觀察組，T2DM不伴有視網(wǎng)膜病變患者24例作為對(duì)照組，15例體檢證實(shí)為健康成人血清標(biāo)本作為正常對(duì)照組，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)檢測(cè)3組血清VEGF、VEGFR-2和TSP-1的表達(dá)。結(jié)果 3組血清中VEGF、VEGFR-2和TSP-1的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。觀察組中VEGF、VEGFR-2和TSP-1的表達(dá)與是否為增殖期密切相關(guān)。觀察組中VEGF和VEGFR-2正相關(guān)，其他指標(biāo)間無(wú)相關(guān)性。結(jié)論 血清中VEGF和VEGFR-2高表達(dá)、TSP-1低表達(dá)與糖尿病伴有視網(wǎng)膜病變患者病變的形成和進(jìn)展有關(guān)。VEGF、VEGFR-2和TSP-1的檢測(cè)可能對(duì)糖尿病視網(wǎng)膜病變的早期診斷和治療有一定幫助。

糖尿?。灰暰W(wǎng)膜病變；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)；VEGF受體-2；血小板反應(yīng)性蛋白(TSP)-1

糖尿病視網(wǎng)膜病是糖尿病最常見(jiàn)的微血管并發(fā)癥，也是引起致盲的疾病之一，其病因復(fù)雜〔1〕；近年相關(guān)研究顯示與血管生成有關(guān)的細(xì)胞因子在病變的發(fā)生發(fā)展中有重要作用〔2〕。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)是目前已知最強(qiáng)的內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂原和血管生成因子，其受體是VEGF受體(VEGFR)-2，二者高表達(dá)對(duì)血管生成有一定促進(jìn)作用〔3,4〕。血小板反應(yīng)性蛋白(TSP)-1是一種重要的細(xì)胞外基質(zhì)糖蛋白，可以影響和調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞黏附、運(yùn)動(dòng)和增殖，是一種有效的內(nèi)源性血管生成的抑制因子〔5〕。本研究觀察糖尿病視網(wǎng)膜病變患者血清中VEGF、VEGFR-2和TSP-1的表達(dá)，分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2014年1月至2015年12月紅旗區(qū)院確診2型糖尿病(T2DM)伴有視網(wǎng)膜病變的患者48例作為觀察組，其中男25例，女23例，年齡40～72歲，平均52.5歲，其中增殖期27例，非增殖期21例。T2DM不伴有視網(wǎng)膜病變的患者24例作為對(duì)照組，其中男12例，女12例，年齡40～67歲，平均50.9歲。排除急慢性炎癥、高血壓、冠心病、腎病等疾病。15例體檢健康的成人血清標(biāo)本作為正常對(duì)照組，其中男8例，女7例，年齡25～62歲，平均50.7歲。3組一般資料無(wú)明顯差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 VEGF、VEGFR-2和TSP-1的檢測(cè) 3組均常規(guī)抽取清晨空腹靜脈血3 ml，1 500 r/min離心20 min后，分離血清，并置于-20℃冰箱中凍存。VEGF、VEGFR-2和TSP-1的檢測(cè)均應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)法，樣本均于1個(gè)月內(nèi)集中檢測(cè)，嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作，做好質(zhì)控工作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)或方差分析、線性相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 3組血清VEGF、VEGFR-2和TSP-1表達(dá)比較 3組血清VEGF、VEGFR-2和TSP-1表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。見(jiàn)表1。

組別nVEGFVEGFR-2TSP-1觀察組48241.40±122.69126.72±32.5196.67±22.61對(duì)照組24186.85±86.7794.57±28.68164.54±57.68正常對(duì)照組1587.66±23.6131.71±10.45249.56±83.64F/P值8.71/0.0088.08/0.0139.68/<0.001

2.2 觀察組中是否為增殖期患者血清中VEGF、VEGFR-2和TSP-1表達(dá)的比較 觀察組中VEGF、VEGFR-2和TSP-1的表達(dá)與是否為增殖期密切相關(guān)(均P<0.05)。見(jiàn)表2。

增殖期nVEGFVEGFR-2TSP-1否27227.71±82.71108.78±39.92104.57±20.98是21267.87±76.96141.68±29.8784.08±17.79t/P值6.75/0.0197.15/0.0115.88/0.024

2.3 觀察組中VEGF、VEGFR-2和TSP-1表達(dá)水平的相關(guān)性 VEGF和VEGFR-2呈正相關(guān)(r=0.47,P=0.035)，而其他指標(biāo)間無(wú)相關(guān)性(P>0.05)。

3 討 論

糖尿病視網(wǎng)膜病變的發(fā)生發(fā)展與微血管形成、血管內(nèi)皮細(xì)胞的損傷有密切關(guān)系。增殖期糖尿病性視網(wǎng)膜病變出現(xiàn)新生的毛細(xì)血管及增殖性的病變特征，新生血管的形成是從血管內(nèi)皮細(xì)胞出芽開(kāi)始，通過(guò)內(nèi)界膜伸展到視網(wǎng)膜的表面，在視盤(pán)前新生血管出現(xiàn)明顯的纖維性增殖，呈扇形或輻射狀伸長(zhǎng)，黏附在玻璃體的后半部，部分新生物可以突入玻璃體中，引起出血和視網(wǎng)膜的脫離。有研究認(rèn)為血清中細(xì)胞因子的水平能間接反映玻璃體內(nèi)相應(yīng)細(xì)胞因子的表達(dá)水平〔6〕。VEGF是經(jīng)典的血管生成因子，是一種具有肝素結(jié)合活性的二聚體糖蛋白，可以由多種腫瘤細(xì)胞和一些正常細(xì)胞產(chǎn)生，主要作用是促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和誘導(dǎo)新生血管的形成〔7,8〕。VEGF在發(fā)揮生物學(xué)作用時(shí)常與受體VEGFR-2結(jié)合，此時(shí)可以特異性地直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，并引起內(nèi)皮細(xì)胞的增生繁殖。另外VEGF還能通過(guò)改變細(xì)胞外基質(zhì)和上調(diào)細(xì)胞黏附分子-1的表達(dá)，使血-視網(wǎng)膜屏障受到破壞，促進(jìn)新生血管的生成〔9〕。有觀點(diǎn)認(rèn)為VEGF對(duì)于確保有足夠血液供應(yīng)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞和光感受器，維持和保護(hù)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的功能有重要作用。眼內(nèi)VEGF是動(dòng)態(tài)平衡的，其平衡失調(diào)不僅干擾正常眼血管生成的功能，還可以影響眼部的神經(jīng)功能，甚至影響正常眼血管和視網(wǎng)膜的血液供應(yīng)，同時(shí)出現(xiàn)較多并發(fā)癥〔10〕。TSP-1是血管生成的抑制因子，可以抑制纖維生長(zhǎng)因子或VEGF誘導(dǎo)的血管生成反應(yīng)，通過(guò)多種途徑抑制內(nèi)皮細(xì)胞的黏附，有效阻止內(nèi)皮細(xì)胞的遷移過(guò)程〔11,12〕。

本研究提示VEGF、VEGFR-2高表達(dá)和TSP-1低表達(dá)與糖尿病視網(wǎng)膜病變的形成有關(guān)。VEGF、VEGFR-2和TSP-1的異常表達(dá)使視網(wǎng)膜局部的血管生成和抑制作用平衡失調(diào)，此時(shí)血管生成占優(yōu)勢(shì)，內(nèi)皮細(xì)胞增生明顯〔13〕。本文結(jié)果提示VEGF、VEGFR-2和TSP-1的異常表達(dá)與病變的進(jìn)展有關(guān)。VEGF、VEGFR-2二者在病變形成中具有協(xié)同作用。糖尿病性視網(wǎng)膜病的特征是視網(wǎng)膜微血管系統(tǒng)出現(xiàn)進(jìn)行性改變，主要表現(xiàn)為血管高滲透性、血管閉塞、新生血管化三種變化。在視網(wǎng)膜微血管受到明顯損害時(shí)，視網(wǎng)膜局部組織出現(xiàn)缺血、缺氧的改變，此時(shí)能明顯誘導(dǎo)新生血管的形成〔14〕。也有研究顯示缺血可以誘導(dǎo)VEGF及其受體的產(chǎn)生，這是視網(wǎng)膜增殖反應(yīng)的啟動(dòng)因素〔15〕，而VEGF是一種特異性刺激血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的重要因子，糖尿病患者長(zhǎng)期的高血糖使糖酵解過(guò)程受阻，葡萄糖不能經(jīng)正常途徑分解，進(jìn)而激活山梨醇旁路，引起毛細(xì)血管周細(xì)胞內(nèi)山梨醇蓄積。此時(shí)增強(qiáng)了葡萄糖對(duì)視網(wǎng)膜毛細(xì)血管周細(xì)胞的毒性，也增加了周細(xì)胞內(nèi)活性氧簇，降低了DNA的合成，此時(shí)為VEGF的分泌創(chuàng)造了條件。由于周細(xì)胞具有一定的收縮性，能有效調(diào)節(jié)毛細(xì)血管床的流量，而周細(xì)胞的損傷使其喪失了對(duì)視網(wǎng)膜血流量的調(diào)節(jié)作用，破壞了毛細(xì)血管的完整性，同樣引起血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生失控。TSP-1在發(fā)揮血管抑制作用過(guò)程可能也是多元性的。TSP-1可以與血管內(nèi)皮受體CD36結(jié)合抑制內(nèi)皮細(xì)胞的遷移，拮抗毛細(xì)血管的生成〔16〕，也有研究認(rèn)為T(mén)SP-1對(duì)血管的調(diào)節(jié)可能與誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用有關(guān)〔17〕。甚至有學(xué)者發(fā)現(xiàn)TSP-1的衍生物在體外可以直接殺傷內(nèi)皮細(xì)胞〔18〕。因此血管生成促進(jìn)因子(VEGF和VEGFR-2)與抑制因子(TSP-1)的這種失衡使血管內(nèi)皮細(xì)胞增生明顯，血管新生活躍。

綜上，血清中VEGF和VEGFR-2高表達(dá)、TSP-1低表達(dá)與糖尿病伴有視網(wǎng)膜病變患者病變的形成和進(jìn)展有關(guān)；VEGF、VEGFR-2和TSP-1的檢測(cè)可能對(duì)其病變的早期診斷和治療有一定幫助。

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〔2015-12-23修回〕

(編輯 苑云杰)

牡丹江市科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目(No.Z2015s0036)

1 眼科

李 娟(1980-)，女，碩士，主治醫(yī)師，主要從事眼科學(xué)研究。

王云楓(1981-)，男，碩士，主治醫(yī)師，主要從事內(nèi)分泌學(xué)研究。

R587.2

A

1005-9202(2017)07-1651-02；

10.3969/j.issn.1005-9202.2017.07.035