T細(xì)胞亞群與NK細(xì)胞在初診非小細(xì)胞肺癌患者外周血中的水平以及與預(yù)后的相關(guān)性分析

張潤(rùn)萍，武曉波，戚 潔

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·臨床醫(yī)學(xué)· ·短篇論著·

T細(xì)胞亞群與NK細(xì)胞在初診非小細(xì)胞肺癌患者外周血中的水平以及與預(yù)后的相關(guān)性分析

張潤(rùn)萍，武曉波，戚 潔

目的 探討T細(xì)胞亞群與自然殺傷性淋巴細(xì)胞(NK細(xì)胞)在初診非小細(xì)胞肺癌患者外周血中的水平以及與預(yù)后的相關(guān)性。方法 選擇2010年1月至2012年12月期間在解放軍第二五一醫(yī)院就診的首發(fā)非小細(xì)胞肺癌患者80例，設(shè)為非小細(xì)胞肺癌組，另以配對(duì)原則選擇同期在我院行體檢的健康人35例設(shè)為對(duì)照組，采用BD FACSVantage SE型流式細(xì)胞儀檢測(cè)2組受試者(肺癌組未經(jīng)治療前)外周血中T細(xì)胞亞群(CD8+、CD4+、CD3+水平值以及計(jì)算CD4+/CD8+值)與NK細(xì)胞水平，對(duì)入組肺癌患者以電話跟蹤隨訪方式調(diào)查生存時(shí)間，生存時(shí)間的定義為確診之日至患者死亡時(shí)間或者截止2016年2月29日的時(shí)間。結(jié)果 非小細(xì)胞肺癌組患者外周血中CD3+T細(xì)胞與CD4+T細(xì)胞水平較健康對(duì)照組均有明顯的下降(P<0.05)，而外周血中CD8+T細(xì)胞水平較健康對(duì)照組有明顯升高(P<0.05)，自然殺傷(NK)細(xì)胞水平較健康對(duì)照組無(wú)明顯變化(P>0.05)；非小細(xì)胞肺癌組患者在確診時(shí)淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移和非遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，TNM分期在Ⅰ～Ⅲa，行外科手術(shù)治療，CD8+水平在31.8%以上，CD4/CD8比值在1.28%以下，均可獲得更長(zhǎng)的生存時(shí)間(P<0.05)；生存時(shí)間的Cox多因素分析中，TNM臨床分期與CK8+T細(xì)胞水平是非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的2個(gè)獨(dú)立性影響因素(P<0.01)。結(jié)論 非小細(xì)胞肺癌患者的外周血中CD8+T細(xì)胞水平增高，可能預(yù)示著患者會(huì)有相對(duì)較長(zhǎng)的生存期，通過(guò)測(cè)定初診非小細(xì)胞肺癌患者外周血中 CD8+T細(xì)胞水平可在一定程度上反應(yīng)患者的預(yù)后。

非小細(xì)胞肺癌；T細(xì)胞亞群；NK細(xì)胞；臨床預(yù)后

肺癌是臨床中最為常見(jiàn)的肺部原發(fā)性惡性腫瘤，近10年來(lái)，全球各國(guó)肺癌的臨床發(fā)病率以及死亡率均在不斷上升，預(yù)計(jì)到2025年我國(guó)的肺癌患者或?qū)⒊^(guò)100萬(wàn)，臨床防治工作極為嚴(yán)峻。肺癌主要臨床分型為小細(xì)胞肺癌(small cell lung cancer, SCLC)及非小細(xì)胞肺癌(non small cell lung cancer, NSCLC)，其中以NSCLC最為常見(jiàn)，大約占到肺癌總發(fā)生率的85%。有研究[1]指出，肺癌的發(fā)生以及發(fā)展與機(jī)體免疫功能的紊亂，特別是和T細(xì)胞亞群分布紊亂密切相關(guān)。目前臨床對(duì)非小細(xì)胞肺癌患者的外周血T細(xì)胞亞群分布紊亂研究較多，但對(duì)初診非小細(xì)胞肺癌患者外周血中的T細(xì)胞亞群水平與疾病預(yù)后的關(guān)系研究較少。本研究通過(guò)測(cè)定初診肺癌患者的外周血中T細(xì)胞亞群和自然殺傷(NK)細(xì)胞水平，結(jié)合臨床病理及生存期隨訪進(jìn)行綜合分析，探討T細(xì)胞亞群與NK細(xì)胞在初診非小細(xì)胞肺癌患者機(jī)體中的水平以及與臨床預(yù)后的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2011年1月至2014年1月期間在解放軍第二五一醫(yī)院就診的首發(fā)肺癌患者80例，入組標(biāo)準(zhǔn)：通過(guò)病理組織學(xué)證實(shí)為非小細(xì)胞肺癌；有完整的臨床病例資料；患者試驗(yàn)前都沒(méi)有采取放化療治療或者外科手術(shù)治療。排除合并嚴(yán)重的感染性疾病或者機(jī)體自身免疫疾病者及近3個(gè)月內(nèi)使用過(guò)大劑量的免疫抑制劑者。入組的80例肺癌患者(設(shè)為NSCLC組)中，男52例，女28例；年齡40～80歲，平均(61.3±7.3)歲；TNM分期情況：Ⅰ期者13例，Ⅱ期者8例，Ⅲ期者21例，Ⅳ期者38例。另以配對(duì)原則選擇同期在我院體檢的健康人35例設(shè)為對(duì)照組，男23例，女12例；年齡40～80歲，平均(62.1±6.8)歲。2組受試者在性別比和年齡方面比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，可作對(duì)比研究。本次研究得到本院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，受試者以及家屬對(duì)本次研究知情并自愿簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法 采用BD FACSVantage SE型流式細(xì)胞儀以及相關(guān)抗體，對(duì)2組受試者(肺癌組未經(jīng)治療前)外周血中T細(xì)胞亞群(CD8+、CD4+、CD3+水平值以及計(jì)算CD4+/CD8+值)及NK細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)。肺癌患者在完成外周血T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞水平檢測(cè)后，都采取單純化療或者放化療治療。13例肺癌Ⅰ期患者中，6例手術(shù)以后進(jìn)行4個(gè)療程的輔助化療，另7例患者為手術(shù)后肺癌復(fù)發(fā)再采取化療，肺癌復(fù)發(fā)的時(shí)間為術(shù)后16～18個(gè)月。29例Ⅱ～Ⅲ期肺癌患者都在外科手術(shù)后采取4個(gè)療程的輔助化療，38例Ⅳ期肺癌患者都采取標(biāo)準(zhǔn)化療。患者化療的方案：參照美國(guó)國(guó)立綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)指南標(biāo)準(zhǔn)(2015年)，采取含鉑雙藥方案(紫杉醇+鉑類(lèi)、吉西他濱，鉑類(lèi)、長(zhǎng)春瑞濱等)，其中有24例患者在化療至瘤相對(duì)穩(wěn)定以后，采取胸部立體定向放療。對(duì)入組肺癌患者以電話跟蹤隨訪方式，調(diào)查生存時(shí)間，生存時(shí)間的定義為確診之日至患者死亡時(shí)間或者截止2016年2月29日的時(shí)間。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，采取獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)以及單因素方差分析。生存時(shí)間的單因素分析采用Kaplan-Meier法，采用Log-rank檢驗(yàn)。對(duì)生存時(shí)間單因素分析的結(jié)果，再運(yùn)用Cox回歸行多因素分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組外周血中T細(xì)胞和NK細(xì)胞水平比較 NSCLC組患者外周血中CD3+T細(xì)胞與CD4+T細(xì)胞水平較健康對(duì)照組均有明顯下降(P<0.05)，而外周血中CD8+T細(xì)胞水平較健康對(duì)照組有明顯升高(P<0.05)，NK細(xì)胞水平較健康對(duì)照組無(wú)明顯變化(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 NSCLC組與健康對(duì)照組外周血中T細(xì)胞和NK細(xì)胞水平的比較(x±s)

注：NSCLC：非小細(xì)胞肺癌，NK：自然殺傷性淋巴細(xì)胞

2.2 NSCLC組預(yù)后分析 NSCLC患者在確診時(shí)若淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移和非遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，TNM分期在Ⅰ～Ⅲa，行外科手術(shù)治療；CD8+水平在31.8%以上，CD4/CD8比值在1.28%以下，均可獲得更長(zhǎng)的生存時(shí)間(P<0.05)，其他因素對(duì)生存時(shí)間均無(wú)明顯影響(P>0.05)。見(jiàn)表2。

2.3 NSCLC組患者生存時(shí)間的Cox多因素分析 將有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移、TNM不同分期、是否行外科手術(shù)、CD8+T細(xì)胞水平以及CD4/CD8的比值等單因素生存時(shí)間分析所得出的結(jié)果，再進(jìn)行生存時(shí)間Cox多因素分析，結(jié)果顯示，TNM臨床分期與CK8+T細(xì)胞水平是非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的2個(gè)獨(dú)立性影響因素(HR=2.554，P<0.01；HR=1.942，P=0.008)。

3 討論

隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，臨床對(duì)免疫機(jī)制的研究也越來(lái)越深入。目前，國(guó)內(nèi)外研究人員均證實(shí)，肺癌發(fā)生以及發(fā)展都和人體免疫細(xì)胞特別是與體內(nèi)T細(xì)胞亞群、NK細(xì)胞有著緊密的聯(lián)系。T細(xì)胞亞群中主要類(lèi)型為CD3+、CD4+、CD8+等T細(xì)胞，免疫細(xì)胞在保持機(jī)體免疫系統(tǒng)功能平衡、發(fā)揮人體自身免疫功能中扮演著主要角色。T細(xì)胞亞群與NK 細(xì)胞已成為目前臨床監(jiān)測(cè)腫瘤發(fā)展趨勢(shì)、預(yù)估治療效果及預(yù)后的重要指標(biāo)[2]。

3.1 NSCLC患者體內(nèi)的T細(xì)胞亞群存在明顯的變化 CD3+是反應(yīng)細(xì)胞整體免疫狀態(tài)的T細(xì)胞，而CD4+T細(xì)胞是輔助性T細(xì)胞，其在抑制腫瘤的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移方面發(fā)揮著重要作用。本研究顯示，80例初診非小細(xì)胞肺癌患者外周血中CD3+T細(xì)胞與CD4+T細(xì)胞水平較健康對(duì)照組均有明顯的下降，證實(shí)肺癌患者體內(nèi)的T細(xì)胞亞群存在明顯的變化。Ganesan等[3]研究認(rèn)為，肺癌患者在各種抑制因素綜合的影響下使得機(jī)體處在完全免疫功能抑制狀態(tài)， 可抑制CD4+T細(xì)胞與CD3+T細(xì)胞的分化以及成熟。

表2 NSCLC組患者生存時(shí)間Kaplan-Meier單因素分析

注：NSCLC：非小細(xì)胞肺癌

CD8+T細(xì)胞能夠在分化成細(xì)胞毒性 T細(xì)胞后殺傷體內(nèi)的腫瘤細(xì)胞。本次研究結(jié)果顯示，98例初診肺癌患者外周血中CD8+T細(xì)胞水平要明顯高于健康對(duì)照組，這一結(jié)果與李月雅等[4]的研究結(jié)果相一致，這提示，肺癌患者機(jī)體免疫系統(tǒng)可能會(huì)本能性地產(chǎn)出較多具有殺傷性的CD8+T細(xì)胞。由于肺癌患者體內(nèi) CD4+T細(xì)胞水平的下降、CD8+T細(xì)胞水平的上升，直接致使本組肺癌患者CD4/CD8值的下降。NK細(xì)胞能夠直接殺傷體內(nèi)腫瘤細(xì)胞，其水平的降低可反應(yīng)出機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的下降。本組研究結(jié)果顯示，98例初診肺癌患者體內(nèi)NK細(xì)胞含量要明顯低于對(duì)照組，表明肺癌患者機(jī)體免疫功能受到一定程度的損害，這一結(jié)果與江金華等[5]的研究結(jié)果相一致。

3.2 T細(xì)胞亞群含量水平變化與NSCLC患者預(yù)后的相關(guān)性分析 本研究結(jié)果顯示， NSCLC患者在確診時(shí)如淋巴結(jié)無(wú)轉(zhuǎn)移，非遠(yuǎn)端轉(zhuǎn)移，TNM分期在Ⅰ～Ⅲa，行外科手術(shù)治療，CD8+T水平在31.8%以上，CD4/CD8比值在1.28%以下，均可獲得更長(zhǎng)的生存時(shí)間；其他因素對(duì)生存時(shí)間均無(wú)明顯影響。將單因素生存時(shí)間分析所得出的結(jié)果，再進(jìn)行生存時(shí)間Cox多因素分析，結(jié)果顯示，TNM臨床分期與CK8+T細(xì)胞水平是非小細(xì)胞肺癌患者預(yù)后的2個(gè)獨(dú)立性影響因素。

目前有研究指出，CD8+T細(xì)胞是機(jī)體獲得性免疫的最主要的功能性細(xì)胞，能起到免疫抑制作用，能夠抑制自然殺傷性淋巴細(xì)胞的毒性與活性，且有效抵制T 細(xì)胞的大量增殖，在對(duì)抗惡性腫瘤免疫中的作用極為重要。Wahlin等學(xué)者[6]研究指出，淋巴結(jié)內(nèi) CD8+T細(xì)胞水平高的患者有更好的預(yù)后。而本研究也證實(shí)，外周血中CD8+T細(xì)胞水平是影響NSCLC患者預(yù)后的獨(dú)立性因子，當(dāng)初診時(shí)CD8+T細(xì)胞水平超過(guò)31.8%時(shí)，患者會(huì)有更長(zhǎng)的生存期。

綜上所述，NSCLC患者外周血中CD8+T細(xì)胞水平增高，可能預(yù)示著患者會(huì)有相對(duì)較長(zhǎng)的生存期，通過(guò)測(cè)定初診NSCLC患者外周血中 CD8+T 細(xì)胞水平可在一定程度上反應(yīng)患者的預(yù)后。本次研究存在樣本數(shù)量較少這一局限性，對(duì)于NSCLC患者T淋巴細(xì)胞亞群具體分布水平以及與預(yù)后的準(zhǔn)確相關(guān)性還需要大樣本病例來(lái)進(jìn)行臨床驗(yàn)證。

[1] 吳姍姍，嚴(yán)峰，鄧玉玲，等. 小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌晚期患者 CD3+、CD4+及CD3+、CD8+T淋巴細(xì)胞亞群的差異[J]. 中國(guó)免疫學(xué)雜志, 2015, 31(1): 114-116,121. DOI:10.3969/j.issn.1000-484X.2015.01.024.

[2] 燕翔，焦順昌. 腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞與非小細(xì)胞肺癌預(yù)后關(guān)系的Meta分析[J]. 中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào), 2015, 37(4): 406-414. DOI:10.3881/j.issn.1000-503X.2015.04.007.

[3] Ganesan AP, Johansson M, Ruffell B, et al. Tumor-infiltrating regulatory T cells inhibit endogenous cytotoxic T cell responses to lung adenocarcinoma[J]. J Immunol, 2013, 191(4): 2009-2017. DOI:10.4049/jimmunol.1301317.

[4] 李月雅，張翠翠，魏熙胤，等. 肺癌患者外周血T-淋巴細(xì)胞亞群NK細(xì)胞的基線數(shù)值及其與預(yù)后的關(guān)系[J]. 中國(guó)腫瘤臨床, 2016, 43(5): 204-210.

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[6] Wahlin BE, Sander B, Christensson B, et al. CD8+T-cell content in diagnostic lymph nodes measured by flow cytometry is a predictor of survival in follicular lymphoma[J]. Clin Cancer Res, 2007, 13(2 Pt 1): 388-397. DOI:10.1158/1078-0432.CCR-06-1734.

(本文編輯：彭潤(rùn)松)

張家口科學(xué)技術(shù)局項(xiàng)目(1021129D)

075000 河北 張家口，解放軍第二五一醫(yī)院腫瘤一科

R734.2

A

10.3969/j.issn.1009-0754.2017.02.026

2016-08-26)