松乳菇多糖對人喉癌Hep-2細胞腫瘤相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響

劉 影,丁 祥,2,劉 露,閆香慧,錢 葉,侯怡鈴,*

(1.西華師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,西南野生動植物資源保護教育部重點實驗室,四川南充 637009;2.西華師范大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院,四川南充 637009)

松乳菇多糖對人喉癌Hep-2細胞腫瘤相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的影響

劉 影1,丁 祥1,2,劉 露1,閆香慧1,錢 葉1,侯怡鈴1,*

(1.西華師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,西南野生動植物資源保護教育部重點實驗室,四川南充 637009;2.西華師范大學(xué)環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院,四川南充 637009)

運用基因芯片技術(shù)分析松乳菇多糖對人喉癌Hep-2細胞腫瘤相關(guān)基因表達的影響及分子機制。結(jié)果表明,經(jīng)松乳菇多糖600 μg/mL處理48 h后,在人喉癌Hep-2細胞中發(fā)現(xiàn)相關(guān)腫瘤差異基因共68個,其中人喉癌Hep-2細胞腫瘤相關(guān)基因下調(diào)倍數(shù)大于100倍的基因共8個,下調(diào)50～100倍的基因共14個,同時按基因轉(zhuǎn)錄水平將這些基因進行了分類。運用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析技術(shù)分析相關(guān)基因通路,結(jié)果顯示松乳菇多糖主要抑制人喉癌Hep-2細胞中的MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和PI3K-AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。在松乳菇多糖的刺激作用下,人喉癌Hep-2細胞的凋亡是多種基因共同作用的綜合結(jié)果。用篩選出的基因進一步研究腫瘤凋亡的分子機制,對尋找潛在的抗腫瘤作用靶點具有重要生物學(xué)意義。

松乳菇多糖,人喉癌Hep-2細胞,基因芯片,凋亡

松乳菇(Lactariusdeliciosus(L.ex Fr.)Gray)為擔(dān)子菌亞門、層菌綱、傘菌目、紅菇科、乳菇屬的真菌,是一種純天然的珍稀的野生可食用菌類。松乳菇多數(shù)是植物外生菌根菌,主要分布于溫帶地區(qū)的松林地帶。松乳菇含有羧基有機酸、羥基酚類、多糖類、倍半萜烯類等多種生理活性物質(zhì),在生物醫(yī)藥行業(yè)和植物林業(yè)病蟲害的生物防治方面有廣闊的應(yīng)用前景[1-6]。多糖又稱多聚糖,是由聚合度大于10的單糖通過糖苷鍵聚合脫水形成的極性復(fù)雜大分子,分子量大小一般為1～100 ku,是生命活動中需要的四大基本物質(zhì)的一員,維持生命所需的多種生理功能。至今,從天然產(chǎn)物中分離出來的多糖類化合物己有300余種,其中,從藥用植物和食藥用真菌中提取出來的水溶性多糖最為重要,并已發(fā)現(xiàn)從很多藥用植物、食藥用真菌提取的糖以及糖綴合物具有很廣泛的藥理及生物活性。近20年來,已有較多學(xué)術(shù)研究對多糖生物活性的免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗氧化和抗輻射等方面進行報道[7-8]。

在前期實驗研究中,從食用真菌松乳菇(Lactariusdeliciosus(L.ex Fr.)Gray)中純化所得的水溶性的松乳菇多糖(LDG-A),運用光譜學(xué)技術(shù)解析了其結(jié)構(gòu)(圖1),結(jié)果顯示其為一種結(jié)構(gòu)新穎的多糖(LDG-A)[9]。此多糖是由兩個單糖以糖苷鍵的方式組成的雜多糖,即α-L-甘露糖和α-D-木糖,以3∶1的比例混合組成,平均分子量約為11 ku,具有(1-6)α-L-甘露糖的骨架,2-O上連接一個→3)-α-D-木糖的側(cè)鏈,且松乳菇多糖(LDG-A)對人喉癌Hep-2細胞顯示了較強的抑制作用,濃度為600 μg/mL時,最高抑制率達到50.8%[10],但相關(guān)分子機制仍不清楚。

本文的主要目的是探究在LDG-A的刺激下,人喉癌Hep-2細胞腫瘤相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄的變化影響,以研究其抗腫瘤活性的機制,探尋潛在的抗腫瘤作用靶點,為LDG-A誘導(dǎo)人喉癌Hep-2細胞凋亡的分子機制研究提供一定的科學(xué)依據(jù)。

圖1 松乳菇多糖(LDG-A)的結(jié)構(gòu)Fig.1 The structure of polysaccharide LDG-A

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

LDG-A 本實驗室前期分離純化;人喉癌Hep-2細胞系 川北醫(yī)學(xué)院;細胞培養(yǎng)基RPMI-1640 gibco公司,LOT:1785905;胎牛血清 CLARK公司,Cat No:JC39761;青鏈霉素雙抗溶液Penicillin-Streptomycin gibco公司;mRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒 楚天生物,Cat No:CTB101;實時熒光定量PCR檢測試劑盒Real-Time PCR Master Mix 楚天生物,Cat No:CTB103;熒光定量PCR混合液SYBR Master Mix 楚天生物,Cat No:CTB103;楚天生物PCR 芯片 楚天生物芯片有限公司。

Real-time PCR 儀 購于Bio-rad公司,No:CFX96。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞培養(yǎng) 將Hep-2細胞接種于含有熱滅活10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中,在濃度為5%的CO2培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng),取在對數(shù)生長期的細胞使其細胞濃度調(diào)整為5×104mL,細胞貼壁率至少達到80%后,加LDG-A處理細胞(終濃度控制為600 μg/mL),在37 ℃、5% CO2、飽和濕度下常規(guī)培養(yǎng)48 h。對照組除不加松乳菇多糖LDG-A外,其余操作相同。培養(yǎng)板上每組各設(shè)3個復(fù)孔。

1.2.2 RNA抽提及RNA反轉(zhuǎn)錄 依次用細胞計數(shù)器從每個樣品中取出5×104個細胞,采用Unizol 法來抽提細胞總RNA,電泳后,結(jié)果顯示18S和28S RNA的條帶非常清晰,流程參照楚天生物mRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書來進行RNA 反轉(zhuǎn)錄具體操作。等反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)結(jié)束以后,用ddH2O將反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物稀釋至100 μL備用。

1.2.3 PCR芯片Real-Time PCR檢測 取出熒光定量PCR混合液(SYBR Master Mix),使其充分融解,同時上下輕微顛倒使其混合均勻,稍稍短暫離心(5000 r/min)后放置在冰上備用。處理SYBR Master Mix的同時取出楚天生物PCR芯片,將其溫度調(diào)至室溫且短暫離心(5000 r/min)后待用。依照說明書配制PCR的反應(yīng)液且充分混勻,精確仔細分取PCR反應(yīng)液20 μL加至96孔PCR芯片中,用熱封模封好,少許離心(5000 r/min),進一步確保所有的試劑都在反應(yīng)管底部。PCR反應(yīng)程序循環(huán)條件為:預(yù)變性95 ℃ 5 min,變性95 ℃ 15 s,退火60 ℃ 1 min,延伸72 ℃ 45 s,40個循環(huán)。熔解曲線分析條件為:95 ℃×5 s,65 ℃×1 min,95 ℃×0 s,冷卻40 ℃×30 s。

1.2.4 數(shù)據(jù)分析 本研究采用經(jīng)典ΔΔCt法做相對定量。在這次實驗中,ΔΔCT方程式為:ΔΔCT=(CT目標(biāo)樣本-CT參考樣本)-(CT目標(biāo)空白對照-參考空白對照)。ΔΔCT用于計算表達倍的變化。其計算公式如下:實驗組目標(biāo)基因的表達水平/空白對照組目標(biāo)基因的表達水平=2(-ΔΔCT)。

圖2 LDG-A誘導(dǎo)人喉癌Hep-2細胞凋亡的相關(guān)腫瘤差異基因散點圖Fig.2 The differential gene expression of in Hep-2 cells treated by LDG-A

2 結(jié)果與分析

前期研究發(fā)現(xiàn),LDG-A對人喉癌Hep-2細胞有較強的抑制作用。終濃度為600 μg/mL時,LDG-A對人喉癌Hep-2細胞的最高抑制率達到50.8%。為探究LDG-A誘導(dǎo)人喉癌Hep-2細胞凋亡的分子機制,使用基因芯片技術(shù)檢測分析了人喉癌Hep-2細胞中腫瘤相關(guān)的88個基因。

2.1 LDG-A誘導(dǎo)人喉癌Hep-2細胞凋亡的相關(guān)腫瘤差異基因散點圖

表1 LDG-A作用Hep-2細胞導(dǎo)致上調(diào)的差異表達基因

表2 LDG-A作用Hep-2細胞導(dǎo)致下調(diào)100倍以上的差異表達基因

表3 LDG-A作用Hep-2細胞導(dǎo)致下調(diào)50～100倍的差異表達基因

結(jié)果顯示,把實驗組與空白組相比較,有明顯差異的基因共68個,涉及細胞因子、信號傳導(dǎo)、細胞凋亡和細胞周期等相關(guān)基因,其中5個基因表達上調(diào),63個基因表達下調(diào)(圖2)?；虮磉_下調(diào)100倍以上有8個,50～100倍有14個,50倍以下41個。

2.2 基因的分類

按基因表達水平將基因表達上調(diào)、下調(diào)100倍以上及50～100倍的基因進行分類，具體結(jié)果見表1～表3。

2.3 LDG-A抑制表皮生長因子受體家族基因的表達變化

表皮生長因子受體EGFR(Epidermal growth factor receptor,簡稱為EGFR、ErbB-1或HER1)是表皮生長因子受體(HER)家族成員之一。該家族包括HER1(erbB1,EGFR)、HER2(erbB2,NEU)、HER3(erbB3)及HER4(erbB4)。在細胞中HER家族有重要的調(diào)節(jié)作用。EGFR大部分分布于哺乳動物上皮細胞、膠質(zhì)細胞、成纖維細胞、角質(zhì)細胞等細胞表面,EGFR信號通路對細胞的生理過程有極為重要的作用[11]。在LDG-A的作用下,人喉癌Hep-2細胞中EGFR、E40OG、ERBB3都呈不同程度的下調(diào),其中E40OG下調(diào)76.30倍,EGFR下調(diào)273.09倍,提示LDG-A通過抑制表皮生長因子受體(HER)家族,抑制信號傳至胞核內(nèi),導(dǎo)致核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子無法磷酸化,抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄,最終抑制腫瘤細胞生長和導(dǎo)致腫瘤細胞凋亡。

2.4 LDG-A抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β基因的表達

轉(zhuǎn)化生長因子-β(Transforming growth factor-β,TGF-β)是近來發(fā)現(xiàn)TGF-β超家族的成員,其功能是調(diào)節(jié)細胞生長和分化。在松乳菇多糖的刺激作用下,人喉癌Hep-2細胞中TGFβ1下調(diào)了105.03倍,提示LDG-A通過抑制轉(zhuǎn)化生長因子-β,從而抑制腫瘤周圍基質(zhì)環(huán)境的改變,抑制上皮細胞間充質(zhì)的轉(zhuǎn)化,抑制血管新生,從而抑制腫瘤細胞生長和導(dǎo)致腫瘤細胞凋亡。[12]。

2.5 LDZ-A抑制髓樣分化因子MYD88的基因表達

髓樣分化因子(Myeloiddifferentiationfactor88,MyD88)是Toll樣受體(Toll-likereceptor,TLR)信號通路中的一個關(guān)鍵接頭分子,在傳遞上游信息的過程中發(fā)揮重要作用,在疾病的發(fā)生發(fā)展中也起一定生理作用[13]。MyD88,一種胞質(zhì)可溶性蛋白質(zhì),為Toll/IL-lR家族和死亡結(jié)構(gòu)域家族組員之一,在松乳菇多糖LDG-A的作用下,人喉癌Hep-2細胞中MyD88下調(diào)63.30倍,提示LDG-A通過抑MyD88蛋白,從而抑制調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄因子kappa B(NF-κB)產(chǎn)生,導(dǎo)致腫瘤細胞生長抑制和腫瘤細胞凋亡[14]。

2.6 LDG-A影響Asp特異性半胱氨酸蛋白酶Casp家族的基因變化

細胞凋亡由Asp特異性半胱氨酸蛋白酶(Caspartate-specific cysteinyl-proteinase,Caspase或Casp)家族介導(dǎo),活化Casp,引發(fā)酶級聯(lián)效應(yīng),最終使細胞內(nèi)的染色體DNA降解,隨后細胞膜解體,細胞破裂死亡,因此Asp特異性半胱氨酸蛋白酶又稱為死亡蛋白酶。研究發(fā)現(xiàn),Casp家族在細胞凋亡和炎癥反應(yīng)過程中,已經(jīng)有14種Casp(1-14)參與其中。Casp按功能分為啟動子Casp(Casp-2,8,9,10)和效應(yīng)子Casp(Casp-3,6,7)。被激活的效應(yīng)子由啟動子啟動激活,效應(yīng)為:細胞凋亡。而啟動子Casp則被特定的結(jié)合蛋白、其他Casp及本身激活,使凋亡信號與Casp結(jié)合,改變構(gòu)型,決定兩種基本凋亡途徑,即線粒體途徑和死亡受體途徑[15]。在LDG-A的作用下,人喉癌Hep-2細胞中CASP2下調(diào)57.94倍,提示LDG-A誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡并不依賴于線粒體途徑和死亡受體途徑兩種基本凋亡途徑。

2.7 LDG-A影響CD40L基因轉(zhuǎn)錄

白細胞分化呈遞的抗原40和其配體(CD40/CD40L)能提高腫瘤細胞的抗原遞呈能力,上調(diào)內(nèi)源腫瘤肽的表達,從而提高腫瘤的免疫應(yīng)答[16-17]。在LDG-A的作用下,人喉癌Hep-2細胞中CD40LG下調(diào)87.88倍,提示LDG-A可影響腫瘤細胞的免疫應(yīng)答。

2.8 影響絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)家族的基因通路

MAPK屬于絲氨酸-蘇氨酸蛋白激酶。MAPK通路主要包括MAPK激酶激酶(MAP kinase kinase kinase,MKKK)、MAPK激酶(MAP kinase kinase,MKK)和MAPK依次被激活,一起調(diào)控著細胞的多種重要的細胞生理或病理過程[18-19]。在LDG-A的作用下,人喉癌Hep-2細胞中MAP3K1、MAP3K10、MAP3K11、MAP3K14、MAP3K5、MAPK1、MAPK3、MAPK8、MAPK9基因均呈現(xiàn)不同程度的下調(diào),其中MAP3K10,MAP3K14,MAPK3 分別下調(diào)83.90倍,183.46倍和67.02倍。KEGG通路分析顯示在松乳菇多糖的刺激作用下,人喉癌Hep-2細胞基因中的MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通道被抑制(圖3),提示松乳菇多糖(LDG-A)通過抑制MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制腫瘤細胞生長和導(dǎo)致腫瘤細胞凋亡。

圖3 松乳菇多糖LDG-A影響人喉癌Hep-2細胞中MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路Fig.3 MAPK signal transduction pathway in human laryngeal carcinoma Hep-2 cells was affected by the polysaccharide(LDG-A)注:長方形標(biāo)記的基因為涉及的下調(diào)基因;圖4同。

2.9 影響PI3K-AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的相關(guān)基因通路

PI3K家族中Ⅰ型PI3K被研究的最多,是被細胞表面受體所激活的蛋白Ⅰ型PI3K,在哺乳動物細胞中又被分為ⅠA和ⅠB兩個亞型,ⅠA從酪氨酸激酶連接受體開始傳遞信號,ⅠB 從G蛋白連接受體開始傳遞信號。由催化亞單位p110和調(diào)節(jié)亞單位p85結(jié)合,構(gòu)型發(fā)生改變組成新的結(jié)構(gòu)ⅠA型PI3K,新的結(jié)構(gòu)具有類脂激酶和蛋白激酶的兩種活性的功能[20-22];PI3K被激活有兩種方式,一種方式是和具磷酸化酪氨酸殘基的生長因子受體或連接蛋白相互作用,改變此聚體的構(gòu)象而被激活,另一種方式是由Ras蛋白和p110蛋白直接結(jié)合,PI3K被活化,結(jié)果產(chǎn)生第二信號,即Akt蛋白,Akt蛋白和PDK1相互作用,由此促使PDK1磷酸化Akt蛋白的Ser308而使Akt的活化;活化的Akt通過磷酸化作用激活或抑制其下游靶蛋白Bad、Caspase9、NF-kB、FKHR、GSK-3、p21Cip1和p27Kip1等,以進而調(diào)節(jié)細胞的多種細胞生理或病理過程[23]。在松乳菇多糖(LDG-A)的作用下,Hep-2細胞中JAK、PIK3CA,PIK3CG,PIK3R2,AKT1,AKT2,AKT3,APAF1均有不同程度下調(diào),其中AKT1,AKT2分別下調(diào)76.92倍和120.48倍。KEGG通路分析顯示在松乳菇多糖的刺激作用下,人喉癌Hep-2細胞基因中的PI3K-AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通道被抑制(圖4),提示松乳菇多糖(LDG-A)通過抑制PI3K-AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制腫瘤細胞生長和導(dǎo)致腫瘤細胞凋亡。

圖4 LDG-A影響人喉癌Hep-2細胞中PI3K-AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路Fig.4 PI3K-AKT signal transduction pathway in human laryngeal carcinoma Hep-2 cells affected by the polysaccharide(LDG-A)

3 結(jié)論

在LDG-A作用下,人喉癌Hep-2細胞增殖被抑制,部分細胞被誘導(dǎo)凋亡,這是一個多基因共同參與、協(xié)同作用的過程。其中,5個基因顯示上調(diào),63個基因顯示下調(diào),KEGG通路分析結(jié)果顯示LDG-A主要抑制人喉癌Hep-2細胞中的MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和PI3K-AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。比較LDG-A作用前后基因表達譜的改變,可以深入研究這些差異表達的基因及之間的聯(lián)系和相互的調(diào)控機制,為LDG-A誘導(dǎo)人喉癌Hep-2細胞凋亡的分子機制的研究提供更多的科學(xué)依據(jù)。

[1]熊濤,肖滿. 松乳菇研究進展[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè),2005,31(5):84-86.

[2]Ayer W A,Trifonov L S. Aromatic compounds from liquid culture of Lactarius delicious[J].Journal of Natural Products,1994,57(6):839-841.

[3]Bergendorff O,Sterner O. The sesquiterpenes of Lactarius delicious and Lactarius deterrimus[J]. Phytochemistry,1988,27(1):97-100.

[4]Ke LX,Yang XT,Jong SC. Isolation and partial analysis of a polysaccharide-protein complex from Lactarius deliciosus[J]. Micologia Aplicada International,2003,15(2):45-50.

[5]柯麗霞. 松乳菇的抗菌活性研究[J]. 安徽師范大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2002,25(1):63-64.

[6]任慧波,杜麗飛,肖兵南,等. 松乳菇菌絲體胞內(nèi)多糖與胞外多糖體外抑菌實驗[J]. 飼料工業(yè),2009,30(20):31-32.

[7]Carolyn RB,Laura LK. Chemical glycobioloy[J]. Science,2001,291(5512):2357-2364.

[8]李建平,何軒,姜蓉,等. 人參多糖對K562細胞基因表達譜的影響[J]. 中草藥,2011,45(5):940-943.

[9]Ding X,Hou Y,Hou W. Structure feature and antitumor activity of a novel polysaccharide isolated from Lactarius deliciosus Gray[J]. Carbohydrate Polymers,2012,89(2):397-402.

[10]陳楊瓊,丁祥,伍春蓮,等. 松乳菇多糖抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)活性研究[J]. 食用菌學(xué)報,2012,19(3):73-78.

[11]劉彤華. 表皮生長因子受體家族與靶向性抗癌治療[J]. 中華病理學(xué)雜志,2006,35(10):577-579.

[12]俞清翔. 轉(zhuǎn)化生長因子β與腫瘤轉(zhuǎn)移的研究進展[J]. 世界華人消化雜志,2006,14(25):2538-2541.

[13]趙鑫鑫,趙慧玲,汪艷秋. 髓樣分化因子MyD88與天然免疫系統(tǒng)中Toll樣受體的關(guān)系[J],安徽農(nóng)學(xué)通報,2011,17(7):50-51.

[14]孫善美,宋魯成. TLR4與腫瘤細胞凋亡相關(guān)性的研究進展[J]. 臨床腫瘤學(xué)雜志,2016,21(7):661-664.

[15]劉正清,金道忠,馬志健. 死亡蛋白酶與細胞凋亡調(diào)控及機制[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2002,12(1):30-32.

[16]楊灝,賀福初,周鋼橋. CD40L/CD40軸的生物學(xué)功能及其與疾病的關(guān)系研究進展[J]. 蘇州大學(xué),國際免疫學(xué)雜志,2007,30(6):384-388.

[17]王新,劉群. 中國人群CD40LG基因單核苷酸多態(tài)性對急性冠狀動脈綜合征影響的相關(guān)性研究[J]. 中國動脈硬化雜志,2012,20(1):64-68.

[18]吳冬,歐俊,惠寧. 絲裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與卵巢上皮癌[J]. 腫瘤,2007,27(8):676-678.

[19]侯學(xué)伶,李祥,彭宏君,等. EV71感染橫紋肌肉瘤細胞與MAPK信號通路分子基因差異表達的相關(guān)性[J]. 臨床檢驗雜志,2012,30(8):605-609.

[20]韋士勤,李常穎,李保國,等. 沉默PIK3C2B基因的表達可抑制前列腺癌PC-3細胞的增值及侵襲[J]. 腫瘤,2015,35(10):1063-1069.

[21]齊亞飛. PI3K/Akt信號通路與卵巢癌耐藥關(guān)系的研究[J]. 中國醫(yī)科大學(xué),2008(5):657-660.

[22]王生才,房居高,倪鑫,等. RNA干擾介導(dǎo)的PIK3CA基因沉默抑制Hep-2細胞增值和侵襲力[J]. 中國耳鼻喉頭頸外科,2009,16(3):119-122.

[23]蒲蓉,李為民,劉丹,等. AKT2及磷酸化AKT2在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義[J]. 四川大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)報,2010,41(4):586-589.

Effect ofLactariusdeliciosus(L. ex Fr.)Gray polysaccharides(LDG-A) on tumor associated genes in human laryngeal carcinoma Hep-2 cells

LIU Ying1,DING Xiang1,2,LIU Lu1,YAN Xiang-hui1,QIAN Ye1,HOU Yi-ling1,*

(1.Key Laboratory of Southwest China Wildlife Resources Conservation(Ministry of Education),College of Life Sciences,China West Normal University,Nanchong 637009,China;2.College of Environmental Science and Engineering,China West Normal University,Nanchong 637009,China)

The gene expression and molecular mechanism of cell apoptosis in human laryngeal carcinoma Hep-2 cells induced byLactariusdeliciosusGray polysaccharide(LDG-A)were investigated using genes chips. The results showed there were total 68 genes,which expressed differently treated with LDG-A. Among the 68 genes,8 of them were down-regulated 100 times,and 14 of them were down-regulated 50～100 times. At the same time,these genes were classified according to their transcription level. Using the KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)pathway analysis technique to analyze the related gene pathway,the results showed that LDG-A mainly inhibited the MAPK signal pathway and PI3K-AKT signal pathway in Hep-2 cells. The apoptosis of human laryngeal carcinoma Hep-2 Cells was the combined result of interaction of multiple genes under the treatment of LDGA. Using these screened genes to further study the molecular mechanism of apoptosis of tumor had important biological significance in search for potential anticancer targets.

Lactariusdeliciosus(L. ex Fr.)Gray polysaccharide;human laryngeal carcinoma Hep-2 cells;gene chip;apoptosis

2016-08-29

劉影(1991-)，女，在讀碩士研究生，主要從事細胞生物學(xué)方面的研究，E-mail:827293725@qq.com。

*通訊作者:侯怡鈴(1983-)，女，博士，教授，主要從事生物化學(xué)與分子生物學(xué)方面的研究，E-mail:starthlh@126.com。

國家自然科學(xué)基金項目(31400016);四川省教育廳重大培育項目(14CZ0016)。

TS201.2

A

1002-0306(2017)06-0174-05

10.13386/j.issn1002-0306.2017.06.025